(3)应用Western blot、免疫荧光和微管形成等实验方法,通过信号通路抑制剂处理,从正反两方面探究Tiam1参与胃癌细胞EMT进程和调控PI3K/AKT/mTOR信号通路的机制应用Western blot和免疫荧光实验,检测Tiam1差异表达后EMT相关标志物的变化;应用Western blot检测TiGSK923295化学结构am1差异表达后PI3K/AKT/mTOR信号通路相关标志物的变化;之后进行反向验证,应用PI3K/AKT/mTOR信号通路特异性抑制剂LY294002和Rapamycin对Tiam1高表达的MKN-45/ex-Tiam1细胞系进行处理,检测处理后PI3K/AKT/mTOR信号通路相关INCB028050标志物的变化;通过划痕实验、迁移实验、浸润实验、HUVEC微管形成实验、HLEC微管形成实验等检测细胞迁移浸润能力及血管生成的变化;应用免疫荧光实验和Western blot检测经抑制剂LY294002和Rapamycin处理后EMT相关标志物的变化。结果(1)多个数据库分析显示TiaSU5416半抑制浓度m1在胃癌组织中高表达Human Protein Atlas数据库显示Tiam1在胃癌组织中的mRNA表达水平显著上调,在80%以上的胃癌患者中均呈高表达;cBioPortal数据库显示Tiam1在胃癌组织中呈高表达,Oncomine数据库的分析结果与之相一致(P<0.05);GEO数据库显示Tiam1在胃癌组织中的mRNA表达水平亦显著高于癌旁组织(P<0.01)。