5mMβ-磷酸甘油的诱导培养液50ng/ml的FGF2进行培养。三组细胞在培养第3、6、9天分别进行矿化相关基因ALP, Runx2和ColIa1的表达量检测，并进行矿化结节定性、定量检测。（3）用ExoQuickTM试剂方法提取正常对照组、矿化诱导组和FGF2组Saos-2细胞的细胞外分泌物。然后，用电子显微镜检测分泌物形态，用western blot的方法检测基质小泡表面标志物CD63和CD9的表达情况。（4）用p-NPP检测基质小泡的ALP活性，然后将提取后的MVs在矿化缓冲溶液（SCL）中孵育12h, Torin 1化学结构 MVs可继续吸收钙离子形成羟基磷灰石。钙离子检测试剂盒检测三组MVs孵育完之后的钙离子浓度，以检测MVs的体外矿化能力。 结果：（1）茜素红染色结果显示矿化诱导组发生明显矿化，产生大量矿化结节，对照组只有少量矿化；矿化结节定量结果显示诱导组产生的矿化结节是正常对照组的5倍左右，说明我们成功构建了Saos-2的体外矿化模型。（2）FGF2明显抑制了Saos-2细胞矿化标志标志基因ALP,

Runx2和CoIa1的表达，并且减弱了细胞的矿化；证明FGF2对Saos-2细胞的成骨分化和矿化具有明显的抑制作用。（3）电镜观察发现采用ExoQuickTM试剂提取三组Saos-2细胞分泌物直径均在30-400nm之间，为膜包被小泡；Western Blot结果检测发现三组小泡均表达基质小泡标志蛋白CD63和CD9，成功提取了基质小泡。（4）ALP活性分析显示，FGF2组的ALP活性低于矿化诱导组；各组MVs孵育之后，钙离子浓度测定显示，FGF2组钙离子浓度明显低于矿化诱导组，FGF2明显抑制了基质小泡体外矿化能力。 结论：成纤维细胞生长因子-2长期作用于Saos-2细胞可明显抑制其矿化，并可通过抑制基质小泡的功能发挥其抑制作用。
冠状病毒隶属冠状病毒科,它主要导致机体上呼吸道和胃肠道的感染。猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)是冠状病毒的一种,能导致仔猪严重腹泻,给养猪业造成重大的经济损失。虽然疫苗接种已经广泛用于预防猪传染性胃肠炎病毒的感染,但是免疫效果并不理想,这种疾病的传播依然存在。然而,目前对于抗猪传染性胃肠炎病毒感染的药物研究还十分有限,因此开发能够预防和治疗猪传染性胃肠炎的药物迫在眉睫。

近年来,银纳米材料由于具有优良的抗微生物特性,已逐渐成为人们关注的热点。本研究以猪传染性胃肠炎作为冠状病毒模型,从细胞水平评价了3种不同的银纳米材料对猪传染性胃肠炎病毒感染宿主细胞及介导的细胞凋亡的抑制效果,并通过MMP、p38MAPK信号通路激活、Bcl-2家族蛋白的表达、半胱氨酸蛋白酶前体的降解等方面,进一步探讨可能的分子机制。研究结果如下： 应用环境扫描电子显微镜(ESEM)和透射电子显微镜(TEM)对包括银纳米颗粒(AgNPs)、两种银纳米线(Ag NWs60、Ag NWs400)3种有代表性的银纳米材料进行表征,发现银纳米颗粒分布均匀粒径小于20nm；两种银纳米线的直径分别在60nm和400nm。 寻找更多 采用免疫荧光法、实时定量PCR、流式细胞术以及免疫印迹法,研究了3种银纳米材料体外对猪传染性胃肠炎病毒感染宿主细胞抑制作用,MTT试验结果表明,在12.5μg/mL无毒浓度下,银纳米颗粒及两种银纳米线抑制猪传染性胃肠炎病毒抑制率可达到67.35%(AgNPs)、53.90%(Ag NWs60)和58.65%(Ag NWs400);免疫荧光和实时定量荧光PCR结果同样证实了三种银纳米材料能够显著地抑制猪传染性胃肠炎病毒对ST细胞的感染。猪传染性胃肠炎病毒感染细胞发生凋亡,其分子机制是通过下调抑凋亡蛋白Bcl-2、上调促凋亡蛋白Bax的表达,改变线粒体膜电位,激活p38MAPK信号通路以及增强转录因子p53表达。进一步研究结果表明,3种银纳米材料能够通过调控p38/线粒体-caspase-3信号通路进而减少细胞凋亡数量。

综上所述,银纳米材料可有效地抑制猪传染性胃肠炎病毒感染细胞,其作用机制是通过灭活病毒亦或阻断病毒侵入细胞；不同质量浓度PVP表面修饰的银纳米材料具有的抗病毒效果各不相同,这些均为开发新型抗冠状病毒药物提供新思路。
本文应用HE染色方法对再生障碍性贫血小鼠胃肠粘膜组织结构进行观察：结果显示：胃的柱状上皮细胞排列紊乱且细胞结构不完整；固有层腺体细胞不规整且分布松散。小肠粘膜柱状上皮细胞分布紊乱且细胞形态不规整；小肠隐窝处出现明显断裂且细胞分布减少；小肠粘膜绒毛脱落，表面纹状缘结构断裂、脱落，肠粘膜变薄；固有层腺体分布紊乱，出现有凋亡。大肠杯状细胞急剧减少；固有层内肠腺分布紊乱；粘膜层细胞出现凋亡。 或者 本文还分别应用Grimelius银染法和免疫组织化学ABC法（avidin-biotincompex method）对再障贫血小鼠胃肠粘膜内分泌细胞的变化进行研究：胃、小肠及大肠嗜银细胞及5-HT细胞着色变浅，形态结构、分布位置、分布密度、性质及功能发生病理学改变。 中药X方剂对再障贫血小鼠胃肠粘膜形态结构及内分泌细胞的治疗作用研究显示：中药X方剂对再障贫血小鼠胃肠粘膜形态结构及内分泌细胞的损伤有一定的治疗作用，且治疗效果显著，灌药一周后，各项指标均未恢复正常。灌药两周后，各项指标基本恢复正常。 结论：中药X方剂对再障贫血小鼠胃肠粘膜损伤有一定的治疗作用，在灌药两周，药剂量为0.8g.kg-1.