裸鼠接种ES-2细胞后尾静脉给予LYP,连续治疗两周,ES-2肿瘤的生长受到显著的抑制作用。Western blot实验结果显示LYP能够降低肿瘤组织APN/CD13的含量。与阳性对照药乌苯美司相比,LYP对ES-2肿瘤生长的抑制作用较强。裸鼠对给药方案的耐受性良好,给药组裸鼠的体重与阴性对照组比较没有显著性差异。 为进一步研究LYP抑制体内ES-2肿瘤生长作用背后的机制,我很少们检测了LYP在抑制新血管生成方面的药理活性。MTT实验和台盼蓝实验结果显示在5-80μM浓度范围内,LYP对HUVEC细胞没有明显的细胞毒效应。在该浓度范围内LYP对HUVEC细胞APN/CD13酶的活性有一定的抑制作用。Transwell侵袭实验和划痕实验结果显示LYP能够明显抑制HUVEC细胞的侵袭和游走运动能力。微管形成实验表明LYP对HUV还有EC细胞在Matrigel表面形成微管样结构具有抑制作用。LYP对新血管生成的抑制作用在体内实验中得到了验证。对ES-2肿瘤组织进行CD34免疫染色,结果发现LYP给药组肿瘤平均血管密度和平均血管直径均小于阴性对照组。在相同给药剂量下,LYP抑制新血管生成的作用大于阳性对照药乌苯美司。LYP的抗微血管生成作用可能与其抑制与血管生成有关的分子的表达有关MEK inhibitor。Western blot实验结果显示,LYP给药组肿瘤组织内VEGF、bFGF和TGF-a的水平显著低于阴性对照组。 结论：LYP在体外和体内对卵巢癌细胞生长增殖具有较强的抑制作用,该作用可能与其降低细胞APN/CD13表达水平和抑制新血管生成有关。
【背景】 胃癌是我国常见的恶性肿瘤之一。早期诊断和早期治疗对提高患者生存率有重要意义，肿瘤标志物检测是早期发现胃癌的重要手段。但是，传统的肿瘤标志物对胃癌诊断的特异性和敏感性低。

食管癌发生发展的机制尚不完全明确,因而必须深入了解食管癌发生发展机制,才能制定有效的治疗方案,进而降低食管癌的死亡率和发生率。食管鳞状细胞癌(Esophageal squamous cell carcinoma,ESCC)是我国食管癌的主要类型,其发生发展过程与多个信号通路的异常激活有关。因此,筛选新的治疗靶点并制定有效的治疗方案是食管鳞癌临床Akt抑制剂亟待解决的问题之一。癌症基因谱研究发现食管鳞癌中存在79个促进ESCC发生发展的关键基因,这些基因涉及基因组稳定、细胞存活和细胞生存的12个信号转导通路,近期研究证实AKT、RAS等多个信号转导通路异常是促进食管鳞癌发生发展的因素之一,并参与ESCC的增殖、转移、分化等多个过程。因此,阐明食管鳞癌中的信号转导通路作用机确认细节制,筛选信号通路的关键靶点及其抑制剂,可以为阻断食管鳞癌发生发展制定有效的治疗方案,为提高ESCC患者生存率提供理论支持。T-LAK细胞来源的蛋白激酶(T-LAK cell-originated Protein kinase,简称TOPK),是一种新发现的丝-苏氨酸激酶,属于MAPKK分子家族,系统进化树显示它是MEKVerteporfin 价格1/2和MKK7之间的分支,其参与多种生物学过程,如肿瘤的发生发展、细胞周期、细胞增殖、细胞凋亡以及炎症等过程。TOPK的活化是有丝分裂早期的重要步骤,TOPK和cdk1/cyclin B1复合体结合,使胞质分裂蛋白1磷酸化,从而促使细胞分裂,从而加速细胞G2/M期进程促进细胞的增殖。TOPK激酶甚至可以和肿瘤抑制基因p53的DCD结构域相结合从而阻断p53的作用,促进细胞周期蛋白如p21的表达。

由于Hh N是主要执行信号功能的蛋白,因此目前研究较多,主要包括Hh N蛋白的脂修饰,氨基端保守区域的功能研究,蛋白质结构分析以及多聚体和蛋白分泌的研究。我们注意到,大家对于Hh N蛋白羧基端的关注比较少。而该区域靠近Hh蛋白自裂解和胆固醇修饰的位点,在不同物种中具有高度的保守性。这提示我们,Hh N蛋白高度保守的羧基端有可而且能具有重要的生物学功能。为了了解Ihh N蛋白羧基端保守区域的作用,我们首先构建了Ihh N蛋白羧基端区域不同截断体的表达载体,当删除该区域SAAAKT六个氨基酸时,N端蛋白的稳定性受到影响;删除十个氨基酸(KSEHSAAAKT)时,蛋白不能发生自裂解。在此基础上,我们进一步构建了这一区域的不同点突点击此处变载体,蛋白表达实验发现该区域T200氨基酸突变后Ihh N蛋白的稳定性降低。更重要的是,我们发现由K191,S192,E193和H194四个氨基酸共同组成的结构域对于蛋白的自裂解有重要影响。接下来,我们在Shh蛋白羧基端与Ihh蛋白KSEH相同位置进行了同样的截断体试验,结果也发现这个结构域影响了也许Shh蛋白的自裂解反应。这表明Hh蛋白羧基端的这一区域的功能是高度保守的。以上这些新发现将为进一步深入阐释Hh蛋白自裂解机制提供重要依据。此外,在对Ihh N蛋白晶体结构进行分析时发现,一个Hh N蛋白的羧基端至少有三个氨基酸S195,A196和A197插入了相邻的Hh N蛋白分子的内部,提示我们这三个氨基酸或者以这三个氨基酸为主的某个结构域可能对Ihh蛋白多聚体形成有重要作用。

B系列化合物中除萘环取代使HDAC抑制活性明显下降甚至丧失外,吡啶环、呋喃环和噻吩环等芳杂环取代物的抑酶活性都与SAHA相当或高于SAHA。在抗肿瘤细胞增殖方面,A系列化合物的A31效果最好,对所选测的6株肿瘤细胞的抗增殖活性均高于6m和SAHA;B系列化合物中B12的抑瘤效果最好,活性与6m和SAHA相当。A系列和B系列化合物的抗增殖活性均显示,当LiIvacaftor研究购买nker链长n=5时,对肿瘤细胞增殖的抑制活性不明显；n=6时显示相对较好的增殖抑制活性。 C系列化合物在活性评价中未达到相应异羟肟酸衍生物的抗增殖活性水平,其中N-羟基苯甲酰胺衍生物和N-羟基肉桂酰胺衍生物的抗增殖活性较6m和SAHA明显下降；2-氨基苯胺甲酰衍生物的抗增殖活性与6m和SAHA处于同一个数量级,但是没有达到6m或者和SAHA的活性水平。 将1,3,4-噻二唑基改造为噻唑基和吡唑基的D系列目标化合物(D1、D2和ID3)对所选用的10株肿瘤细胞均显示优良的抗增殖活性,且活性明显高于6m和SAHA。除了对K562慢性粒细胞白血病细胞系的活性提高明显外,对其它9株实体瘤细胞抑制效果均比6m和SAHA提高2-6倍。 综上所述,本论文针对噻二唑类H这个DAC抑制剂进行了深入的结构改造。相关构效关系研究表明,1,3,4-噻二唑环的5-位苯基引入邻位和位阻小的取代基有利于提高抑酶和抑瘤活性；将苯基替换为其它杂环或替换异羟肟酸基团均未发现抑瘤活性更高的化合物,有时还导致活性丧失。我们在研究中意外的发现,将噻二唑杂环替换为噻唑或吡唑的D系列目标化合物,其抗肿瘤活性较6m和SAHA大幅提高。针对该系列化合物的深入研究,将为今后发现高效、低毒的抗肿瘤药物提供新的方向。

时间进行曲线实验的结果表明，MK-1775处理细胞后能增加CHK1的磷酸化水平（导致CHK1的活化）和DNA损伤，而且这种增加是依赖于CDK活力的，因为CDK抑制剂Roscovitine能逆转这种现象，说明MK-1775通过活化CDK来杀伤AML细胞。随后我们证明，无论是在AML细胞株中还是在AML临床样本中，MK-1775与CHK1抑制剂LY2603618都有协同抗很少AML作用。 接下来，我们检测了帕比司他在AML细胞株及临床样本中的活性及其与MK-1775联合抗AML的作用。我们发现，帕比司他无论是在初诊还是复发AML临床样本中都有几乎相同的药物活性。另外我们还发现，帕比司他与MK-1775的确能够协同引起AML细胞增殖阻滞和细胞死亡。帕比司他单独或与MK-1775联合都能够减少WEE1的蛋白表达水平，寻找更多同时下调CHK1信号通路。通过慢病毒shRNA沉默CHK1，能显著增强AML细胞株对MK-1775的敏感性。与CHK1相似，沉默WEE1也显著增强了MK-1775和帕比司他引起的细胞死亡。 综上所述，我们的研究结果证明了CHK1对MK-1775抗AML活性起关键作用，并指明CHK1活化是导致AML细胞对MK-1775耐药的个可能机制。另外，我还有们的研究强烈支持应用MK-1775治疗初诊和复发AML患者，尤其是带有（t15；17）染色体异位的患者。最后，我们的结果证明帕比司他与MK-1775具有协同抗AML作用，这种作用至少部分是通过下调CHK1和/或WEE1来实现的。这为临床开发帕比司他与MK-1775对AML的联合疗法提供了理论和实验依据。
骨肉瘤是最常见的原发恶性骨肿瘤,尤以15-19岁的青少年多见,其发病率为4／百万,且男性患病率约为女性的1.4倍。

蛋白激酶抑制剂(protein kinase inhibitor,PKI)可用于多种疾病的治疗,其中ATP-竞争性蛋白激酶抑制剂研究得最多,这类抑制剂已被研究和开发成为治疗多种复杂性疾病的新药。目前ATP-竞争性蛋白激酶抑制的研究主要集中在新骨架类型先导化合物的设计和发现,以及选择性抑制剂和多靶点抑制剂开发等方面。 目前,计算机辅助药物设计(compuSelleck Pomalidomideter-aided drug design,CADD)作为药物研发中的重要技术和工具,被应用于蛋白激酶抑制剂的研究中,推动了这一研究领域的长足发展。定量构效关系、分子对接、药效团、同源模建和分子动力学模拟等多种分子模拟方法,以及量子化学等多种CADD方法均被应用于蛋白激酶抑制剂的设计和发现。 本论文采用定量构效关系、分子对接和也许药效团建模等多种分子模拟技术和手段,研究多种蛋白激酶抑制剂分子结构与其活性之间的关系,抑制剂与蛋白之间的相互作用以及影响化合物活性的重要药效特征。旨在获得影响抑制剂活性的重要结构和药效特征、抑制剂与蛋白激酶间相互作用的机理,从而指导抑制剂的设计、结构优化以及活性预测,辅助设计和合成更高效的靶向激酶的治疗药物。 在论文第一章中,时间我们对蛋白激酶及其抑制剂研究进展、计算机辅助药物设计中的分子模拟方法,如定量构效关系、分子对接及药效团模型方法做了介绍,并描述和总结了计算机辅助药物设计在蛋白激酶抑制剂研究中的应用。 第二章中,我们对一系列噻唑氨类Aurora-A的抑制剂进行QSAR研究。2D-QSAR模型用遗传算法—多元线性回归方法(GA-MLR)建立。结果表明除了信息指数,GETAWAY和WHIM描述符对这类化合物抑制活性均有重要贡献。

因此本研究分成二个部分： 第一部分采用生物信息学领域相关工具,全面分析发生EML4-ALK基因融合的NSCLC在肿瘤信号转导中各信号通路的变化状态,并与发生其他分子事件的肺癌组织进行比较,筛选差异表达基因,对其进行注释及归类,在整体水平初步探索EML4-ALK融合型NSCLC的发病机制、特异性的生物学行为及信号转导特征。 第二部分主要对第一部分的发现进行初步的功能验证。通过对表达谱芯片的点击此处数据挖掘,我们发现STAT3参与的诸多肿瘤生物学过程和信号转导通路在EML4-ALK融合型肺癌的信号转导中发挥了关键性作用,该基因在多条重要通路中处于枢纽位置。为初步验证STAT3的功能,我们通过RNAi技术在出现EML4-ALK融合及对照细胞系中沉默STAT3的表达,并通过构建STAT3表达载体,利用分子克隆技术,将其在靶细胞中过表达,尝试从正反两个方面论证SSelleckchem GSK1120212TAT3主导的信号转导过程中,该分子表达水平的高低对通路各关键节点的影响,并初步分析该基因与肿瘤细胞增殖、凋亡间的相互作用,为后续的临床研究及个体化治疗提供理论支持。课题设计与主要结果 第一部分EML4-ALK融合型肺癌生物学特性的数据挖掘与分析 第一章ALK表达水平与EML4-ALK融合发生的关系 目的 分析NSCLC组织中EML4和ALK基因表达水平与EMLEPZ-6438体内4-ALK融合型肺癌发生的相关性。 材料与方法 将本研究所流行病学研究的标本中质控合格的94例NSCLC组织标本制备表达谱芯片,采取customCDF的注释方法及RMA(Robust multiarray analysis)算法计算芯片杂交信号值。方差分析比较EML4-ALK融合组、非融合组和正常组织EML4、ALK两个基因的表达水平；Pearson相关分析比较两者间的相关性。 结果 customCDF注释方法共注释18123个人类基因。

因此,BRApV600E成为了当今抗肿瘤药物研发的热门靶标。BRAFV600E抑制剂的基本结构包含一个氢键供体,通常是吡唑,吡啶或咪唑的杂环和取代的芳族基团与疏水口袋相互作用。为了获得一个更好的具有氢键和疏水作用的合适长度基团,我们合成了一系列(1,3-二苯基-1H-吡唑-4-基)甲基苯甲酸酯衍生物。体外测试目标化合物对A375和WM266.4的抗增殖为什么活性,实验表明,大部分化合物低毒并具有较强的抗肿瘤活性,其中化合物10a活性最强,其对A375和WM266.4的IC50分别为IC50=1.36μM,0.94μM(阳性对照vemurafenib对A375和WM266.4的IC50分别为0.20μM和0.06μM)。体外测试化合物的BRAFV600E抑制活性,化合物10a的BR所以AFV600E抑制活性依然最好。为进一步探讨目标化合物可能作用机制,进行了计算机模拟对接研究,研究表明化合物10a紧紧的嵌入到蛋白的活性结合口袋。这说明化合物10a可能是很好有研究前景的以BRAFV600E为靶点的抗癌先导化合物。为了进一步确定所得衍生物的结构,我们培养出其中产物9c的单晶,用单晶X射线衍射技术测定了它的晶体结Idelalisib供应商构。极光激酶是一类高度保守的丝氨酸／苏氨酸蛋白激酶,在细胞有丝分裂过程中有着重要的作用。在哺乳动物中发现有三种极光激酶：极光激酶A,极光激酶B和极光激酶C。极光激酶A在细胞中的异常表达会导致中心体扩增,干扰极光激酶A的功能会引起中心体功能缺陷,星体微管长度缩短,不能形成纺锤体,进而影响有丝分裂。研究证实,Aurora A在大多数恶性肿瘤中均高表达,如乳腺癌、结肠癌、卵巢癌、胰腺癌、前列腺癌和甲状腺癌等。

他莫昔芬浓度为1.5μmol/L ,PKC抑制剂为100nmol/L十字孢碱(staurosporine),PKC激活剂为1μmol/L 12-佛波醇脂(PMA)。6、应用SPSS 12软件进行统计学分析。计量资料以均数±标准差(χ-±s)表示,首先进行组间均衡性检验,两组计量资料采用t检验或配对t检验,成组资料间比较采用配伍组分析,以P
神经胶质瘤具有浸润性生长特点,手PLX3397术难以根治,术后复发率很高,现今大多数化疗不能透过血脑屏障,限制临床应用,胶质瘤还具有辐射抗性,尽管经过手术、化放疗等综合治疗其平均存活率不足一年,胶质瘤的治疗成为当今世界公认的难题,因此寻找有效抗肿瘤靶向药物是亟待解决的问题。 我们在以往探讨甲基汞所致脑发育损伤机制的基础上,根据甲基汞的理化特性、药动学特点和多靶点细胞毒作用,提出用氯化甲基汞(MRAD001研究购买MC)治疗神经胶质瘤的新策略。本研究采用体内外实验方法探讨MMC对脑胶质瘤的抗肿瘤作用及其机制,体外实验结果:①采用MTT法检测显示,MMC对SHG44胶质瘤细胞增殖具有明显的抑制作用,呈剂量依赖关系;应用ATP生物荧光法进行MMC与As2O3抗胶质瘤作用对比研究,发现前者抑制作用更强。②流式细胞仪测定发现MMC可诱导胶质瘤细胞凋亡和坏死、干扰细胞不周期进程,使SHG44胶质瘤细胞阻滞在G0/G1期和G2/M期,减少进入S期的细胞百分数。③激光扫描共聚焦显微镜发现MMC可升高胶质瘤细胞内钙浓度,影响SHG44胶质瘤细胞钙稳态。④免疫印迹和激酶分析法探讨了MMC诱导凋亡、抑制细胞周期与调PKC之间的关系,发现对照组SHG44胶质瘤细胞PKCα及PKCδ蛋白质均呈阳性表达,SHG44胶质瘤细胞给予MMC处理的实验组,PKCα蛋白表达下调,而PKCδ的表达则升高,PKC活性被抑制。

初步生物活性研究发现6m对10种肿瘤细胞的增值抑制作用也与SAHA相当,还能够引起肿瘤细胞凋亡、抑制肿瘤迁移并产生细胞周期抑制。为进一步提高抗肿瘤活性,我们从以下三个方面对噻二唑类HDAC抑制剂进行结构修饰和改造：第一,根据前期构效关系研究,Linker区域相对固定,一方面在噻二唑环5-位苯基上引入取代基得到A系列化合物,另一方面根据药物设计学的生物电子等排原理,以萘环、selleck化学药品液面控制吡啶环、呋喃环和噻吩环等替代苯基得到B系列化合物；第二,根据HDAC抑制剂的临床研究进展,用对癌症显示疗效生物2-氨基苯胺甲酰基、N-羟基苯甲酰胺基和N-羟基肉桂酰胺基等Zn2+螯合基团替代异羟肟酸基得到C系列化合物；第三,考虑到Cap区1,3,4-噻二唑杂环可被其它杂环替换,根据生物电子等排原理将噻二唑改为噻唑和吡唑杂环得到D系列化合物。 在目Osimertinib研究购买标化合物的合成中,A和B系列化合物以芳基甲酸为原料,以三氯氧磷为脱水剂经一锅法反应生成1,3,4-噻二唑衍生物,后与庚二酸单甲酯或辛二酸单甲酯缩合得到含噻二唑杂环的羧酸酯,最后异羟肟酸化得到目标化合物；在C系列化合物合成中,可水解已有的噻二唑杂环羧酸酯,所得羧酸与Boc保护邻苯二胺缩合,最后脱除Boc保护基得到化合物C1；其它目标化合物C2-C4很少的合成主要以不同原料合成含有1,3,4-噻二唑的羧酸酯,最后转化为异羟肟酸；D系列化合物的合成参考A系列和B系列合成方法,参照文献合成噻唑或毗唑杂环,再经缩合和异羟肟酸化制得。本论文共合成新化合物143个,其中包括新目标化合物71个和新中间体72个。所有新化合物的结构均经过核磁共振氢谱、碳谱或质谱等手段进行确证。 所有目标化合物均进行了初步生物活性评价。其中多数A系列化合物和B系列化合物的抑酶活性与SAHA相当甚至活性更高。