6.通过生物信息学预测MUC1的上游转录因子c-Jun;染色质免疫共沉淀(Chip)实验和双荧光素酶报告基因检测实验证实转录因子c-Jun是否与MUC1启动子区域结合;将c-Jun干扰序列和过表达序列转染卵巢癌细胞,qRT-PCR和western blot方法分别检测MUC1 m RNA和蛋白的表达。7.高糖处理卵巢癌细胞,对照时间组为无高糖处理,qRT-PCR和western blot方法检测卵巢癌细胞中c-Jun的m RNA和蛋白的表达;使用糖基化促进剂PUGNAc和GlcNAc处理卵巢癌细胞,未处理做为阴性对照,检测c-Jun的m RNA和蛋白的表达;放线菌酮(CHX)追踪实验检验c-Jun蛋白的稳定性;糖基化酶标实验和Co获悉更多-IP检测c-Jun糖基化情况;使用糖基化促进剂PUGNAc和GlcNAc处理卵巢癌细胞,同时敲减c-Jun,CCK8检测细胞增殖能力;细胞克隆形成实验检测克隆形成情况;流式细胞术(Annexin V/PI染色法)检测细胞凋亡;过表达c-Jun和MUC1,western blot检测O-GlcNAc糖基Protease Inhibitor Library research buy化水平。8.在卵巢癌细胞中过表达c-Jun,western blot检测O-GlcNAc糖基化相关蛋白(OGT、GUCY1A3、UAP1及SGLT1)的变化;过表达c-Jun后,再敲减SGLT1,western blot检测c-Jun蛋白的O-GlcNAc糖基化水平;敲减SGLT1后,qRT-PCR和western blot分别检测卵巢癌细胞MUC1 m RNA和蛋白的表达情况。
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目的本研究从磷脂酰肌醇3激酶/蛋白激酶B(PI3K/Akt)信号通路入手,采用细胞培养、生化检测试剂盒、RT-PCR和Wester
目的本研究从磷脂酰肌醇3激酶/蛋白激酶B(PI3K/Akt)信号通路入手,采用细胞培养、生化检测试剂盒、RT-PCR和Western Blot等技术手段,探讨并观察经典名方六味地黄丸对H2O2损伤PC12细胞凋亡的保护作用,从分子生物学角度揭示六味地黄丸对神经细胞凋亡抑制的作用机制,为六味地黄丸治疗阿尔茨海默病提供实验依据及理论基础。材料与方法按寻找更多照体重将大鼠随机分为空白对照组和六味地黄丸组。其中六味地黄丸组采用生药质量浓度为0.75 kg/L六味地黄丸(浓缩丸)水溶液按照10m L/kg灌胃,每天上午、下午各灌胃一次,空白对照组同体积双蒸水灌胃,连续灌胃7天,第7天首次给药2小时后腹主动脉取血,静置2h,2000 r/min离心10 min后分离血清。经56℃,30mihttps://www.selleck.cn/products/17-AAG(Geldanamycin).htmln灭活,0.22μm滤膜过滤灭菌,-20℃保存备用。取对数生长期的PC12细胞按照1×105/ml密度,接种于96孔板中培养,200μl体系,待培养24小时细胞贴壁生长后,更换无胎牛血清的培养基,继续培养24h后将终浓度分别为100、150、200、250、300、350μmol/L的H2O2加入到细胞培养基中,作用时间分别为1EPZ004777核磁2、24、36、48小时,确定H2O2诱导PC12细胞损伤的最佳作用时间及作用剂量。选取空白对照组大鼠的血清以及六味地黄丸灌胃组大鼠血清分别制备5%、10%、20%血清浓度的细胞培养基。在96孔板内,按照上述浓度接种细胞,饥饿24h使细胞同步化后,加入含相应浓度大鼠血清的细胞培养基在细胞造模前进行保护,MTT检测细胞存活率,选取适宜的含药血清浓度及适宜的保护时间。同样方法选择阳性对照药Vit E的作用浓度备用。
3 关联规则分析结果常用药对有黄芪-党参、五味子-麦冬、瓜蒌-薤白、柴胡-茯苓、丹参-川芎、桃仁-红花。常用药物组合有麦冬-党参-
3.关联规则分析结果常用药对有黄芪-党参、五味子-麦冬、瓜蒌-薤白、柴胡-茯苓、丹参-川芎、桃仁-红花。常用药物组合有麦冬-党参-黄芪、半夏-瓜蒌-薤白、赤芍-桃仁-红花、陈皮-半夏-茯苓、甘松-丹参-砂仁、酸枣仁-茯苓-川芎、柴胡-香附-白芍、柴胡-茯苓-白术、香附-首乌藤-延胡索、柴胡-枳实-白芍、山茱萸-茯苓-山药、三七-甘松-降香。药症关联显示倦怠乏力、不寐、头晕、心前find protocol区隐痛、肢体困重、食欲减退、口干不欲饮、脉弦涩、胸前区闷痛、舌体瘀斑瘀点等症状,关联度较高的中药有黄芪、酸枣仁、半夏、麦冬、丹参、党参、陈皮、白术、瓜蒌、茯苓等。证型-中药关联度较高的有气虚血瘀-黄芪、痰浊闭阻-瓜蒌、气阴两虚-五味子、气阴两虚-党参、气阴两虚-黄芪等。4.聚类分析结果高频药物聚类分析分为六大类第一类为瓜蒌、薤白、半夏、麦冬、五味子、黄临床试验芪、党参、水蛭、沉香、丝瓜络、肉桂、甘松、黄连、柴胡、三七、甘草、降香。第二类茯苓、白术、山茱萸、山药。第三类丹参、砂仁。第四类酸枣仁、远志、香附、延胡索、首乌藤。第五类川芎、当归、赤芍、红花、桃仁、牛膝、桔梗、生地、枳壳。第六类枳实、白芍、炙甘草。结论1.206名患者中男性多于女性,年龄主要分布在60岁以上老年群体,87.86%的患者合并高血压病史。selleck激酶抑制剂2.冠心病患者PCI术后基本病机仍属于本虚标实,但本虚的特点表现更突出,气虚、阴虚多见,其中以气虚最明显,标实则以血瘀、痰浊居多。3.PCI术后4周常见证型有气虚血瘀证、痰浊闭阻证、气阴两虚证,其中以气虚血瘀证出现频率最高。4.整体用药原则以补虚为主,攻邪为辅,多脏同调,以益气养阴、活血化瘀、疏肝行气、化痰宽胸为法。常用方剂有生脉饮、瓜蒌薤白半夏汤、四君子汤、柴胡疏肝散、酸枣仁汤、交泰丸、六味地黄丸、血府逐瘀汤、丹参饮、四逆散。
分析mi R-203、mi R-4317与预后的关系及预后的影响因素。结果胃癌组织中mi R-203、mi R-4317相对表达量
分析mi R-203、mi R-4317与预后的关系及预后的影响因素。结果胃癌组织中mi R-203、mi R-4317相对表达量显著低于癌旁组织(P<0.05)。不同性别、年龄、肿瘤大小胃癌患者胃癌组织中mi R-203、mi R-4317相对表达量比较无统计Inhibitor Library学差异(P>0.05),中低分化、TNM分期为III~IV期、有淋巴结转移胃癌患者胃癌组织中mi R-203、mi R-4317相对表达量显著低于高分化、TNM分期为I~II期、无淋巴结转移胃癌患者(P<0.05)。mi R-203高表selleck化学药品达组3年生存率显著高于mi R-203低表达组(P<0.05),mi R-4317高表达组3年生存率显著高于mi R-4317低表达组(P<0.05)。COX多因素分析显示,中低分化、TNM分期为III~IV期、有淋巴结转移、mi R-AZD0156203低表达、mi R-4317低表达是影响胃癌患者预后的独立危险因素(P<0.05)。结论胃癌组织中mi R-203、mi R-4317异常低表达,其水平与胃癌预后密切相关,且胃癌患者预后与分化程度、临床分期、淋巴结转移等相关。
目的探讨血清miR-144及miR-203表达水平对胃癌诊断及预后评估的价值。
4 ERS相关信号通路在NaAsO_2诱导L-02细胞焦亡中的作用4 1 ERS信号通路抑制剂4-PBA对L-02细胞增殖活力的影
4 ERS相关信号通路在NaAsO_2诱导L-02细胞焦亡中的作用4.1 ERS信号通路抑制剂4-PBA对L-02细胞增殖活力的影响与CON相比,4-PBA(0.2、0.4μM)处理对细胞增殖活力无明显影响(P<0.05),因此选择对细胞增殖无明显影响的浓度即4-PBA(0.2μM)进行后续实验。4.2 4-PBA抑制NaAsO_2诱导L-I-BET151价格02细胞中ERS相关信号通路的激活与CON组相比,NaAsO_2(20μM)处理可显著提高NLRP3等焦亡相关蛋白表达水平(P<0.05);与NaAsO_2(20μM)处理组相比,4-PBA+NaAsO_2(20μM)组中GRP78、p-PERK、p-e IF2α、ATF4和CHOP的蛋白表达水平显著受到抑制,差异Navitoclax细胞系均具有统计学意义(P<0.05)。4.3 4-PBA抑制NaAsO_2致L-02细胞焦亡与CON组相比,NaAsO_2(20μM)处理可显著提高NLRP3等焦亡相关蛋白表达水平(P<0.05);与NaAsO_2(20μM)处理组相比,4-PBA+NaAsO_2(20μM)组中NLRP3、ASC、caspase-1、半抑制浓度GSDMD-N及IL-18的蛋白表达水平显著受到抑制,但GSDMD的蛋白表达水平显著增加,差异均具有统计学意义(P<0.05)。4.4 4-PBA抑制NaAsO_2诱导L-02细胞中LDH释放与CON组相比,NaAsO_2(20μM)处理可显著增加LDH的释放水平(P<0.05);与NaAsO_2(20μM)组相比,4-PBA预处理可使LDH释放水平显著下降,差异有统计学意义(P<0.05)。
进一步探讨低水平PKM2对胰腺癌生长的阻碍机制,发现PKM2的下调抑制了自噬相关转录因子HIF-1α和FoxO3a的表达,从而破坏
进一步探讨低水平PKM2对胰腺癌生长的阻碍机制,发现PKM2的下调抑制了自噬相关转录因子HIF-1α和FoxO3a的表达,从而破坏胰腺癌的自噬,阻碍生长。另外,以PKM2为治疗靶点的溶瘤腺病毒药物O~(Ad).R.shPKM2,通过抑制胰腺癌自噬和诱发凋亡,对胰腺癌具有有效的杀伤作用,这一策略对胰腺癌临床治疗方法的选择具有参照意义。
研究背景与目的生物钟是生物进化过程中Panobinostat体内演化出的一套用以预测时间变化和调整生理稳态的内源性计时系统,存在于几乎所有生命形式体内。生物钟以周期性振荡的形式在生理、生化,分子、细胞、组织器官等不同水平上发挥调控作用,从而使生理活动、机体行为呈现近似24小时的昼夜节律变化。生物钟系统具有严格的等级结构,包括位于下丘脑的调控中枢和外周节律器官/组织;其在分子层面是由一系列特定的钟基因构成转录-翻译PX-478化学结构反馈环路引起节律振荡。越来越多的研究证明,生物钟紊乱、生物钟基因表达异常与包括肿瘤发生在内的多种人类疾病密切相关。胰腺癌也称胰腺导管腺癌,是来源于胰腺外分泌部的高度恶性肿瘤,预后极差。胰腺癌的诊治困境主要是由于其显著的早期侵袭转移,普遍的放化疗耐受,以及缺乏有效的诊治靶点所造成。因此,探明胰腺癌发生和演进的机制是解决当前临床困境的关键,也符合精准医疗分子量的趋势。鉴于生物钟紊乱与肿瘤的密切联系,本课题拟研究生物钟及核心钟基因BMAL1在胰腺癌发生发展中的作用,并对其可能的机制及调控通路进行深入探讨。课题的成功完成将为阐述胰腺癌的发病机理引入全新的概念;并有望为其提供新的有效的临床诊断和治疗靶点。方法1.通过采集临床组织标本(RT-PCR/免疫组化)并结合生物信息学手段(NCBI GEO公共数据库中选取三组胰腺癌基因表达谱微列阵),分析核心生物钟网络在胰腺癌与正常胰腺组织中的表达差异。
而如果在体系中增加SOD,自由基信号基本不受影响,同时HOI-11/NADPH/FMN体系也不能够产生信号,说明相比较HOI-02
而如果在体系中增加SOD,自由基信号基本不受影响,同时HOI-11/NADPH/FMN体系也不能够产生信号,说明相比较HOI-02,HOI-11在此反应体系中不能够产生ROS。3.抗氧化剂NAC和GSH能够抵消HOI-02对细胞的增长抑制作用MTS结果显示,用20μM HOI-02与抗氧化剂2.5m M NAC或者2.5m M GSH共处理食管癌细胞KYSE510时,能够https://www.selleck.cn/products/bay-11-7082-bay-11-7821.html抵消HOI-02对细胞增殖的抑制,细胞的生长状况与对照组相似。Catalase能够部分抵消HOI-02对细胞增殖的抑制,而SOD与HOI-02共处理细胞时,细胞的增殖状况基本不受影响。4.抗氧化剂NAC和GSH能够抵消HOI-02对细胞凋亡和细胞周期阻滞的影响流式细胞仪结果显示,20μM HOI-02处理食管癌细胞KYSE510 24h能够引起明更多显的细胞凋亡和G2-M期阻滞,而20μM HOI-02与2.5m M NAC或者2.5m M GSH共处理细胞时,细胞不发生凋亡和细胞周期阻滞。第四章HOI-02通过调节AP-1活性和caspase蛋白的表达诱导细胞凋亡方法1.Western blotting检测HOI-02不同时间以及不同浓度处理食管癌细胞KYSE510时对凋亡相关蛋白表达水平很少的影响;2.Western blotting检测500μM H2O2处理细胞后对凋亡相关蛋白表达水平的影响;3.荧光素酶报告基因的法检测AP-1活性的变化。结果1.HOI-02处理细胞使凋亡相关蛋白被激活Western blotting结果显示,20μM HOI-02处理食管癌KYSE510细胞后,p-cjun,p-c-fos,p-JNK,p-P38,c-PARP,c-caspase3和Bax表达增加,同时下调Bcl2的表达。
布鲁顿酪氨酸激酶(Btk)是非受体酪氨酸激酶家族的一员,作为Toll样受体(TLR)信号途径的组成部分,Btk信号在LPS介导的炎
布鲁顿酪氨酸激酶(Btk)是非受体酪氨酸激酶家族的一员,作为Toll样受体(TLR)信号途径的组成部分,Btk信号在LPS介导的炎症反应中具有重要作用。但Btk信号在烧伤脓毒症相关肠道损伤中的作用并不清楚。本文旨在探讨Btk在LPS诱导的烫伤小鼠肠道细胞焦亡中的作用。方法将128只C57BL/6小鼠分成正常对照组、烫伤组、LPS组、A13(3mg/kg)组、A13(10mg/kg)组、A1Cell Cycle抑制剂3(30mg/kg)组。正常对照组小鼠予以37℃水浴15s进行模拟烧伤及生理盐水腹腔注射后处死;其余各组在小鼠的背部用水浴(100℃)恒温持续接触15s,计算烫伤面积10%TBSAⅢ度;随后LPS组通过腹腔注射LPS 10mg/kg,复制烧伤脓毒症模型。A13(3mg/kg)组、A13(10mg/kg)组、A13(30mg/kg)组除给予LPS外,分别给予不同浓度哪里特异性Btk抑制剂LFM-A13。除正常对照组外,各组处理完成后分别于0h、12h、24h后处死,每个时相点均为8只动物。收集小鼠血液和肠道组织分类保存。用免疫组织化学技术检测p-Btk蛋白表达情况。采用蛋白质免疫印迹技术检测小鼠肠道p-Btk、Caspase 1、Caspase 11蛋白含量。采用酶联免疫吸附测定法检测小鼠肠道和血清IL-1β含量。总体比较行单因更多素方差分析,组间两两比较采用LSD-t检验。P<0.05为差异有统计学意义。结果(1)在12h时,与正常对照组相比,烫伤组肠道未见Btk明显活化;LPS组出现Btk活化明显增加;A13(3mg/kg)、A13(10mg/kg)、A13(30mg/kg)肠黏膜随LF M-A13浓度增加Btk活化逐步下降。(2)与正常对照组比较,LPS组在12h和24h时,p-Btk含量均明显增加,差异有统计学意义(P<0.05),但未在0h时观察到相同现象。
结果与常氧组比较,缺氧组细胞中焦亡相关蛋白的表达水平、LDH释放量和焦亡阳性细胞比例均显著升高(P<0 05或P<0 01);而P
结果与常氧组比较,缺氧组细胞中焦亡相关蛋白的表达水平、LDH释放量和焦亡阳性细胞比例均显著升高(P<0.05或P<0.01);而Pue可逆转上述指标(P<0.05或P<0.01)。当NLRP3炎症小体过表达时,细胞中焦亡相关蛋白的表达水平、LDH释放量和焦亡阳性细胞比例均显著升高(P<0.05或P<0.01);且Pue可通过调控NLRP3炎症小体而抑制上述现象(P<0.05或GSK126P<0.01)。结论Pue可通过下调焦亡相关蛋白的表达、减少LDH的释放、降低焦亡阳性细胞比例,从而发挥对缺氧致PASMCs焦亡的抑制作用,其机制可能与抑制NLRP3炎症小体的活性有关。
细胞焦亡是一种新型的程序性细胞死亡,并伴有大量促炎症因子的释放。在心肌缺血再灌注损伤(MIRI)过程中,炎症反应贯穿着心肌损伤的整个病理生理过程。细胞焦亡由于selleck化学具有高度促炎性,近年来研究者将其与MIRI紧密联系在一起。因此本文深入了解细胞焦亡的调控机制,以及对目前细胞焦亡在MIRI中的相关研究进行综述,为MIRI的临床防治研究提供一些思路。
动脉粥样硬化(以下简称AS)以慢性炎症和增殖过程为特征,而细胞焦亡与AS的发生发展密切相关。核因子κB(NF-κB)的激活可以诱导pro-IL-1β和增加NLRPAP24534细胞系3炎症小体的合成,从而触发pro-caspase-1蛋白水解为有活性的caspase-1,caspase-1将细胞因子前体pro-IL-1β和pro-IL-18分别转化为成熟的和具有生物活性的IL-1β和IL-18,参与AS形成过程,同时活性caspase-1可以诱发细胞焦亡,前期研究发现瘀血痹能够减少ApoE~(-/-)小鼠主动脉斑块面积,但机制尚不清楚,同时瘀血痹药物成分可以调节NF-κB、NLRP3、IL-1β等相关因子。
据此,我们假设DNMT1/miR-34a-5p/FoxM1信号轴在促进LCSCs特性中起重要作用;同时,FVTF通过抑制DNMT1
据此,我们假设DNMT1/miR-34a-5p/FoxM1信号轴在促进LCSCs特性中起重要作用;同时,FVTF通过抑制DNMT1活性和表达、上调miR-34a-5p表达、直接靶向抑制FoxM1,从而抑制LCSCs特性。为了验证该科学假设,本研究以SMMC-7721细胞系CD133~+肝癌球细胞作为LCSCs模型。分别应用ELISA、蛋白质印迹、定量逆转录PCR(qRT-PLY2874455研究购买CR)和甲基化特异性PCR(MSP)比较SMMC-7721细胞与LCSCs DNMT1活性以及蛋白和mRNA表达、miR-34a-5p表达及其启动子甲基化水平。分别用球形成法、琼脂集落形成法、流式细胞术分析、蛋白质印迹法和qRT-PCR检测SMMC-7721细胞与LCSCs的肝癌球形成率、集落形成率、CD133阳性细胞百分率、CSCs标志物(CD1此网站33、CD44和ALDH1)以及多能性转录因子(Bmi1、Sox2和Oct4)蛋白和(或)mRNA表达水平;以体外评价LCSCs特性。通过测定LCSCs裸鼠移植瘤生长速率和CD133及CD44蛋白表达,以体内评价LCSCs特性。利用地西他滨(DAC)和DNMT1 shRNA或DNMT1cDNA等抑制或过表达DNMT1基因确定DNMT1组成性活化促进TPCA-1细胞系LCSCs特性以及抑制DNMT1介导FVTF抑制LCSCs特性作用。分别采用miR-34a-5p模拟物和抑制物鉴定低表达miR-34a-5p促进LCSCs特性以及上调miR-34a-5p介导FVTF抑制LCSCs特性作用。分别使用荧光素酶报告基因、FoxM1敲低或过表达、DAC或硫链丝菌素(THI)处理鉴别miR-34a-5p靶基因FoxM1和FoxM1过表达促进LCSCs特性以及FVTF通过下调FoxM1表达抑制LCSCs特性。