6 通过生物信息学预测MUC1的上游转录因子c-Jun;染色质免疫共沉淀(Chip)实验和双荧光素酶报告基因检测实验证实转录因子c

6.通过生物信息学预测MUC1的上游转录因子c-Jun;染色质免疫共沉淀(Chip)实验和双荧光素酶报告基因检测实验证实转录因子c-Jun是否与MUC1启动子区域结合;将c-Jun干扰序列和过表达序列转染卵巢癌细胞,qRT-PCR和western blot方法分别检测MUC1 m RNA和蛋白的表达。7.高糖处理卵巢癌细胞,对照时间组为无高糖处理,qRT-PCR和western blot方法检测卵巢癌细胞中c-Jun的m RNA和蛋白的表达;使用糖基化促进剂PUGNAc和GlcNAc处理卵巢癌细胞,未处理做为阴性对照,检测c-Jun的m RNA和蛋白的表达;放线菌酮(CHX)追踪实验检验c-Jun蛋白的稳定性;糖基化酶标实验和Co获悉更多-IP检测c-Jun糖基化情况;使用糖基化促进剂PUGNAc和GlcNAc处理卵巢癌细胞,同时敲减c-Jun,CCK8检测细胞增殖能力;细胞克隆形成实验检测克隆形成情况;流式细胞术(Annexin V/PI染色法)检测细胞凋亡;过表达c-Jun和MUC1,western blot检测O-GlcNAc糖基Protease Inhibitor Library research buy化水平。8.在卵巢癌细胞中过表达c-Jun,western blot检测O-GlcNAc糖基化相关蛋白(OGT、GUCY1A3、UAP1及SGLT1)的变化;过表达c-Jun后,再敲减SGLT1,western blot检测c-Jun蛋白的O-GlcNAc糖基化水平;敲减SGLT1后,qRT-PCR和western blot分别检测卵巢癌细胞MUC1 m RNA和蛋白的表达情况。

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