261ng/mL。患者组HSP90水平明显高于对照组（P0.05），但均明显高于治疗有效组（P0.05），但接受含硼替佐米方案治疗的患者较接受不含硼替佐米方案治疗的患者HSP90水平降低更显著（P0.5，p0.05）。 结论： 本研究结果表明，MM患者外周血中存在分泌型HSP90的高表达，且HSP90表达水平与MM患者的ISS分期、疗效、骨髓瘤细胞比例、M蛋白、球蛋白、免疫球蛋白、β2-微球蛋白和血轻链水平明显相关，也即与体内骨髓瘤负荷呈正相关性，提示HSP90表达水平很可能与MM的发生、发展有关，HSP90水平的高低对于判断患者的病情、疗效和预后有一定意义，有可能成为MM治疗的新靶点。
Hsp90（Heat

shock protein，Hsp90）是一类在生物进化中高度保守的蛋白，是细胞中的一种伴侣分子，与细胞凋亡、客户蛋白的成熟及转运等生命活动密切相关。Hsp90作为一类抗癌新靶标也得到了广泛的关注。为了设计出具有良好结合模式新型的小分子化合物，本课题利用分子动力学的方法研究了Hsp90蛋白中重要的水分子以及新的活性口袋S3的变化规律，采用同源模建的方法构建了人类Hsp90的蛋白结构，使用分子对接的方法对Hsp90抑制剂小分子进行了设计。 通常 实验中首先利用分子动力学方法研究了Hsp90N末端结构（NT）结构变化的过程，分析了该过程中Hsp90N末端结构（NT）和抑制剂的相互作用，探索了结构水维持蛋白结构和抑制剂构象的重要性以及Hsp90N末端结构最新发现的活性结合口袋S3构象的变化规律。结果表明，Hsp90结合位点处Met98、Leu107、Phe138、Trp162、Asp93和Thr184是影响蛋白与抑制剂相互作用的关键残基，Wat2137、Wat2262、Wat2059和Wat2134是影响蛋白与抑制剂稳定性的四个重要的水分子，抑制剂的类型对活性口袋的门户Phe138和Leu107形成产生不同的影响。 在上述研究基础上，利用基于片段的药物设计和分子对接方法，以PU3为结构骨架，对小分子数据库进行筛选，设计了新型Hsp90抑制剂。结果表明，PYU和L81延伸到活性口袋S3筛选出的化合物进行拼接得到的小分子化合物并没有得到预期的效果。蛋白质晶体结构中分子片段的拼接中得到两个化合物A4B4和A10B4，与蛋白受体有着良好的结合模式。抑制剂的设计为抗肿瘤药物研究开辟了新的思路。 另外，课题利用同源模建、分子对接和分子动力学方法研究了人类Hsp90C末端结构（CT）与抑制剂的结合位点，采用自主建立的蛋白模型以及已经报道的Hsp90C末端抑制剂预测了相关的结合位点，接着用实验室建立的小分子数据库筛选出人类Hsp90C末端结构（CT）潜在的先导化合物。

本课题关于Hsp90蛋白结构以及抑制剂研究的方法以及结论，可以为进一步发现具有理想结合模式新型的小分子化合物提供一定的理论依据。
研究背景 胃癌是人类最常见的恶性肿瘤之一,其发病率在所有恶性肿瘤中位列第四位。在我国胃癌的男、女性发病率分别居各种恶性肿瘤发病率的第2和第3位。因其起病隐匿,早期症状不明显,所以多数患者就诊时,肿瘤已处于中晚期,部分患者已有腹腔转移,即使采取积极治疗的方法,但疗效仍不理想。胃癌组织通常首先在粘膜内蔓延、扩散,突破粘膜层后向外依次侵犯粘膜下层、肌层、浆膜下层、浆膜层,突破浆膜层后进而侵犯大、小网膜、腹膜、肝脏、胰腺、横结肠等邻近组织器官。当胃癌组织穿透浆膜层后,肿瘤细胞可发生脱落并种植于腹膜,大、小网膜或其他脏器表面,形成种植性转移结节。传统治疗方法对于胃癌腹腔种植转移疗效欠佳。胃癌腹腔转移出现在胃癌晚期,预后极差。 点击此处 以及 腹腔热灌注化疗(hyperthermic intraperitoneal chemotherapy, HIPEC)作为近年来新出现的一种治疗晚期腹腔恶性肿瘤的手段,引起了国内外学者的广泛关注。其通过高温对肿瘤细胞的直接杀灭作用,高温与化疗的协同作用以及大流量灌注冲刷、过滤作用有效地杀灭和清除腹腔内残留的癌细胞和微小转移灶(≤5mm),从而起到能够预防和治疗腹膜转移癌的作用。该治疗方法具有较高的有效性及安全性,现已被广泛应用于治疗进展期胃癌、结直肠癌、卵巢癌、腹膜假性粘液瘤等腹腔恶性肿瘤。特别是在晚期胃癌合并腹腔广泛转移的患者身上取得了令人可喜的疗效。

热休克蛋白(Heat Shock Protein, HSPs)是一类高度保守的蛋白,具有很强的细胞内功能并被认为在各种应激反应中发挥着保护因子的作用。HSP70是一类大分子量的ATP依赖的分子伴侣。广泛参与细胞内蛋白质的合成、转移、装配等环节,促进细胞增殖。同时,热应激后各组织细胞受不同热作用均有新的蛋白质合成,其中以70kDa家族的热休克蛋白(HSP70)合成最多。因此,HSP70被认为是最出色的的热耐受预测因子。热休克蛋白90(heat shock protein90, HSP90)是另一种大分子量的热休克蛋白,具有维持蛋白稳定、促进细胞生长等功能,在细胞生长、发育、分化等过程中发挥重要作用。 本课题旨在通过检测胃癌细胞SGC-7901在经过热处理后HSP70和HSP90的表达变化情况并结合胃癌患者在接受热灌注治疗后血清中HSP70和HSP90的浓度变化情况,探讨胃癌细胞在热处理后的热耐受情况,从而进一步为确定胃癌患者腹腔热灌注化疗治疗间隔提供理论参考依据。 研究目的 研究胃癌细胞在接受热处理后HSP70和HSP90的表达变化； 研究胃癌患者在接受腹腔热灌注化疗后血清中HSP70和HSP90的表达规律； 探讨胃癌患者接受腹腔热灌注化疗治疗的时间间隔以及腹腔热灌注化疗对胃癌细胞侵袭、转移的影响。 研究方法 细胞学实验：选用SGC-7901胃癌细胞株进行实验,该细胞株为低分化胃腺癌细胞,为临床常见的胃癌组织学类型,具有较强的代表性。成功培养细胞后,用二氧化碳培养箱41℃对细胞进行热处理后继续培养,按照实验设计时间点取细胞样本利用rt-PCR以及western-blot对HSP70和HSP90的表达情况进行检测。并且制作SGC-7901细胞爬片并同样进行热处理后按照不同时间点利用免疫组织化学法观察HSP70和HSP90表达情况。 病例的筛选及临床、病理资料的收集：连续选择于2013年1月至2013年10月期间,在广州医科大学附属肿瘤医院行腹腔热灌注化疗治疗的胃癌患者的规定时间点血清样本。入选胃癌患者均为接受单纯腹腔热灌注化疗治疗,未接受其他治疗。 采用SPSS16.0软件进行统计分析。P<0.05),但在12小时后开始出现下降(P<0.05)。HSP70的高峰出现在热处理后的4小时处。HSP90在热处理后的0小时、12小时、32小时和48小时均出现了表达的高峰(P<0.05),在16小时处出现一个明显的表达降低(P<0.