心脏特异性敲除pdk1小鼠的鉴定与电生理改变的初步探索目的:心脏特异性敲除pdk1小鼠模型的鉴定。方法:采用westernblot方法,检测小鼠心室肌细胞pdk1的表达情况;运用体表心电图检测基因敲除后小鼠心率、qrs、qtc的变化。结果:基因敲除后的8周,心室肌pdk1的表达显著下降。且心电图表现为心率下降(362.22±12.69vs.422.31±20.10,p
肺癌已经成为癌症相关病死率最高的恶性肿瘤,2012年赫捷院士报道了中国排名前十位的肿瘤发病率和死亡率,肺癌无论从发病率还是死亡率来讲,都是名列第一位,其中80%以上病例为非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC),确诊为NSCLC时,尽管近来年采用了多种综合预防和治疗手段,仍然难以显著降低其发病率和改善其生存率,肺癌的5年生存率约为15%,因此,系统的研究NSCLC的发生、发展机制,筛选有效的治疗靶点和治疗药物,一直是肿瘤研究中面临的巨大挑战。作为抑癌基因p53的负性调控因子,p53诱导的蛋白磷酸酶1(Wild-type p53-induced phosphatase

1,Wip1)位于人染色体17q23/q24区域,属于丝氨酸/苏氨酸蛋白磷酸酶PP2C(PP2C 很少 type protein phosphatase)家族成员,由PPM1D编码,人的Wip1蛋白分子量约为61k D,由605个氨基酸组成,能够通过依赖于p53蛋白途径和非依赖于p53蛋白途径,促进肿瘤进展。近年来,肺癌、乳腺癌、胰腺癌、膀胱、肝、脑膜、和神经母细胞瘤细胞系中发现了Wip1的扩增。此外,许多人类原发性肿瘤(如神经母细胞瘤、卵巢透明细胞腺癌、乳腺癌、胰腺腺癌)包含扩增的Wip1基因和高表达的Wip1蛋白质,并且显示出与癌症患者预后不佳有关。Naoyuki Satoh等发现原发性肺腺癌患者,Wip1在肿瘤上皮细胞表达的增加,与肿瘤进展和临床预后具有重要意义。因此本研究拟观察Wip1在NSCLC中表达的临床病理意义和其判断预后的价值,并分析Wip1具体作用机制,为将其作为一个NSCLC候选治疗靶点提供进一步的理论和实验依据。第一部分p53诱导的蛋白磷酸酶1(Wip1)在非小细胞肺癌中表达的临床病理意义及其预后价值分析目的:研究Wip1在非小细胞肺癌中表达的临床病理意义,并分析其预后价值。方法:收集河北省胸科医院2001年-2010年期间117例NSCLC患者临床样本,均具有完整的随访资料,10例来自于支气管扩张等手术中切除的正常肺组织及癌旁肺组织作为对照组。采用免疫组织化学方法,检测Wip1在正常肺组织和非小细胞肺癌组织中的表达。采用SPSS

13.0统计软件进行数据分析,应用Pearsonχ2检验和t检验分析其表达的临床病理意义。使用Kaplan-Meier法绘制生存曲线并计算生存率,单因素分析应用Log rank检验进行相关性判断,多因素分析使用Cox比例风险模型,采用逐步回归分析进行危险因素判断。以α=0.05为检验水平,以P3 cm病例占85.2%(69/81),Wip1蛋白阴性表达组中,肿瘤大小≤3 cm占38.9%(14/36),肿瘤体积>3 cm病例占61.1%(22/36),采用χ2检验进行统计,发现非小细胞肺癌组织中Wip1蛋白表达与肿瘤大小相关,差异有统计学意义(χ2=8.357,P=0.004)。Wip1蛋白阳性表达组中,淋巴结无转移病例占55.6%(45/81),淋巴结转移病例占44.4%(36/81),Wip1蛋白阴性表达组中,淋巴结无转移病例占69.4%(25/36),淋巴结转移病例占30.6%(11/36),采用χ2检验进行统计,发现非小细胞肺癌组织中Wip1蛋白表达与淋巴结转移不相关,差异无统计学意义(χ2=2.000,P=0.157)。非小细胞肺癌Wip1蛋白阳性表达组织中,临床分期I-II期占55.6%(45/81),III-IV期占44.4%(36/81),Wip1蛋白阴性表达组中,临床分期I-II期占75.0%(27/36),III-IV期占25.0%(9/36),采用χ2检验进行统计,发现非小细胞肺癌组织中Wip1蛋白表达与临床分期相关,差异有统计学意义(χ2=3.98,P=0.046)。3单因素Log-rank检验分析显示Wip1表达与患者预后差相关,Wip1阳性表达组总体生存率低于Wip1阴性表达组。Cox回归模型分析显示高Wip1表达相对危险度为5.096(95%可信区间=1.501-17.303),临床分期相对危险度为0.159(95%可信区间=0.037-0.680),均具有统计学差异。小结:1

Gefitinib 价格 Wip1在NSCLC组织中高表达。2 Wip1表达水平与非小细胞肺癌病理分型、肿瘤大小、临床分期关系密切,而与患者的年龄、性别、组织分化程度、淋巴结转移无关。3 selleck化学药品液面控制 Wip1阳性表达组总体生存期低于Wip1阴性表达组,其高表达是预后不良的高风险因子。第二部分Wip1-si RNA对非小细胞肺癌细胞增殖的影响目的:研究基因沉默Wip1对NSCLC A549细胞、NCI-H1299细胞增殖的抑制作用及其调节机制。方法:研究采用RNA干扰技术基因沉默Wip1。采用real-time PCR技术和Western blot技术从三个设计的si RNA中筛选出最有效的si RNA。通过MTT技术观察细胞增殖情况,流式细胞术观察细胞周期,并应用Western blot检测细胞内增殖细胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen,PCNA)、P21及P27的表达。结果:1三种Wip1-si RNA(40 n M)转染A549细胞、NCI-H1299细胞株48h,对Wip1的表达均具有一定的沉默作用,其中Wip1-si RNA-3的沉默效率最高,达到90%以上;而空白对照组及阴性转染组Wip1 m RNA及蛋白表达水平无明显变化。2与阴性转染组细胞相比,基因沉默Wip1对非小细胞肺癌细胞A549、NCI-H1299的细胞增殖具有显著的抑制作用,明显高于Wip1-si RNA转染组,差异具有统计学意义(P0.

015),且与患者的性别、年龄、瘤体直径、吸烟史、高血压史、血脂异常无明显相关(P>0.05)。 结论：PI3K在腹主动脉瘤中高表达,可能在疾病的发生中发挥重要作用,其具体作用机制仍需进一步实验研究阐明。
慢性粒细胞白血病（Chronic selleck化学药品 Myeloid Leukemia，CML）是一种起源于白血病干细胞（leukemia stem cells，LSCs)的恶性增殖性疾病，迄今没有有效的根治办法。目前国内外的研究普遍认为LSC是正常造血干细胞（hematopoietic

stem cell，HSCs）经BCR-ABL癌基因转化而来。由于BCR-ABL基因编码的BCR-ABL融合蛋白具有持续活化的酪氨酸激酶活性，使得LSC具有比HSC更强的自我更新和增殖能力而大量扩增。LSCs也因此被认为是CML发病的根源，靶向BCR-ABL清除LSCs对于治愈CML具有重要的临床意义。格列卫（Imatinib Mesylate，IM）是以BCR-ABL蛋白为靶点治疗CML的分子靶向药物，能使绝大部分CML患者获得有效缓解，成为当前CML治疗的一线药物。然而，研究发现IM只能杀死增殖的成熟CML细胞而不能有效诱导LSCs凋亡。因此，IM不能彻底清除CML患者体内的LSCs而无法根治CML。LSCs对格列卫的凋亡抗性机制迄今不完全清楚。阐明LSCs的格列卫凋亡抗性机制对于以LSCs为靶点制定根治CML的策略具有重要意义。大量的研究表明，miR-21的异常表达与肿瘤细胞耐药密切相关miR-21抑制剂能有效增强化疗药物对肿瘤细胞的凋亡诱导作用。目前，miR-21在LSCs中的表达及其与LSCs的格列卫凋亡抗性的关系尚无研究报道，有待深入探讨。 本论文采用Real-time PCR技术检测IM处理后CML CD34+干/祖细胞以及Sup-b15细胞和CML细胞K562、Ku812的miR-21的表达水平变化，在此基础上，进一步通过miR-21激动剂及其抑制剂转染、流式细胞术等方法，研究miR-21在调控CMLCD34+干/祖细胞对IM的凋亡抗性中的作用及其分子机制。

研究目的 本论文通过研究miR-21在调控CD34+干/祖细胞对IM的凋亡抗性中的作用及其分子调控机制，探索增强IM清除LSCs的策略，为以LSCs为靶点根治CML提供参考资料和科学依据。 研究方法 1.探讨miR-21在调控CML CD34+干/祖细胞对IM凋亡抗性中的作用 1.1使用Ficoll利用密度梯度离心法把健康人和CML病人的骨髓样本进行分离，分别获得健康人和CML病人的骨髓单个核细胞（BMMC）；利用免疫磁珠分选系统（MACS）对健康人和CML病人的骨髓单个核细胞分别进行分选，获得健康人和CML病人CD34+干/祖细胞；流式细胞术鉴定CD34+干/祖细胞的分子表型及其纯度。 screening assay 1.2Annexin V/PI双染法检测IM诱导的CML CD34+干/祖细胞凋亡；Real-time PCR检测IM处理后CML CD34+细胞的miR-21表达水平；Annexin

V/PI双染法检测转染antagomiR-21对IM诱导的CML CD34+细胞凋亡的影响。 1.3MTS方法检测IM对Sup-b15细胞增殖的影响；Annexin V/PI双染法检测IM诱导的Sup-b15细胞凋亡；Real-time PCR检测IM处理后Sup-b15细胞的miR-21表达水平；Annexin V/PI双染法检测Sup-b15细胞转染antagomiR-21后，IM诱导的细胞凋亡变化。 1.4MTS方法检测IM对CML细胞K562和Ku812的细胞增殖影响；Annexin 购买GSK1210151A V/PI双染法检测IM诱导的CML细胞K562和Ku812的细胞凋亡；Real-time PCR检测IM处理后CML细胞K562和Ku812的miR-21表达水平；Annexin V/PI双染法检测K562和Ku812转染agomiR-21后，IM诱导的细胞凋亡变化。 2.探讨miR-21调控CML CD34+细胞对IM凋亡抗性的分子机制研究 2.1流式细胞术检测CML CD34+细胞和三种Ph+白血病细胞（K562、Ku812、Sup-b15）细胞经过IM处理后细胞内PTEN和PDCD4蛋白的表达水平变化；检测CD34+干/祖细胞转染antagomiR-21后PDCD4及磷酸化AKT蛋白的变化情况，评价抑制miR-21对PI3K/AKT信号通路的影响。 2.2Annexin V/PI双染法检测PI3K抑制剂（Wortmannin或LY294002）和IM联合作用于CML CD34+细胞和Sup-b15细胞后，CML CD34+细胞和Sup-b15细胞的细胞凋亡。 2.3流式细胞术检测PI3K抑制剂（Wortmannin或LY294002）和IM联合作用于CMLCD34+干/祖细胞和Sup-b15细胞后细胞内磷酸化AKT蛋白的变化情况。 实验结果 1.探讨miR-21在调控CML CD34+干/祖细胞对IM凋亡抗性中的作用 1.1流式细胞术检测结果显示，免疫磁珠分选系统纯化的CD34+干/祖细胞的纯度为89.23%。 1.2细胞凋亡结果显示CML CD34+干/祖细胞对IM不敏感；经过IM处理后miR-21表达水平有一定的上调；转染antagomiR-21能显著增加IM诱导的CML CD34+干/祖细胞凋亡，细胞凋亡率由对照组的3.983±0.2973增加至9.437±0.5601。 1.

Y27632调控小鼠胚胎干细胞自我更新的miRNA芯片数据分析 目的：更全面地了解YES细胞体系与常规ES细胞的差异,并从中提取更多的转录后调控分子信息,以期发现新的全能性相关分子事件。 结果：将本研究发现的Y-ES细胞与ES细胞的差异表达miRNA与文献报道的ES细胞与epiS细胞的miRNA差异表达谱进行比对发现,两组差异表达谱重叠较少,在27条差异表达miRNA中仅有5条与之相同,提示Y-ES细胞处于不同于原始态全能性和始发态全能性的中间状态。对Y-ES细胞中上调的miRNA进行功能分析发现,8条常规分子通路可能受到潜在调控,其中包括粘着斑信号,Wnt信号通路和ErbB信号通路等。继而,对Y-ES细胞,ES细胞和EB的差异表达miRNA进行的分类比对分析发现,6条miRNA在Y-ES细胞和ES细胞维持高表达而在分化的EB样本中显著下调,另外16条miRNA在Y-ES细胞和ES细胞中低表达而在EB中高表达。这些miRNA作为全能性和分化相关的靶点,用定量RT-PCR进行表达验证,确定了全能性样本中高表达的5条miRNA及分化样本高表达的3条miRNA具有超过两倍的差异。对两组miRNA进行功能分析,分别发现13条和5条常规分子信号通路可能受到这些miRNA调控的信号通路,其中粘着斑(Focaladhesion)和ErbB信号通路具有较大相关性和研究价值。采用蛋白相互作用数据库分别对这两条通路与全能性核心转录因子网络进行相互作用预测,选取预测的关节节点进行蛋白表达验证,结果发现Y27632抑制了β-GSK3和β-ERK水平,维持了β-catenin的表达,并上调了c-Myc表达,提示这些信号信号在Y27632维持ES细胞自我更新过程中具有重要作用。

Gefitinib供应商 结论：Y-ES细胞可能处于与ES细胞及epiS细胞均不同的全能性状态。Y27632通过上调c-Myc作用参与ES细胞全能性调控网络；β-GSK3, p-ERK和β-catenin也可能参与了Y27632维持ES细胞自我更新的作用。
本研究利用microarray和RNA-seq等手段，对从国内外不同实验室来源的猪iPS细胞株进行了测定分析，获得了多维度的基因表达数据,并通过系统生物学整合分析深入探讨了猪iPS细胞多能性维持的分子机理。 利用基因芯片初步鉴定重编程完成情况，同时与已报道建系猪iPS基因表达谱比较，探讨猪iPS细胞多能性维持的调控网络。结果表明完全重编程的iPS细胞比部分重编程的iPS细胞高表达EPCAM，该基因可作为诱导猪多能性细胞的标记物。通过比较JAK-STAT,

NOTCH, TGFB1, WNT和VEGF通路相关基因在猪、人和小鼠多能性细胞中的表达情况，解析了猪多能性和自我更新维持的特性。na Alectinib制造商 ve状态特异的标记基因KLF2/4/5和TBX3在猪iPS中没有上调，但primed状态的标记基因OTX2和FABP7在猪iPS中上调。同时， DLK1-DIO3相关基因在猪iPS中异常表达，这能够解释目前较少有嵌合猪产生的报道。这些结果表明目前诱导和培养体系下得到的猪iPS接近于人，而区分于小鼠多能性维持状态。 利用通过RNA-seq比较了猪iPS细胞和成体细胞的基因表达谱，同时分析了不同生长因子依赖的猪iPS细胞基因表达谱的差异，这些差异基因可能为鉴定猪iPS细胞多能性维持的关键转录因子提供参考。对分析出的差异基因进行功能富集分析，从而揭示与猪多能性维持相关的重要细胞信号通路和代谢活动。分析结果表明猪iPS上调基因富集与“核糖体”，“染色质重塑”以及“细胞周期”等通路。我们的分析表明RNA剪接对于调控猪细胞的多能性具有关键作用，推算出了猪iPS细胞和成体细胞中出现的可变剪切体。我们以多能性维持核心转录因子SALL4为例说明了其可变剪切的模式，并通过RT-PCT和定量PCR进行了验证。本文最后分析了猪iPS中上调基因在猪早期胚胎发育过程中动态表达的情况。由此，建立了猪多能性维持的基因表达图谱，以上分析对于建立Na

ve状态的猪iPS细胞系具有参考意义。
胚胎干细胞（embryonic stem cell，ES细胞）是从早期囊胚内细胞团分离而出的多能性细胞。这些细胞能够体外培养无限增殖，维持自我更新，并且在特定条件下可以分化成为机体几乎所有类型的细胞。因此，ES细胞被认为是研究早期胚胎发育最重要的模型。对ES细胞的多能性维持和定向分化的研究能够为胚胎发育，再生医学和器官移植等临床医学研究提供重要的理论指导。 点击此处 在ES细胞中，多能性和定向分化的平衡被严格调控并处于一个相对稳定的状态。而这种平衡的维持，既需要转录因子及其构成的信号调控网络的调控，也有着来自表观遗传方面的调节，而microRNA（miRNA）作为一种重要的表观调控机制在ES细胞的多能性维持和分化调节中发挥着重要的作用。 研究发现，强烈的外部刺激，例如瞬间的低pH值胁迫，低氧胁迫等，均有利于诱导多能干细胞（induced pluripotent stem cells，iPS细胞）的形成。5-氨基咪唑-4-甲酰胺-呋喃核糖苷（5-Aminoimidazole-4-carboxamide ribonucleotide，AICAR）是一种膜通透性的AMP-激活的蛋白激酶（AMP-activated protein kinase，AMPK）的激活剂。它可以作为AMP的类似物，在不影响ATP，ADP和AMP水平的条件下激活能量代谢调控的关键蛋白激酶AMPK，从而抑制合成代谢，使细胞处于能量胁迫状态，影响ES细胞的多能性维持，但是其在ES细胞干性维持中的作用尚不清楚。本研究对AICAR处理及未处理的J1小鼠ES细胞进行研究，旨在揭示AICAR在ES细胞干性维持中的作用。主要的研究内容及结果如下： 1.

01)；且DM组低于CN组(P<0.01)。DMCI组的DM病程长于DM组,差别有统计学意义(P<0.05)。(2)三组患者IMT的差别有统计学意义(P<0.01),组间比较差别有统计学意义(P<0.01)。三组患者颈动脉粥样硬化斑块的检出率及不同性质斑块的检出率的差别有统计学意义(P<0.01)。斑块发生部位多见于颈总动脉近分叉处(61.3%),其次为颈内动脉起始处(20.5%),且易发生在双侧。(3)DMCI组的颈动脉斑块检出率显著高于CN组(P0.05)；其不稳定斑块检出率明显升高,与DM组、CN组的差异具有显著性(P<0.01或P<0.05)；多元线性回归分析表明TC、HbA1c、VEGF与EPCs的数量独立相关(P<0.01)。(5)DMCI组的外周血EPCs水平显著低于其它两组,且不稳定斑块患者EPCs水平低于稳定斑块患者,差异有统计学意义(P0.05)。(6)

DMCI组的外周血MMP-9水平显著高于其它两组,且不稳定斑块患者MMP-9水平高于稳定斑块患者,差异有统计学意义(P
目的：糖尿病神经病变(diabetic neuropathy,DN)是糖尿病常见的慢性并发症之一,随着糖尿病(diabetes mellitus, DM)发病率的增高,DN对健康的危害性日益明显。目前,对DN的预防和治疗主要以控制血糖和对症治疗为主,但疗效欠佳。因此对其病因及其发病机制的深入研究将有助于我们有效地干预DN的发生和发展。我们在临床工作中,对部分2型糖尿病患者进行的皮肤活检、肾活检和骨骼肌活检发现,以上器官有多种免疫复合物沉积,提示免疫因素参与了DM及其慢性并发症的发病过程。在随后完成的系列研究中,我们发现在链脲佐菌素(STZ)诱导的DM大鼠的脊髓、背根神经节和坐骨神经均存在免疫和炎症反应的激活,应用环孢菌素A(CsA)可明显延缓病变,保护组织。 一般 吡格列酮是噻唑烷二酮类药物(Thiazolidinediones, 那个 TZDs),目前作为胰岛素增敏剂广泛应用于临床。近年来的研究发现,TZDs药物还具有免疫调节和抗炎作用。本实验拟进一步研究STZ诱导的DM大鼠模型脊髓和腓神经的病理改变、发病机制以及吡格列酮的干预作用,为DN的临床治疗提供新的思路。 方法：96只雄性SD大鼠,随机抽取12只大鼠作为正常对照组(CON组),其余84只以静脉注射STZ的方法制造DM大鼠模型。所有成模大鼠根据血糖水平分层后,随机分为PIO小剂量治疗组(PioL组,4mg/kg/d)、PIO大剂量治疗组(PioH组,20mg/kg/d)、PIO联合甘精胰岛素治疗组(PiI组,PIO4mg/kg/d+甘精胰岛素4U//kg/dXCsA治疗组(CsA组,1mg/kg/d\CsA联合甘精胰岛素治疗组(CsI组CsAlmg/kg/d+甘精胰岛素4U//kg/d)、甘精胰岛素治疗组(Ins组,4U//kg/d)、DM未治疗组(DM组)。PIO配置成混悬液后予以灌胃,CsA溶于橄榄油后予以皮下注射,甘精胰岛素予以皮下注射。成模16周后处死。留取血、尿标本分别检测肝肾功能、血糖和胰岛素水平。HE染色光镜下观察各组大鼠脊髓和腓神经的组织学病理改变,通过免疫组化和免疫荧光方法检测上述器官IgG、IgA和IgM的沉积。采用免疫组化方法观察炎症因子TNFα及其信号转导通路NF-κB和p-p38MAPK蛋白在各组大鼠脊髓和腓神经的表达情况。

结果：1.STZ以45mg/kg的剂量静脉注射后,检测大鼠血糖大于16.7mmol/l,确定造模成功。2.造模16周后单用PIO或CSA干预组大鼠血糖较DM组血糖无统计学差异(p>0.05),表明其干预作用不依赖于血糖水平。3.各PIO和CSA干预组大鼠ALT、AST、TBIL水平与CON组比较无统计学差异(p>0.05),各PIO和CSA干预组大鼠血清ALB、BUN、Cr水平较DM组显著改善,有统计学差异(p<0.05)4.造模后16周,HE染色见DM各组大鼠脊髓无明显形态学改变；而腓神经出现轴突变细、髓鞘肿胀、神经血管周围淋巴细胞浸润的改变,各PIO和CSA干预组形态学损伤减轻,PioH组的损伤减轻程度接近CSA组。5.造模16周,DM组大鼠脊髓和腓神经可见IgG、IgA、IgM异常沉积,各PIO和CsA干预组大鼠脊髓和腓神经免疫球蛋白的沉积不同程度减少,以Csl组最明显,CSA组次之,PioH组改善情况接近CSA组,IOD值分析两组无统计学差异(p<0.05)。6.DM组大鼠脊髓和腓神经TNF-α、NF-κB和p-p38MAPK蛋白表达较CON组均明显增加,各PIO和CsA治疗组大鼠以上各项指标的组织表达水平不同程度降低,以CsI组最明显,CSA组次之,PioH组降低至接近CSA组水平,IOD值分析两组无统计学差异(p
目的：观察地佐辛和帕瑞昔布钠对切口痛大鼠行为、脊髓肿瘤坏死因子α

还有 (TNF-α)及血浆PGE-2表达的影响,探讨地佐辛和帕瑞昔布钠镇痛的可能作用机制,为临床联合使用地佐辛和帕瑞昔布钠进行术后镇痛提供依据。 方法：健康成年雄性Wistar大鼠32只,随机分为：对照组(DoPo组)、地佐辛组(D1Po组)、帕瑞昔布钠组(D0P1组)、联合地佐辛和帕瑞昔布钠组(D1P1组),每组8只。DoPo组做切口痛模型,尾静脉注射生理盐水；D1Po组在术毕随即尾静脉缓慢注射地佐辛5mg；D0P1组在术毕随即尾静脉缓慢注射帕瑞昔布钠10mg/kg; D1P1组在术毕随即尾静脉注射帕瑞昔布钠10mg/kg,地佐辛5mg。计数大鼠清醒后0-60min内12个时间段内的累计疼痛评分。大鼠清醒后2h腔静脉取血2m1,处死大鼠取脊髓膨大处,用ELISA试剂盒检测脊髓TNF-α和血浆PGE-2的含量。 结果： (1)与DoPo组比较：D1P0组,DoP1组,D1P1组大鼠累计疼痛评分下降(P<0.05)；与D1Po组比较：DoP1组疼痛评分升高(P<0.05),D1P1组评分小于D1P0(P<0.05)；与DoP1组比较：D1P1组大鼠累计疼痛评分下降(P0.05)；与D1Po组比较：DoP1组脊髓TNF-α表达增加(P0.05)；与DoP1组比较：D1P1组脊髓TNF-α表达下降(P<0.05)；与D1P0组比较：DoP1组,D1P1组血浆PGE-2水平均下降(P0.

0统计软件进行相关分析,多组间比较采用方差分析,两组之间的比较采用T检验,P0.05)。NiS能明显激活细胞P-JNK的表达(P0.05),阴性对照组细胞中P-ERK1表达值为0.210,NiS浓度分别为1、2、4.0μmol/L,染镍组细胞中P-ERK1表达值分别为0.216、0.219、0.226,FJD低、中、高剂量含药血清组和P-ERK1抑制剂对磷酸化P-ERK1的表达无明显影响(P>0.05)。4.NiS能明显激活NF-κB和NF-κB

此网站 P65的表达(P
糖尿病是一种慢性、全身性、代谢性疾病,主要是由于体内胰岛素分泌绝对或相对不足引起,表现为血糖升高,伴以脂肪、蛋白质、水、电解质代谢紊乱。糖尿病发病机制复杂,能引发多种血管并发症。目前市场上的药物不能完全有效地达到治疗目的,且治疗费用昂贵,存在一定的副作用。研究人员试图寻找有效的天然产物以改善糖尿病症状,同时达到减少副作用,降低治疗费用的目的。 蜂胶是蜜蜂采集的一种树脂类混合物,其成分复杂,目前已知蜂胶所含成分超过300种,主要包括黄酮类、酚类、芳香族类、有机酸类、酯类、醛类、醇类、烯烃类、萜类和挥发性成分等。蜂胶具有免疫调节、抗氧化、抗炎、护肝、抗肿瘤、抑制病原微生物等多种生物学活性。我们先前的研究也证明蜂胶能有效降低糖尿病模型大鼠血糖,改善氧化应激。 蜂胶的生物学活性受植物来源、采集地点、采集蜂种和提取方法等多种因素影响,但是化学成分的差异是造成蜂胶活性变化的主要原因。巴西蜂胶(绿蜂胶)主要胶源植物是Baccharis dracunculifolia DC,其主要的活性成分是异戊二烯-对-香豆酸及其衍生物,而中国蜂胶(杨树型蜂胶)的主要活性成分为黄酮类化合物。巴西蜂胶和中国蜂胶成分的差异可能导致两种蜂胶对糖尿病症状的改善效果存在差异。

在本研究中,我们利用链脲霉素构建1型糖尿病(T1DM)大鼠模型,链脲霉素+高脂饲料构建2型糖尿病(T2DM)大鼠模型,通过研究大鼠尿液、血液和肝肾生化指标及肝肾组织病理变化,比较中国蜂胶和巴西蜂胶改善糖尿病大鼠糖代谢、脂质代谢、蛋白质代谢、氧化应激和肝肾功能的效果。同时测定T2DM大鼠肾组织内促炎细胞因子IL-2、IL-6、TNF-α及MCP-1 mRNA表达,测定PKCmRNA表达以及TGF-β1表达,测定大鼠肾脏血流动力学指标,探讨蜂胶改善糖尿病肾病可能的作用机理。实验结果如下： 1.蜂胶改善T1DM大鼠的效果 以拜糖平为阳性药(1mg/100g,每天两次),观察中国蜂胶和巴西蜂胶(设定高、低剂量组,分别为10mg/100g和5mg/100g,每天两次)改善T1DM模型大鼠的效果。正常组和模型组大鼠给予生理盐水(1mg/100g,每天两次)。实验持续8周。 1)体重和糖代谢：中国蜂胶和巴西蜂胶均能明显减缓T1DM大鼠体重下降以及血糖升高,呈现剂量效应。在相同剂量下,中国蜂胶效果略优于巴西蜂胶；中国蜂胶能显著降低T1DM大鼠血清HbAlc水平,呈现剂量效应,巴西蜂胶效果不明显；2)脂质代谢：与正常组大鼠相比,模型组大鼠血清TG和TC含量显著增加。高剂量中国蜂胶能明显降低T1DM大鼠血清TC水平；3)血液氧化应激：与正常组大鼠相比,模型组大鼠血清MDA、NO和NOS含量明显增加,而SOD和CAT含量明显下降。中国蜂胶和巴西蜂胶能改善T1DM大鼠氧化损伤。与模型组相比,高剂量中国蜂胶能显著降低大鼠血清MDA含量,低剂量中国蜂胶能有效提升血清SOD含量；巴西蜂胶能明显增加血清SOD含量,且低剂量巴西蜂胶能显著降低血清MDA含量。巴西蜂胶还能有效降低血清NOS含量；4)肝功能和氧化应激：与正常组相比,模型组大鼠血清ALT和AST含量显著增加,并出现氧化应激现象。中国蜂胶和巴西蜂胶能显著降低血清ALT和AST含量,而阳性药效果不显著。中国蜂胶显著提升肝脏GSH-px,但对肝脏MDA含量影响不显著,而巴西蜂胶能全面恢复肝脏各类抗氧化酶含量,抑制MDA产生。肝脏组织切片HE染色结果表明,与正常组大鼠相比,模型组大鼠肝脏病变程度并不严重,而各给药组大鼠肝组织形态基本维持正常；5)肾功能和氧化应激：与正常组相比,模型组大鼠BUN、尿液总蛋白、尿液白蛋白含量显著增加,而肾脏病理组织HE染色结果显示模型组大鼠肾脏肾小管上皮细胞空泡化,出现肾小管上皮管型,这表示糖尿病大鼠开始出现肾病症状。中国蜂胶和巴西蜂胶均能降低尿液中白蛋白含量,同时巴西蜂胶能抑制BUN和尿液总蛋白升高。观察蜂胶组大鼠肾脏组织切片发现,蜂胶能减少肾小管上皮细胞空泡化现象。对肾脏组织氧化应激水平检测发现,两种蜂胶均能有效提升肾脏CAT,抑制肾脏脂质过氧化并降低GSH-px含量。

一般 2.蜂胶改善T2DM大鼠的效果 Selleckchem Abiraterone 以卡司平为阳性药(1mg/100g,每天两次),观察中国蜂胶和巴西蜂胶(单剂量,5mg/100g大鼠体重,每天两次)改善T2DM模型大鼠的效果。正常组和模型组大鼠给予生理盐水(1mg/100g,每天两次)。实验维持8周。 1)体重：中国蜂胶和巴西蜂胶均能减缓T2DM大鼠体重下降,但效果不显著,中国蜂胶在实验第8周能明显抑制实验大鼠体重下降；2)糖代谢和胰岛素：巴西蜂胶能降低糖尿病大鼠血糖含量,但效果不明显；中国蜂胶在实验前4周能显著降低血糖含量,而在实验后4周则不能显著降低血糖含量：阳性药卡司平在第2周能显著降低血糖含量,但在第8周却促进血糖升高。尿糖检测结果发现,蜂胶和阳性药在整个实验周期能有效降低尿糖含量。从HbAlc分析发现,阳性药能降低糖尿病大鼠HbAlc含量,但效果不明显：A组大鼠(饲喂中国蜂胶)和B组大鼠(饲喂巴西蜂胶)HbAlc含量在第4周比模型组大鼠分别低8.6%和10.2%,效果显著；实验第8周A组大鼠(饲喂中国蜂胶)HbAlc含量比模型组大鼠低5.

7％ vs 28.3±11.1％p＜0.001)显著降低。与生理盐水组比较，福辛普利组左室舒张末期内径(LVIDd)(8.76±1.73

vs 6.91±0.67mm，p＜0.001)、左室收缩末期内径(LVIDs)(6.44±2.13 vs 4.69±0.90mm，p＜0.01)、左室舒张末期容积(LVEDV)(0.494±0.173 vs 0.364±0.116ml，p＜0.05)和左室收缩末期容积(LVESV)(0.315±0.140 vs 0.194±0.086ml，p＜0.01)
背景：神经病理性疼痛是医学领域的挑战性研究课题，目前发病机制不清，尚缺乏有效的治疗措施；因此寻求新的药物显得非常迫切；而对其发病机理的研究是寻找药物作用靶点的基础。脊髓背角神经元在疼痛的感知和传递中发挥重要作用；脊髓背角神经元接受外周感觉神经的传入，然后将这些信息再传递到大脑，并接受和整和从大脑传来的下行控制信号。许多对疼痛传递有重要作用的分子位于脊髓背角；外周神经损伤引起中枢敏化的原因可能是脊髓背角生物化学特性发生了改变。目前研究显示外周神经损伤引起初级感觉神经原(DRG)的基因表达发生改变，但是对脊髓背角基因调控方面的研究却很少。因此研究外周神经损伤后脊髓背角基因表达的变化对探索神经病理性疼痛的机制非常重要。 GSK126 目的：研究神经病理性疼痛形成过程中脊髓背角基因表达的改变，从基因的角度探索其发病机理，为进一步的药物治疗提供基础。 方法：二级健康SD大鼠60只，六周龄、雄性、体重160-200克；随机分为四组：组D假手术组(n=30)，仅暴露坐骨神经不结扎：其他三组为CCI模型组：组A组(术后3天组)(n=10)；组B(术后7天组)(n=10)；组C(术后14天组)(n=10)。通过检测热痛敏和机械异常痛敏等指标确认模型建立成功。手术后3天、7天和14天分别取模型和假手术组大鼠脊髓背角(L_(4-6))，立即存入液氮；随后提取mRNA、经纯化、荧光标记、杂交与清洗、芯片扫描、芯片图像的采集与数据分析，检测模型组与假手术组脊髓背角的基因差异表达＞2.0或小于0.5倍，认为有显著性差异；最后经qRT-PCR验证，得到相应上调或下调的
背景 为什么 高血压的发生、发展与水盐代谢紊乱密切相关，肾小球旁器在肾脏调节水盐代谢过程中占有重要的作用。近年来的研究发现在哺乳动物肾脏，PGE_2在致密斑(macula densa，MD)细胞调节肾素分泌的作用中占有举足轻重的位置。在以往的研究中，不少学者已证实盐摄入的减少和肾脏灌注压的降低都能引起肾脏MD和近皮质的髓袢升枝粗段(conical thick ascending

limb，cTALH)细胞COX-2表达增加。而这两种实验条件都可能导致临近MD的肾小管管腔内NaCl浓度降低，为此有理由认为COX-2可能参与肾血管阻力的调控及MD细胞对肾素分泌的调节。调节COX-2基因转录的信号传导通路、顺式作用元件很多，但是关于这方面的研究多集中在参与炎症反应的细胞和肿瘤细胞，而在MD细胞中的相关研究并不多见。CsA能抑制肾脏COX-2表达，CsA对肾脏的损害是否与这些作用有关值得进一步探讨。本研究目的是探讨低盐刺激对肾脏MD细胞COX-2表达的影响，观察参与COX-2转录调节的MAPK信号传导通路，首次用瞬时转染的方法研究MD细胞AP-1、NFAT、NF-κB的转录活性，以及c-Jun、c-Fos、NFAT蛋白的表达，并探讨CsA对COX-2表达的可能影响机制。 方法 本研究选用SD大鼠和MMDD1细胞株分别进行体内及体外研究。即： 1．SD大鼠随机分为8组，每组8只：1正常盐饮食(NS)；2 NS+CsA(15mg/d／kg)；3 NS+Cele(塞来昔布，40mg/d／kg)；4

NS+CsA+Cele；5低盐饮食(0.03％NaCl，LS)；6 LS+CsA；7 LS+Cele；8 LS+CsA+Cele。7天后手术取动物标本，用RT-PCR方法检测肾脏皮质COX-2、肾素mRNA表达，用免疫印迹方法分析各组皮质COX-2蛋白表达，对组织切片进行COX-2免疫组化染色。 2．低盐(loW salt，LS)培养MMDD1细胞，在有／无CsA作用下，用RT-PCR和免疫印迹方法分析其COX-2的表达。用ELISA方法分析正常盐(normal salt，NS)与LS培养对MMDD1细胞PGE_2分泌的影响。用免疫印迹检测MMDD1细胞p-p38、pErk和pJNK的变化。 3．MMDD1细胞经脂质体转染含NF-κ3、AP-1、NFAT的荧光素酶报告质粒，采用瞬时表达方法检测LS／LS+CsA培养对NF-κB、AP-1、NFAT转录活性的影响，免疫印迹方法检测其对c-Jun、c-Fos、NFAT Lonafarnib细胞系 c1蛋白表达的影响。 4．各组数据用(?)±SD表示，用SPSS11.5软件进行单因素方差分析，方差具
肝再生增强因子(Augmenter of Liver Regeneration ALR)是一种能保护肝脏和特异性促进肝脏细胞增殖的细胞因子，极具潜质成为治疗肝病的基因工程药物。已有的研究表明，ALR与Na~+，K~+-ATPase在体内、体外都能直接结合。但在肝脏细胞中，ALR促进细胞增殖与Na~+，K~+-ATPase的关系未见有相关报道，本文就此问题展开研究，得到以下结果。 在细胞水平，采用MTT、[~3H]-TdR掺入和流式细胞仪等方法测定重组人ALR蛋白对细胞增殖的影响。ALR能以浓度依赖效应加速来源于肝脏细胞的DNA合成，改变细胞周期，促进细胞增殖，其起效浓度是50μg／L，最佳的作用浓度范围是100μg／L～200μg／L。抗ALR单克隆抗体能有效阻断ALR的上述作用。对本研究中采用的其他来源的细胞，ALR无促进其增殖的作用。对于HepG2细胞，ALR促进其增殖与Na~+，K~+-ATPase的酶活密切相关，部分抑制Na~+，K~+-ATPase活性，能够减弱ALR促细胞增殖作用；若完全抑制Na~+，K~+-ATPase活性，ALR对细胞增殖不产生影响。 酶活力测定和蛋白免疫印迹证实：ALR能以浓度—时间效应的方式提高细胞Na~+，K~+-ATPase的酶活。半最大刺激浓度为42±11μg／L，ALR对HepG2细胞Na~+，K~+-ATPase的影响表现为短时间大量激活，在5min刺激时，细胞Na~+，K~+-ATPase的酶活达到最大。在ALR的刺激下，HepG2细胞Na~+，K~+-ATPase的V_(max)由0.84±0.11μmol.mg~(-1).min~(-1)上升到1.68±0.07μmol.mg~(-1).min~(-1)(p＜0.01)，而K_m则由23.54±0.12mmol／L减小到20.86±0.13mmol／L(p＞0.

CBX7在胃癌干细胞悬浮球中高表达,其在调控胃癌干细胞样细胞自我更新能力、克隆增殖能力等特性中发挥重要作用。 2.不同胃癌细胞系中肿瘤干细胞标志物存在差异。 3. pAkt、pERK是新发现的CBX7下游靶基因,且CBX7亦可调节miR-21的表达。 4.在p16表达的胃癌细胞中,CBX7通过抑制p16表达调控胃癌干细胞自我更新、克隆增殖等干细胞相关特性；在p16缺失的胃癌细胞中,CBX7调控胃癌干细胞样特性的作用机制须进一步探索。 5.基于不同肿瘤细胞系生物学特性不同,其肿瘤干细胞特性的调节机制存在差异。
肝细胞癌(HCC)是最常见的肝癌,占90%的原发性肝癌。在过去的十年中,它已成为一个最经常发生的肿瘤,也被认为是全球最致命的癌症,占所有恶性肿瘤的三分之一。肝癌的发生是一个由外部刺激引起的多步骤过程,外部刺激导致肝细胞基因的突变,进而使细胞增殖、凋亡、畸形和癌变。MCM7及ANXA2都是与肿瘤相关的蛋白,为了它们与肝细胞癌的关系,我们应用免疫组织化学法检测MCM7、ANXA2蛋白在肝细胞癌组织及正常肝脏组织中的表达情况,探讨二者与肝细胞癌的关系及其临床意义。

Lumacaftor体内 目的 检测MCM7、ANXA2蛋白在肝细胞癌组织及正常肝脏组织中的表达,根据MCM7蛋白和ANXA2蛋白在上述组织中的表达及其与临床病理特征,探讨二者与肝细胞癌发生、发展的关系及其意义。 方法 收集于2011年1月至2012年6月在郑州大学第一附属医院行肝癌肝脏切除术的86例癌组织标本,患者术前均未接受化、放疗治疗,且术后病理证实为原发性肝细胞癌,38例正常肝组织取自肝脏良性病变或外伤患者。采用免疫组化方法(SP法)方法检测上述组织中的MCM7和ANXA2的表达,用统计学方法分析二者在肝细胞癌中表达的相互关系,并同时分析二者与患者的临床病理资料(如：患者的年龄、性别、癌栓、肿瘤大小、是否合并乙肝肝硬化、分化程度、甲胎蛋白、肿瘤数目等)的关系。

结果 1. ANXA2在肝细胞癌组织中的阳性表达率为83.7%,在正常肝脏组织中阳性表达率为8.3%(3例)两者的差异具有显著性(P<0.05)；ANXA2蛋白在肝癌中的表达与乙肝阳性、肿瘤大小及静脉癌栓有关(P0.05)。 2. MCM7在肝细胞癌组织中的阳性表达率为77.9%,在正常肝脏组织中未见明显表达,差异具有较明确的统计学意义(P<0.01)；MCM7蛋白在肝癌中的表达与AFP、肿瘤大小及病理分级有关(P0.05)。 3.用Spearman等级相关分析检测二者的相互关系,结果显示在肝细胞癌组织中,MCM7蛋白与ANXA2蛋白的表达呈正相关(r=0.265,P
胆管细胞癌是一种来源于肝内或肝外胆管上皮的肿瘤，根据解剖学部位，以二级肝胆管为界，胆管细胞癌分为肝内胆管细胞癌（ICC）和肝外胆管细胞癌（ECC），ICC的发病率占整个肝脏恶性肿瘤的5%～10%[9]。在原发性肝脏恶性肿瘤中位居第二位[1,2]，发病率约占消化系统恶性肿瘤的3%[1]。近年来，北美、欧洲、澳大利亚和亚洲的发病率有上升趋势[2,3,4]。胆管细胞癌早期诊断困难，恶性程度高，治疗效果欠佳，因此，大多数患者的预后较差。目前认为，根治性切除术是胆管细胞癌最有效的治疗手段。但术后复发率较高，并且只有约10%的患者在诊断时适合手术。报道显示胆管细胞癌患者根治性切除术后5年生存率不到30%[5-7]。因此，目前对于晚期的胆管细胞癌，化疗成了仅剩的治疗选择，大多数的化疗方案都基于5-Fu或吉西他滨。 索拉非尼是一种多激酶抑制剂，一方面通过靶向作用于RAF/MEK/ERK信号传导通路中的RAF激酶阻断肿瘤细胞增殖，另一方面靶向作用于血管内皮生长因子受体-2/-3（VEGFR-2/-3）和血小板衍生生长因子受体β（PDGFR-β）、Flt3和C-kit受体而发挥抗血管生成效应[8]。已成功地应用于肾癌、肝细胞癌等实体瘤的治疗。在体外实验中索拉非尼单用或联合使用都能诱导肿瘤细胞生长抑制和凋亡。近年来，学者们试图从胆管细胞癌的分子机制找到索拉非尼的治疗切入点，对此做了大量的研究探索，下面两个研究结果给索拉非尼治疗肝内胆管细胞癌提供了有力的理论支持。Alexander[38]等发现胆管癌细胞中的EGI-1和TFK-1与索拉非尼存在剂量依赖性关系，通过此通路可抑制胆管癌细胞生长；抑制细胞繁殖的作用表现在对细胞循环（通过抑制G1/G0期的细胞循环）的抑制作用。另外还观察到索拉非尼可以激活MAPK通路（调控细胞生长、转变和凋亡的关键信号通路）。另一项关于索拉非尼对人类ICC细胞体内、体外的实验[39]结果显示，经索拉非尼处理过的ICC细胞，在（mitogen-activatedprotein

那个 kinase kinase）MEK通路、MAPK（mitogen-activated protein kinase）通路，以及IL-6诱导的STAT3（signal transducer and activator of transcription3）通路均发生了剂量依赖性细胞抑制的表现。在体内实验中，经口分别给予索拉非尼10mg/kg、30mg/kg和100mg/kg三个剂量，发现均能显著抑制免疫缺陷老鼠皮下肿瘤的生长。总之，上述研究表明索拉非尼对肝内胆管细胞癌是比较有活性的一个药物，它可以同时抑制肿瘤血管生成（VEGF和PDGF信号通路）和肿瘤细胞生长（Raf激酶和STAT3信号通路）。为索拉非尼单药或与其他药物联合治疗肝内胆管细胞癌提供了可靠的理论基础。本研究的目的在于观察索拉非尼治疗进展期肝内胆管细胞癌的有效性和安全性。 已经 实验方法： 1.病例选择：45例符合入、排标准的进展期肝内胆管细胞癌患者。 2.治疗方案：索拉非尼（多吉美，德国拜耳公司），400mg（2×200mg，片剂）口服，每日早、晚（即每12h）各服一次，连续用药。用大约250ml水整片吞服，空腹或与中等含量脂肪餐同时服用，服药后可立即进食。患者应持续服用，直至满足任何一个停药标准，如肿瘤进展，或患者不耐受，或依从性差，或撤回知情同意等。 3.观察相关指标：主要指标（12周时的疾病控制率，DCR）；次要指标（至疾病进展时间，TTP；无进展生存期，PFS；总生存期，OS；治疗持续时间，DOT；安全性） 4.治疗期访视：1～3个月每3周访视一次，访视窗为±3天；之后每6周访视一次，访视窗为±7天。访视内容：ECOG体能状态评分、实验室检查（全血细胞计数、肝肾功能检查、凝血指标检查）、肿瘤评估（每6周一次CT/MRI，影像学检查方法要前后一致）、索拉非尼用药信息、毒性和不良事件。索拉非尼治疗结束后30天内的不良事件仍需记录 5.生存随访：随访终生，每3个月一次（可以电话进行），记录患者的生存情况。 6.

05)。 三、大鼠海马P-ERK1/2的表达 假手术组无p-ERK阳性细胞表达,CA1区和CA3区IOD值(SUM)在2h最高,之后就逐渐降低,均有下降趋势。CA1区和CA3区电针各组IOD值(SUM)表达均比模型各组表达低,CA1区和CA3区电针组2h组、1d组、3d组和模型2h组、1d组、3d组比较也有差异,有统计学意义(P＜0.05),CA1区和CA3区电针2h组IOD值(SUM)表达较3d组高,比较均有差异,有统计学意义(P＜0.01)。

四、大鼠海马NMDAR1的表达 CA1区和CA3区电针各组IOD值(SUM)比模型组均要低,2h最高,之后下降,均有下降趋势。CA1区和CA3区电针2h组、1d组、3d组与模型2h组、1d组、3d组比较有差异,存在统计学意义(P＜0.05)。CA1区和CA3区电针2h组分别和电针3d组比较,都存在显著差异,有统计学意义(P＜0.01)。CA3区模型组2h组和电针2h组存在显著性差异,有统计学意义(P＜0.01)。 五、大鼠海马AMPA受体(GluR1)的表达 CA1区和CA3区电针各组IOD值(SUM)比模型组均要低,2h最高,且均有下降趋势。电针2h组、1d组、3d组与模型2h组、1d组、3d组比较有差异,也存在统计学意义(P＜0.05)。CA3区电针2h组与模型组2h组比较有明显差异,有统计学意义(P＜0.01),CA1区电针1d组与模型组1d组比较有明显差异,有统计学意义(P＜0.01)。CA1区和CA3区电针2h组和3d组比较,存在显著差异,有统计学意义(P＜0.01)。 结论 通过神经功能评分的观察说明本次实验造模是成功的,且提示电针对脑缺血大鼠的神经缺损症状有明显改善促进作用。本研究通过电针干预MAPK/ERK信号通路的表达,来观察MAPK/ERK信号通路脑缺血中的作用机制和作用途径,以及与脑缺血损伤和LTP产生和维持密切相关的NMDA受体和AMPA受体的表达,从而阐述MAPK/ERK信号通路与脑缺血间的关系,并对电针干预其机制作相关探讨。本研究发现脑缺血后2h,CA3区ERK磷酸化的表达显著升高,而1d和3d的表达则连续降低,CA1表达比CA3区弱,这可能与2个区对于缺血的耐受不同引起的。且NMDA受体和AMPA受体与ERK磷酸化的表达相一致,这说明MAPK/ERK信号通路在脑缺血中的表达可能与NMDA受体和AMPA受体的表达有关,但在海马各区表达却不尽相同。电针干预后,各指标均比模型组降低,提示:1.电针可以调控MAPK/ERK信号通路,干预脑缺血早期MAPK/ERK信号通路对神经元可能产生的毒性作用,对大脑起到保护作用。2.探讨了MAPK/ERK信号通路脑缺血中的机制,可能主要是通过MAPK/ERK信号通路的激活使NMDA和AMPA等兴奋性氨基酸更易介导,从而对神经元产生毒性作用。3.NMDA和AMPA等受体是LTP产生和维持的重要递质,脑缺血早期MAPK/ERK信号通路的激活和NMDA和AMPA受体的高表达可能对后期存活的神经元的突触重建产生重要影响。

或者 selleck激酶抑制剂 本课题创新点:1.在脑缺血模型大鼠中首次系统的观察了针刺对MAPK/ERK的调节干预作用,为临床治疗脑缺血疾病提供了新的理论依据。2.观察了与突触可塑性密切相关的NMDA和AMPA受体的表达,提出了在脑缺血急性期它们的高表达除了产生神经元毒性作用外,可能还会产生病理性的突触可塑性作用,同时电针可以抑制这种作用,为突触重建的早期机制提供了新的思路。
急性心肌梗死(acute myocardial infarction, AMI)后心肌,特别是左室心肌细胞及细胞外基质(extracellular matrix, ECM),在结构、功能、形态等方面而出现的适应性、增生性变化称为AMI后心室重塑。AMI后心室重塑是发生心力衰竭的重要病理生理基础,也是影响AMI患者预后的主要原因之一。研究表明,AMI后心室重塑的发生发展与激素和体液因素,如肾素-血管紧张素-醛固酮系统、循环-内分泌系统平衡失调密切相关。临床上用血管紧张素转化酶抑制剂(ACEI)或血管紧张素受体拮抗剂(ARB)防止AMI后心室重塑取得较好效果,一些单味中药、复方制剂、重要注射剂也能有效逆转心室重塑。

近年发现,AMI早期心肌缺血和损伤部位各种细胞释放大量促炎细胞因子,这些因子所引发的炎性反应在AMI诱发心室重塑中发挥重要作用。因此,寻找有效的早期炎症干预措施,对于减缓心室重塑具有重要意义。已经证明,核因子κB(nuclear factorκB, NF-κB)是调节促炎细胞因子、趋化因子、黏附分子等基因表达的关键转录因子,参与激活上百种促炎反应相关基因的表达,介导炎性反应、免疫应答、细胞增殖等多种细胞生物学事件。 促炎细胞因子有白细胞介素(IL)、肿瘤坏死因子(TNF-α)和干扰素(IFN)等多种,它们大多均为NF-κB的靶基因。近年证明,TNF-α在梗死后的心肌组织中表达上调,并进而介导胶原和基质金属蛋白酶基因的表达,被认为在AMI后心室重塑中发挥重要作用。转化生长因子β(TGF-β),虽然可抑制促炎细胞因子的生成,但依据细胞所处环境的不同,兼有抗炎和促炎双重作用。现有研究结果表明,TGF-β在心肌缺血损伤部位表达增加,在心肌纤维化早期和心室重塑过程中起重要作用。基于这些研究结果,TNF-α和TGF-β拮抗剂作为抗炎药物在动物模型上对防治AMI后心室重塑取得一定效果。 因为 通心络是基于络病理论研制的防治心血管病变的代表方,该方可通过降低心肌局部血管紧张素Ⅱ水平、调节降钙素基因相关肽(CGRP)和内皮素(ET)之间的平衡、抑制胶原纤维合成等多条途径防治AMI后心室重塑。但该方对AMI引发的早期炎性反应是否具有拮抗效应及其作用机制目前尚不清楚。本研究以急性心肌梗死诱发心室重塑的炎性反应机制为切入点,建立大鼠AMI模型,以促炎细胞因子为主要观测指标,系统研究通心络对AMI诱发心肌炎性反应的拮抗效应及其作用机制。 1通心络对急性心肌梗死诱发的NF-κB表达的影响 结扎大鼠冠状动脉左前降支制备AMI动物模型后,分为大剂量通心络组、小剂量通心络组、卡托普利组和对照组。给药4周后处死动物,TCC染色法测量心肌梗死面积,组织切片经HE染色后观察形态学变化,电镜观察超微结构改变,RT-PCR检测NF-κB基因表达。 1.1大鼠AMI模型的鉴定大鼠行冠脉左前降支结扎术后,取心脏常规固定、切片后,进行TCC染色,测灰白色区域的面积,灰白色区域的面积与左心室重量比值,结果表明,各组梗死面积无显著差异,证实AMI动物模型制备成功。 1.

6%和8.3%（p＝0.035），在吸烟和不吸烟两个亚组当中分别为28.2%和6.3%（p＝0.029），差异均存在统计学意义。在高龄和非高龄两个亚组当中分别为17.6%和23.3%（p＝0.371），在鳞癌和腺癌两个亚组当中分别为8.0%和23.9%（p＝0.414），差异均无统计学意义。即在NSCLC配对转移灶当中c-MET扩增在男性、吸烟患者明显升高：出现N2以上淋巴结转移患者的淋巴结转移灶组织中，男性为28.6%（10/35）存在扩增，吸烟患者为28.2%（11/39）存在扩增，其中男性吸烟患者味30.4%（7/23）存在扩增。 结论 1.参与本次实验中国人群NSCLC患者的肿瘤组织原发灶中c-MET基因扩增阳性率为8.84%，较国外文献报道偏高，与国内报道的阳性率并不一致，但本次结果在国内报道阳性率的范围内，由此预测中国人群c-MET基因扩增率高于欧美人群。考虑到针对c-MET基因扩增的分子靶向药物治疗可以使近十分之一的NSCLC患者获益，故c-MET基因扩增检测应当同EGFR、EML4-ALK等共同作为NSCLC的常规基因检测项目。 时间 2.在原发灶和淋巴结转移灶c-MET扩增阳性率并不相同，淋巴结转移灶高于原发灶。考虑到淋巴结转移灶c-MET扩增阳性率的升高是基于原发灶的扩增情况的，发生淋巴结转移能够放大原发灶扩增的情况。原发灶扩增阳性者淋巴结转移灶扩增更加明显，原发灶未发生扩增者淋巴结转移灶亦无明显扩增，原发灶只是发生轻度扩增而导致无法检出者，淋巴结转移灶会发生较明显的扩增，从而将这部分c-MET扩增患者检出。多数原发灶c-MET扩增阳性的患者，淋巴结转移灶扩增也为阳性，灵敏度和特异度均较高，一致性良好。因而，对淋巴结转移灶进行c-MET基因扩增检测能筛出更多有适应症的患者。以往的分子靶向治疗经验已证明，无论是原发灶还是转移灶出现基因突变，都可以作为相应分子靶向药物治疗的适应症。综上所述，用淋巴结转移灶进行c-MET基因扩增的检测，效果优于原发灶。

3.本次研究当中发现c-MET基因扩增在原发灶与基线资料无关，但在淋巴结转移灶男性患者高于女性患者，吸烟患者高于不吸烟患者，提示对于存在N2级以上淋巴结转移的男性吸烟患者，c-MET基因扩增检测对其有非常重要的临床诊疗价值，对于这类型的患者，如果有可能，均应对其淋巴结转移灶进行c-MET基因扩增的检测。
目的： 通过检测正常子宫内膜、不典型增生子宫内膜及子宫内膜样腺癌中CD44v6、c-met的表达水平，分析两者在子宫内膜样腺癌中表达及与临床病理的关系,探讨两者在子宫内膜样腺癌发生及发展过程中的作用。 方法： 查阅病例资料，选取在我院手术治疗的子宫内膜样腺癌患者癌组织石蜡标本69例，同期不典型增生子宫内膜30例，正常子宫内膜20例，应用免疫组织化学MaxVision法检测c-met、CD44v6在三组中的表达情况。 结果： 1.CD44v6在正常子宫内膜、不典型增生子宫内膜、子宫内膜样腺癌组织中的阳性表达率分别为25.0%、40.0%、85.5%，三组之间CD44v6表达差异具有统计学意义(P＜0.05）；在I期、II期、III-IV期子宫内膜样腺癌组织中，CD44v6阳性表达率分别为78.94%、84.62%、91.67%，差异显著((P＜0.05)；在
研究背景：

肝癌干细胞是肝癌组织中一小群具有干细胞样特性的细胞，与肝癌的生长、复发、转移和耐药相关，可作为今后肝癌诊断和治疗的的靶标。肝细胞生长因子（HGF）及其受体c-Met是包括肝脏在内的多种组织器官发育、修复和再生必不可少的刺激分裂原。而在肝癌组织中，c-Met的高表达和c-Met通路的异常激活与肝癌癌肿大小、分期、肝癌复发转移、患者预后等密切相关。选择性c-Met抑制剂已被证明能够在体内和体外抑制肝癌细胞生长，并且已有临床前期试验证明针对c-Met的分子靶向治疗药物对晚期肝癌患者安全有效。近年来的多项研究表明，HGF/c-Met通路参与了多种肿瘤干细胞（CSCs）的调控，甚至有报道认为c-Met可以直接作为某些肿瘤的干细胞标志物。那么HGF/c-Met信号通路是否也参与了肝癌干细胞（LCSCs）的调控将是本课题研究的内容。 也许 目的：探讨HGF/c-Met信号通路对肝癌细胞系干细胞样表型的影响。 方法： 1.通过Real-time PCR、细胞免疫荧光化学、Western-blot及流式细胞仪检测肝癌细胞系中c-Met的表达情况。 2.通过Western-blot方法验证HGF刺激引起c-Met通路活化后，其下游信号通路的激活情况。 3.采用HGF或c-Met特异性抑制剂PHA665752激活或抑制c-Met信号通路，光镜下观察细胞形态学变化，Western-blot检测细胞EMT表型变化，Transwell实验检测细胞迁移、侵袭能力变化，克隆形成实验检测细胞增殖能力变化。

4.通过悬浮克隆球形成实验检测HGF/c-Met信号通路对肝癌细胞自我更新能力的影响，Real-time PCR检测c-Met通路激活后干细胞相关基因及LCSCs相关表面标志物的表达变化，流式细胞仪检测HGF激活c-Met通路后肝癌细胞中LCSCs比例变化。 结果： 1. Huh7肝癌细胞与HepG2、SMMC7721和MHCC97-H细胞相比，在mRNA水平和蛋白水平均呈现相对低表达，而HepG2、SMMC7721和MHCC97-H细胞呈现相对高表达。流式细胞仪检测结果显示即使在c-Met相对低表达的Huh7细胞中，c-Met+细胞的比例也达到了75.6%，而在HepG2、SMMC7721和MHCC97-H细胞中比例更高。 这个 2. HGF能够有效促进c-Met蛋白发生磷酸化，从而激活c-Met信号通路，引起其下游Erk、Akt、Stat3通路的活化。 3. HGF/c-Met信号通路激活后，MHCC97-H细胞发生了EMT样形态和表型变化，Huh7和MHCC97-H细胞的迁移、侵袭、增殖能力均得到增强，而c-Met特异性抑制剂PHA665752能够抑制细胞的上述改变。 4. HGF/c-Met信号通路的激活增强了Huh7和MHCC97-H细胞的自我更新能力，促进了细胞在悬浮状态下克隆球的形成，干细胞相关基因（c-Myc、Klf4、Oct4、Wnt7B）及LCSCs相关标志物（CD90、ABCG2、EpCAM）呈不同程度的表达上调，流式细胞仪检测的结果显示MHCC97-H细胞在HGF/c-Met通路激活后CD90+LCSCs和SP细胞的比例增加。 结论： 1. c-Met是一种在肝癌细胞系中广泛表达的具有酪氨酸激酶活性的表面受体，并且c-Met信号通路的激活会引起其下游级联放大的细胞内多条重要信号通路的活化。 2. HGF刺激引起的c-Met通路激活促进了肝癌细胞EMT的发生，增强了肝癌细胞的迁移、侵袭和增殖能力。 3.

L-1;在TGFβ1(10μg.L-1)诱导下,SB 431542(0.1、0.5、1.0、10μmol.L-1)可剂量依赖性抑制Col Iα1、PAI 1和FN的mRNA在HLF细胞内的转录。结论SB 431542可明显抑制由于肺内TGFβ1信号系统增强而引起的ECM的合成,表明作用于TGFβ1途径的SB

431542或其他小分子化合物可能对防治肺纤维化有效。
血管组织工程学是新近兴起的一门学科,其目的是经过胚胎干细胞的体外培养形成血管。其中,种子细胞来源是关键,胚胎干细胞由于不存在异种排斥问题,是理想的选择。现在许多学者进行了由胚胎干细胞向血管内皮细胞的转化研究,取得了初步的进展,这些研究解决了许多理论和实践上的问题,促进了血管组织工程的发展。

转化生长因子-β(TGF-β)是一类多功能的细胞因子,具有非常广泛的生理作用,其信号异常与许多重要疾病的发生和发展高度相关。本文综述了TGF-β信号通路研究的新进展,并重点介绍了其信号通路的阻断剂,主要是其受体ALK5抑制剂的研究概况。
BMPs属于TGF-β超家族的一类多功能的分泌型信号分子,参与调节多种细胞的增殖、分化及凋亡,并在组织器官的形成、胚胎的发育和损伤组织的修复中起关键作用。Sm ads蛋白是脊椎动物TGF-β超家族细胞内信号转导和调节分子,可直接将TGF-β包括BMPs胞外信号从细胞膜传递入细胞核。各水平的共激活或抑制因子对该信号转导过程进行严密调控;此外,BMP-Sm ads还与其他信号通路建立通路间的“串话”(cross-talk),使BMP-Sm ads信号转导过程形成一个复杂而有序的网络。
目的设计合成新型1,5-二取代吡唑-3-甲酰胺类化合物,并对其抗ALK5活性进行初步评价。方法以取代的苯乙酮及草酸二甲酯为原料,经多步反应合成目标化合物,用化学发光法检测报告基因表达产物萤火虫萤光素酶活性,计算化合物对ALK5的抑制率。结果与结论共合成15个未见文献报道的新化合物,其结构经IR1、H-NMR和MS确证。初步生物活性评价结果显示化合物4g具有一定的抗ALK5活性。
目的探讨外源性转化生长因子-β_1(transforming 购买AZD2281 growth factor-β_1,TGF-β_1)对人输尿管平滑肌细胞(USMCs)生物学功能的影响。方法取正常的输尿管平滑肌细胞分为4组:1对照组;2TGF-β_1组(10μg/L TGF-β_1处理);3TGF-β_1拮抗剂组(30μmol/L SB-431542处理);4TGF-β_1+TGF-β_1拮抗剂组(10μg/L 哪里 TGF-β_1+30μmol/L SB-431542处理)。MTT法检测各组输尿管平滑肌细胞在处理0、24、48、72h的增殖情况;细胞划痕实验检测各组输尿管平滑肌细胞处理24h、48h时的迁移能力;各组细胞处理48h后分别应用RT-qPCR和Western blot检测α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的表达变化。结果MTT实验显示与对照组相比,TGF-β_1处理24h后USMCs增殖率增加(P<0.05),处理48h、72h后增殖最明显(P<0.01),拮抗剂组细胞生长明显受抑制(P<0.05或P<0.01),TGF-β_1联合SB-431542共同处理细胞后其增殖活性与对照组相比无明显差异;细胞划痕实验显示TGF-β_1组与对照组相比,各时间点细胞迁移距离明显增加(P<0.01),拮抗剂组24h和48h细胞迁移距离与对照组相比明显减小(P
心脏再生治疗有望改变现有的心血管病治疗局面,直接重编程领域的研究为实现这一目标提供了新的有力工具。直接重编程是近年来广泛应用于细胞修复及器官移植研究的一项技术,可绕过诱导多功能干细胞中间阶段,直接将一种终末分化细胞转化为其他种类的终末分化细胞。总结了直接重编程用于心脏再生治疗的研究进展,探讨直接重编程技术尚存的问题和障碍,并展望其未来在再生医学领域的应用。
目的探讨大黄多糖对糖尿病皮肤创面的疗效及可能机制。方法链脲佐菌素诱导糖尿病大鼠模型,2周后手术制作背部创面模型,再随机分为糖尿病组(给予生理盐水)、大黄多糖组(给予大黄多糖)及大黄多糖-SB431542组(给予大黄多糖及TGFβ1受体抑制剂SB431542混合液),另取正常大鼠制作背部创面模型给予生理盐水为对照组。2周后观测创面愈合率,检测创面羟脯氨酸含量,HE染色观测创面肉芽组织生长情况,免疫组化染色检测TGFβ1表达。结果与对照组相比,糖尿病组及大黄多糖-SB431542组创面愈合率明显降低,羟脯氨酸含量减少(均0.05)。对照组与大黄多糖组真皮层较厚,胶原纤维丰富,而糖尿病组与大黄多糖-SB431542组真皮层较薄,皮下胶原组织较少。糖尿病组TGFβ1表达较对照组减少,大黄多糖组及大黄多糖-SB431542组TGFβ1表达明显增加。结论诱导TGFβ1表达是大黄多糖促进糖尿病皮肤创面愈合的重要机制之一。
Reprogramming

CB-839研究购买 of somatic cells to induced pluripotent stem cells(iPSCs) is a comprehensive epigenetic process involving genome-wide modifications of histones and DNA methylation. This process is often incomplete, which subsequently affects i PSC reprograming,pluripotency, and differentiation capacity. Here, we review the epigenetic changes with a focus on histone modification(methylation and acetylation) and DNA modification(methylation) during i PSC induction.