正常对照组、吗啡组(2,5,10,20μM); 2正常对照组、吗啡组(6h,12h,24h);3.正常对照组、吗啡组(10μM)、纳洛酮组(10μM)、吗啡+纳洛酮组(纳洛酮提前吗啡1h加入使之预先与阿片类受体结合)。置细胞培养箱孵育。

而且 2.细胞存活率的检测 使用MTT法检测细胞存活率。将细胞以1×104/孔的密度铺在96孔培养板内,使用不同浓度吗啡处理,然后将20μ1 MTT加入每个孔中,将培养板置于37℃孵育4小时。然后用ELISA读数仪在570nm波长下检测比色度。3.细胞凋亡的检测 体外培养原代小胶质细胞和BV-2小胶质细胞系以1×105/孔种植于铺有载玻片的12孔板中,置于细胞培养箱孵育,用吗啡及纳洛酮处理后,取出载玻片,将其用丙酮/甲醇(1：1)室温固定5分钟,然后按照TUNEL试剂盒指示进行操作检测细胞凋亡。 4. Western Blotting 使用Western Blot方法检测BV-2小胶质细胞经吗啡处理后cleaved caspase-3,caspase-3等蛋白水平的变化,用GAPDH作为实验内参。收集各组实验细胞后,使用RIPA Lysis Buffer裂解离心后用12%SDS-PAGE将样品蛋白电泳分离,然后转膜至硝酸纤维膜。将膜用5%脱脂奶粉室温封闭2小时,然后用一抗4℃孵育过夜后,再用二抗室温孵育1小时。最后暗室曝光并扫描记录结果。 5.细胞免疫荧光染色 使用细胞免疫荧光检测体外培养原代小胶质细胞经吗啡处理后cleaved caspase-3蛋白水平变化,用RCA-1作为小胶质细胞标志物。以1×105/孔种植于铺有载玻片的12孔板中,用吗啡及纳洛酮处理后,取出载玻片,将其用丙酮／甲醇(1：1)室温固定5分钟,将固定后的小胶质细胞用一抗室温孵育过夜,然后用二抗避光室温孵育2小时。最后用荧光倒置显微镜和Leica TCS SP2 Laser Scanning共聚焦显微镜观察实验结果。 6. RT-PCR 使用RT-PCR检测小胶质细胞经吗啡处理后CD11b、TNF-α、IL-1β和IL-6mRNA水平变化,用beta-Actin作为实验内参。收集各组实验细胞后,抽提RNA。以mRNA为模板,在逆转录酶的作用下逆转录合成cDNA。以cDNA为模板,用小鼠CD11b、TNFα、IL-1β和IL-6相应引物特异性扩增相应的基因。用琼脂糖凝胶电泳对扩增产物进行半定量检测。 结果 1.吗啡通过阿片受体途径激活小胶质细胞

吗啡(2,5,10,20μM)处理后小胶质细胞激活标志物CD11b mRNA水平呈剂量和时间依赖性升高,较未处理组有显著差异。阿片类受体阻断剂纳洛酮可以阻断吗啡的作用。 2.吗啡通过阿片受体途径诱导小胶质细胞凋亡MTT结果显示吗啡(2,5,10,20μM)处理后小胶质细胞存活率呈剂量依赖性明显下降。TUNEL染色显示吗啡处理(10μM)使小胶质细胞凋亡明显增加,较未处理组有显著差异。Western Blot结果显示吗啡(10μM)处理使BV-2小胶质细胞中caspase-3活化明显升高,而体外培养原代小胶质细胞cleaved caspase-3和小胶质细胞标志物RCA-1双抗体免疫荧光染色也得到一致的结果。并且纳洛酮可阻断吗啡引起的小胶质细胞凋亡及caspase-3激活。 3.吗啡通过阿片受体途径诱导小胶质细胞细胞因子表达RT-PCR的方法检测了小胶质细胞经吗啡(10μM)处理后TNFαIL-1β和IL-6 mRNA的表达,发现小胶质细胞中上述三种细胞因子表达明显增加,较未处理组有显著差异。纳洛酮可阻断吗啡的作用。 结论 1.吗啡通过阿片受体途径激活并诱导小胶质细胞细胞因子的表达。 2.吗啡通过阿片受体途径诱导小胶质细胞凋亡,caspase-3途径介导了吗啡诱导的小胶质细胞凋亡。 selleck screening library 第二部分GSK3β信号通路在吗啡诱导小胶质细胞凋亡中的作用研究 目的 使用体外培养原代小胶质细胞和BV-2小胶质细胞系探讨GSK3β信号通路在吗啡诱导小胶质细胞凋亡中的作用及其具体机制。 方法 1.体外培养原代小胶质细胞和BV-2小胶质细胞系并进行吗啡处理 体外培养原代小胶质细胞和BV-2小胶质细胞分别分组如下：1.正常对照组、吗啡组(2,5,10,20 u M)；2.正常对照组、吗啡组(6h,12h,24h) 3.正常对照组、吗啡组(10μM)、纳洛酮组(10μM)、吗啡+纳洛酮组(纳洛酮提前吗啡1h加入使之预先与阿片类受体结合)；4.正常对照组、吗啡组、SB216763组(10μM)、吗啡+SB216763组(SB216763提前1h加入)。置细胞培养箱孵育。 什么 2. Western Blotting 使用Western Blot方法检测小胶质细胞phosphor-Akt、phosphor-GSK3β、cleaved

caspase-3、cleaved caspase-8、phosphor-p38、Bax、Bcl-2等蛋白水平变化。 3.细胞凋亡的检测 使用TUNEL染色法检测小胶质细胞凋亡。 4. RT-PCR 使用RT-PCR检测小胶质细胞Bax和Bcl-2 mRNA水平变化。 结果 1.吗啡通过阿片受体途径使小胶质细胞phosphor-Akt和phosphor-GSK3β蛋白水平降低 Western Blot结果显示,吗啡使小胶质细胞phosphor-Akt和phosphor-GSK3p蛋白水平明显降低,且表现为时间和剂量依赖性,纳洛酮可阻断吗啡的作用。 2.抑制GSK3β增加吗啡诱导的小胶质细胞凋亡 TUNEL方法检测细胞凋亡,发现特异性GSK3β抑制剂SB216763预处理显著增加了吗啡诱导的小胶质细胞凋亡。Western Blot方法检测小胶质细胞cleaved caspase-3和cleaved caspase-8蛋白水平,发现SB216763预处理可以明显增加吗啡引起的caspase-3和caspase-8活化。 3.抑制GSK3β使吗啡处理引起的Bax/Bcl-2和phosphor-p38变化增加 Western Blot方法检测小胶质细胞Bax和Bcl-2蛋白水平变化,发现吗啡处理使小胶质细胞Bax水平升高,Bcl-2水平降低。而SB216763预处理增加了吗啡引起的Bax/Bcl-2变化。RT-PCR方法检测小胶质细胞中Bax和Bcl-2 mRNA表达变化,发现吗啡处理使小胶质细胞Bax mRNA水平升高,Bcl-2 mRNA水平降低,而SB216763预处理增加了吗啡引起的Bax/Bcl-2 mRNA变化,与蛋白变化一致。Western Blot方法检测小胶质细胞phosphor-p38水平,发现吗啡处理使小胶质细胞phosphor-p38水平升高,纳洛酮可阻断吗啡的作用。而SB216763预处理可显著增加吗啡引起的phosphor-p38升高。 结论 1.吗啡通过阿片受体途径使小胶质细胞phosphor-Akt和phosphor-GSK3β蛋白水平降低。 2.抑制GSK3β增加吗啡诱导的小胶质细胞凋亡。 3.抑制GSK3β增加吗啡引起的Bax/Bcl-2水平变化。 4.

小鼠精原干细胞的分离和培养 采集新生6至12dpp小鼠睾丸，去除白膜，用胶原酶和DNA酶消化使SSCs与睾丸支持(Sertoli)细胞分离。传代SSCs使用不同溶液及因子组合筛选培养体系，最终确定DMEM+15%KSR+0.25μmol L-1A83-01为无血清无饲养层最佳培养体系。在该培养体系下细胞传代，通过形态学观察、计数结合PCR、免疫荧光染色、BrdU掺入染色、AP染色等检测方法，对分离的SSCs特性进行鉴定后证实：该培养体系能够维持小鼠SSCs的自我更新，证明所培养的精原干细胞为典型SSCs。 以及 2.与小鼠精原干细胞发育密切相关的miR-34c靶基因的筛选、确定 通过miRwalk (miRNA靶基因预测)网站，得到一系列miR-34c可能直接作用的靶基因，从中选择了一个与小鼠SSCs发育及精子发生密切相关的Nanos2基因。通过构建含有Nanos2-3′UTR及miR-34c预测结合靶位点突变Mut-Nanos23′UTR的双荧光素酶报告基因载体，与miR-34c共转染Hela细胞，测定双荧光素酶发光值。结果证实Nanos23′UTR与miR-34c直接结合，这提示miR-34c可能通过靶向Nanos2发挥作用。

3. miR-34c在小鼠雄性精原干细胞精子发生过程中的作用 通过向SSCs中转染合成的miR-34c模拟物和抑制物，以及含有miR-34c慢病毒毒液的培养液培养小鼠曲细精管，通过qRT-PCR技术及免疫荧光染色、Western blot、曲细精管的Whole-mount staining等方法检测减数分裂相关基因的表达变化。检测结果发现，过表达miR-34c后，Nanos2表达特异性显著下调，Scp3、Stra8等减数分裂后期标记基因的表达明显上调。以上实验结果表明，miR-34c可促进小鼠SSCs向精子细胞分化。
正常生理和卵泡发育过程中，颗粒细胞分为卵巢颗粒细胞（mural granulosacell,mGCs）与卵丘颗粒细胞（cumulus cells,CCs），分别表达自身特有的转录。两者有着明确的分工：CCs影响卵母细胞成熟，而mGCs主要起内分泌功能。当卵丘卵母复合体（COCs）从卵泡中移除之后进行体外培养时，COCs与mGCs的分泌因子是相分离的。卵母细胞与其周围的颗粒细胞之间的通讯，对于卵母细胞发育以及颗粒细胞分化来说是至关重要的,卵母细胞依赖于分化了的CCs，CCs提供营养物质和调节信号来促进卵母细胞的核成熟以和质成熟以及发育能力的获得；另外卵母细胞可以促进颗粒细胞的增殖与分化以及相关基因的表达,在第一极体排出之后，一个对卵母细胞重新开始减数分裂的必须事件是卵丘颗粒细胞所发生的扩散，这对于排卵是重要的。在成熟过程中，卵丘颗粒细胞发生扩散现象，证明扩散现象与卵母细胞成熟有着某种关系，扩散现象是由于颗粒细胞自身与扩散相关基因的表达引起，而卵母细胞在扩散过程中也起到相当重要的作用。颗粒细胞为卵母细胞成熟提供一些分泌因子影响刺激成熟，反过来，卵母细胞成熟后分泌某种物质来刺激扩散。

无 本研究的目的在于：（1）检测扩散的颗粒细胞中相关基因的表达情况；（2）加入GSK3抑制剂之后对卵母细胞成熟以及颗粒细胞扩散的影响；（3）GSK3抑制剂对颗粒细胞凋亡的影响。 结果：（1）扩散的颗粒细胞中，与扩散相关的基因如GDF9、HAS2、PTGS2、PTX3以及Tnfaip6基因均有表达；（2）在卵母细胞体外培养成熟成熟时加入BIO时，促进卵母细胞的成熟，但并不显著；对颗粒细胞的扩散有促进作用，正常情况下，用BSA配制的牛卵母细胞成熟培养液来培养卵母细胞时，颗粒细胞本不发生扩散，但是加入GSK3通用型抑制剂之后，颗粒细胞发生扩散，卵母细胞成熟情况与上述类似。（3）卵母细胞成熟之后脱颗粒，将收集的颗粒细胞单独培养时，分A/B两组，A组中加入BIO，B组为对照组，结果发现在短时间内两组细胞生长状况相似，但是随着培养时间的增加，会发现加入BIO的A组生长状况明显优于对照组。（4）GSK3抑制剂对颗粒细胞的凋亡有一定程度的减缓作用。 selleck chemical 结论：颗粒细胞的生长、增殖、凋亡与GSK3基因有关，由于GSK3作为Wnt信号通路的一个重要节点，所以GSK3对Wnt信号通路起抑制作用，在这种情况下，Wnt信号通路被抑制，颗粒细胞只是单纯性的生长增殖但并未发生扩散，但是BSA培养液在加入GSK3抑制剂之后发生扩散，与在在血清培养液的情况下发生扩散一样，说明血清中有类似GSK3抑制剂的物质存在。加入GSK3抑制剂的培养体系中，卵母细胞在第一极体排出率上有一定上升，证明在正常情况下，GSK3抑制剂抑制GSK3之后，激活Wnt通路，对卵母细胞的成熟起稳定加成的作用。由于加入GSK3抑制剂的颗粒细胞在促凋亡Bax基因的表达量下降，而抗凋亡基因Bcl2表达量相差不大，促凋亡基因Bax的下降下降，说明抑制剂对Bax促凋亡基因的抑制作用更明显，抑制剂对颗粒细胞凋亡有抑制作用。所以，Wnt信号（GSK3抑制剂）对颗粒细胞的生长增殖期促进作用，对凋亡起缓解作用，反过来讲，可以概括为GSK3可以抑制颗粒细胞生长增殖，但对凋亡有一定程度的促进作用。
化疗耐药是临床上治疗肿瘤的关键障碍之一。卵巢癌是影响女性生存的恶性肿瘤之一，在临床治疗中，紫杉醇作为其治疗的一线药物，但由于发生耐药而降低其疗效。因此深入研究耐药发生机制尤为重要。本论文将从上皮间充质转化（EMT）与肿瘤干细胞的角度解释耐药性状发生及对细胞功能的改变，力求寻找出一条可调控卵巢癌细胞耐药发生的信号通路。

本课题以人卵巢癌细胞野生株（A2780/WT）和紫杉醇耐药株（A2780/PTX）为模型，通过药敏性检测，其对紫杉醇IC50分别为34.17μmol·L~(-1)和76.06μmol·L~(-1)； RT-PCR和免疫细胞荧光法检测EMT相关标志蛋白在两株细胞中的表达，结果显示A2780/PTX细胞与A2780/WT细胞相比，形态上由铺路石状转变成梭形，EMT相关分子标志物发生明显改变，上皮细胞标志物E-cadherin和Laminin5表达显著下调，间质细胞标志物N-cadherin和Vimentin表达显著上调。细胞划痕及Transwell结果证明A2780/PTX细胞迁移能力增强，功能上改变与EMT的变化相符。这为选择卵巢癌耐药细胞株作为模型研究EMT与耐药发生机制探讨奠定基础。由于PI3K/Akt作为EMT发生信号通路，在多种肿瘤中均被激活。对A2780/PTX细胞添加PI3K/Akt抑制剂LY294002处理，采用MTT、RT-PCR、免疫细胞荧光染色、Transwell等方法，进行耐药指数检测、EMT标志物、细胞迁移及骨架结构改变等方面评价EMT的发生与肿瘤恶性程度的关系。结果表明：经过抑制剂LY294002处理，细胞发生EMT标志物逆转，迁移能力减弱，细胞对紫杉醇IC50下降为22.

0145μM较化合物WXY029(IC50=0.227μM)强,WXY032(IC50=0.22μM)较化合物WXY021(IC50=0.28μM)强,这表明含1H-[1,2,3]三唑[4,5-b]吡嗪、3H-[1,2,3]三唑[4,3-b]哒嗪的螺[吲哚啉-3,4'-哌啶]-2-酮化合物较含3H-[1,2,3]三唑[4,5-d]嘧啶、嘌呤环的螺[吲哚啉-3,4'-哌啶]-2-酮化合物有作用强,含有1H-[1,2,3]三唑[4,5-b]吡嗪的螺[吲哚啉-3,4’-哌啶]-2-酮化合物较含有3H-[1,2,3]三唑[4,3-b]哒嗪的螺[吲哚啉-3,4’-哌啶]-2-酮化合物作用强,螺[吲哚啉-3,4'-哌啶]-2-酮的6位取代较5为取代作用强。 4、对分子水平对c-Met酶有强抑制作用的吲哚唑、2,3,4,5-四氢-1H-吡啶[4,3-b]吲哚、螺[吲哚啉-3,4'-哌啶]-2-酮类化合物进行MKN45细胞中c-Met半抑制浓度(IC50)实验,实验结果表明,大部分化合物对细胞中c-Met有较强的抑制作用,部分化合物的ICso值在10μM以下。 确认细节 5、对五大类合成的36个化合物进行了分子对接研究,分子对接结果显示,所有化合物与c-Met位点均采取“U”型结合模式,具备Ⅰ型c-Met抑制剂的典型特征,喹啉环上的氮与Met1160主链羰基形成氢键,喹啉环C-8与Pro1158羰基上的氧形成一个非经典的C-H-O=C氢键。这种作用与其他ATP-竞争性酶作用相似,稠合环(1H-[1,2,3]三唑[4,5-b]吡嗪环、3H-[1,2,3]三唑[4,3-b]哒嗪环、3H-[1,2,3]三唑[4,5-d]嘧啶、嘌呤、吲哚唑环)在Tyr1230和Met1211之间通过π-π堆积作用形成一个夹心结构,喹啉环和稠环之间的连接臂(亚甲基)刚好与Leu1157,Arg1086和Tyr1230或11109,Lys1110,A1a1226和Va11092组成的疏水口袋嵌合,该部分主要是影响稠合环的π-π堆积作用,在所有稠环中,以三唑吡嗪环效果最好,因为三唑哒嗪环作为一个缺电子母核在Tyr1230和Met1211之间通过π-π堆积作用形成一个夹心结构,三唑吡嗪环上的两个氮原子与Asp1222骨架上的NH形成两个氢键,因而与只能形成一个氢键的其它稠环相比其有较高的亲和力和较低的IC50值,而且与Asp1222间的氢键因其具有较低能量可以稳定该类化合物的构型。另外螺环上的哌啶环主要指向u型折叠构型的亲水表面,而该表面远离铰链区。因为在491个酪氨酸激酶中仅仅有c-Met,Axl和Mer三个激酶有两个氨基酸存在,来自Met1211和Tyr1230的疏水作用增加了该类化合物的选择性,螺环5位或六位取代的亲水稠环延伸到结合口袋,与WXY030相比,因螺环的张力存在使得WXY029不能与活性位点匹配,从而导致构型的改变以及增加N原子和Asn1167间的距离而不能形成氢键,因此WXY029的活性较WXY030低,同样的原因可以解释WXY031、WXY033、WXY035活性较WXY032、WXY034、

WXY036低。 综上所述,本课题主要针对c-Met设计了118个信化合物,合成出了36个新化合物,未见文献报道,此外还合成了17个关键中间体。所有目标化合物合成中都用到了Suzuki耦合反应,该反应在在DMF/H2O的混合溶剂中、Pd (PPh3)4催化下进行获得较高的收率,得到的的目标化合物以吲哚唑类、2,3,4,5-四氢-1H-吡啶并[4,3-b]吲哚类、螺[吲哚啉-3,4’-哌啶]-2-酮类化合物有较好的抗肿瘤活性,WXY030、WXY022和WXY023对c-Met生化半抑制浓度(ICso)达到了10nM,显示强的抗肿瘤活性,对分子水平抑制作用强的化合物进行细胞研究显示部分化合物对MKN45细胞中c-Met的抑制作用达到了10μM。分子对接研究证实和解释了这些化合物的活性。为开发具有临床应用价值的c-Met酪氨酸激酶抑制剂奠定基础。
抗肿瘤药物对机体正常细胞的细胞毒性及肿瘤细胞多药耐药性机制始终是抗肿瘤治疗的主要障碍。抗肿瘤靶向药物虽然有较低的细胞毒性和可选择性杀伤肿瘤细胞的作用,但多数靶向药物通常基于肿瘤细胞与正常细胞间差异性抗原研制,故在肿瘤细胞发生抗原漂移和抗原调变时常使抗肿瘤靶向药物的疗效减弱,甚至失去疗效。

R428 购买NVP-BKM120 在探索抗肿瘤治疗途径过程中,人们发现热疗法可在不伤害机体正常细胞的情况下选择性杀伤肿瘤细胞,而且还可通过热诱导作用使肿瘤细胞的免疫原性增强,从而有助于机体免疫系统对肿瘤细胞的识别,进而增强机体免疫系统对肿瘤细胞的杀伤作用。然而,单纯依靠热疗方法进行抗肿瘤治疗,存在疗效低、治疗不彻底等缺点,因此热疗法通常与其它抗肿瘤治疗方法联合使用。 热休克蛋白(Heat Shock Proteins, HSPs)是高度保守的细胞蛋白质家族之一,肿瘤热疗、化疗等因素都可诱导产生热休克蛋白。HSPs可通过多肽结合阈与肿瘤细胞内不同的肿瘤相关抗原结合形成复合物并激活免疫系统。有研究表明,肿瘤细胞内HSPs水平显著高于正常组织细胞；在肿瘤细胞膜表面可检测到HSPs,而相同条件下正常细胞膜表面却检测不到HSPs。但是,肿瘤细胞经热诱导后细胞膜表面蛋白水平是否存在规律性变化以及能否用于抗肿瘤治疗鲜见报道。 为此,本研究首先考察经热诱导后人肝癌Hep G2细胞膜表面蛋白水平是否存在规律性变化。由于HSP70是肿瘤细胞膜表面的主要热诱导蛋白,故先采用流式细胞术等方法对热诱导后Hep G2细胞膜表面HSP70水平的动态变化情况进行研究。在此基础上,采用经热诱导的Hep G2细胞免疫BALB/c小鼠,通过免疫学和基因工程的方法构建单链抗体文库,然后利用核糖体展示和免疫亲和筛选方法,获得与热诱导后Hep G2细胞结合的特异性单链抗体,进而构建特异性单链抗体重组免疫毒素基因并对其表达的融合蛋白特异性、亲和性以及抗肿瘤活性进行检测。 研究显示Hep G2细胞膜表面HSP70水平在42℃热诱导后37℃恢复培养12h出现峰值,同时细胞膜表面可检测到HSP70的细胞百分数显著增加(由7.85%增加到15.11%)。采用核糖体展示技术成功筛选获得与热诱导后Hep G2细胞结合的特异性单链抗体克隆(scfv5669和scfv5670),进而成功构建单链抗体重组免疫毒素(scfv5669-seb).

多酚化合物BJA3121抑制肿瘤坏死因子(TNF-α)诱导的人单核白血病

THP-1细胞与人肺癌A549细胞粘附采用荧光显微镜方法测定荧光素标记的人单核白血病细胞系THP-1与贴壁生长的A549细胞粘附。多酚化合物BJA3121以40μg/ml分别预处理A549细胞6,12和24h后,对TNF-α (25ng/ml)刺激A549肺痛细胞4h后诱导的THP-1与A549细胞的粘附有显著的抑制作用。在荧光显微镜下,可观察到粘附细胞在药物处理的三个时间点都明显减少,而且处理24h后的作用强度大于6h和12h,作用呈现时间依赖性。当BJA3121以20,30和40μg/ml分别预处理A549细胞12h后,对TNF-α刺激A549肺癌细胞诱导的THP-1与A549细胞的粘附呈现剂量依赖性的抑制作用。 那个 二.多酚化合物BJA3121及其类似物BJA32531和BJA32515对人肺癌A549细胞和肝癌HepG2细胞生长的影响 采用MTT和CCK-8方法测定多酚化合物抗A549细胞和HepG2增殖活性。结果表明,多酚化合物BJA3121以5.0,10.0,20.0和40.0分别处理A549细胞24、48和72h后,均未观察到药物对细胞有生长抑制作用,说明BJA3121在有效抑制细胞粘附的剂量范围内对人A549细胞无细胞毒作用。但BJA3121及其类似物BJA32515和BJA32531在相同条件下,对人肝癌HepG2细胞显示细胞毒性。

三.多酚化合物BJA3121抑制TNF-α诱导的A549细胞的白细胞介素和粘附趋化因子基因的表达 我们研究了多酚化合物BJA3121对细胞因子IL-8和IL-6以及粘附因子MCP-1, ICAM-1和MMP-9表达的影响。采用实时定量荧光PCR技术检测细胞因子IL-8和IL-6以及粘附趋化因子MCP-1,ICAM-1和MMP-9的mRNA表达。 1.BJA3121抑制TNF-α诱导的A549细胞IL-8mRNA的表达 采用实时定量荧光PCR技术检测A549细胞IL-8基因的表达。多酚化合物BJA3121以10,20,30和40μg/ml剂量和TNF-α 时间 (25ng/ml)一起预处理A549细胞6h,然后检测细胞中IL-8mRNA的表达。结果表明,在正常情况下,A549细胞中有少量IL-8mRNA的表达；而TNF-α单独刺激A549细胞6h后,细胞中IL-8基因的表达呈现显著性增加。BJA3121从10-40μg/ml的四个剂量均能抑制TNF-α诱导的A549细胞的IL-8mRNA的高表达,且抑制作用呈剂量依赖性。 2.BJA3121抑制TNF-α诱导的A549细胞IL-6mRNA的表达

采用实时定量荧光PCR技术检测A549细胞IL-6基因的表达。多酚化合物BJA3121以20和40μg/ml剂量和TNF-α AG-014699 花费 (25ng/ml)一起预处理A549细胞6h,然后检测细胞中IL-6mRNA的表达。结果表明,在正常情况下,A549细胞中有少量IL-6mRNA的表达；TNF-a单独刺激A549细胞6h后,细胞中IL-6基因的表达呈现显著性增加。BJA3121在20和40μg/ml的两个剂量均能抑制TNF-α诱导的A549细胞的IL-6mRNA的过表达. 3、BJA3121抑制]TNF-α诱导的A549细胞MCP-1mRNA的表达,但对ICAM-1和MMP-9mRNA的表达无影响 采用实时定量荧光PCR技术检测A549细胞MCP-1, ICAM-1和MMP-9mRNA的表达。多酚化合物BJA3121以20和40μg/ml剂量BJA3121和TNF-α (25ng/ml)一起预处理A549细胞6h,然后检测细胞中MCP-1,ICAM-1和MMP-9mRNA的表达。结果表明,在正常情况下,A549细胞中均有少量MCP-1,ICAM-1和MMP-9mRNA的表达；而TNF-α(25ng/ml)单独刺激A549细胞6h后,细胞中三种因子的表达均显著升高。BJA3121在20和40的两个剂量均能抑制TNF-α诱导的A549细胞的MCP-1mRNA的过表达,抑制作用呈剂量依赖性。但另一方面,BJA3121对TNF-α诱导的ICAM-1和MMP-9mRNA的表达无抑制作用。 四.BJA3121抑制TNF-α诱导的A549细胞IL-8的释放 采用人生物素化的IL-8抗体和HRP标记的亲和素的ELISA试剂盒检测A549细胞培养上清液中的IL-8水平。我们首先研究了TNF-α刺激A549细胞释放IL-8与TNF-α作用时间的关系。结果显示,无TNF-α处理的细胞上清液中IL-8的浓度为640±40pg/ml;而TNF-α以25ng/ml分别处理A549细胞3h、6h、12h、24h后,四个时间点的细胞上清液中IL-8的浓度分别为3898.3±300,34666.8±2212,43778.6±924和191255.

观察芩丹胶囊含药血清对TGF-β1诱导的AF增殖、迁移、平滑肌肌动蛋白-α(alpha

smooth muscle actin,α-SM actin)、Ⅰ和Ⅲ型前胶原mRNA和蛋白表达的改变,探讨芩丹胶囊对TGF-β1诱导的AF的生物活性的影响。 2.观察芩丹胶囊含药血清对TGF-β1诱导的AF Smad2、Smad3、Smad7、磷酸化Smad2 (phosphorylation-Smad2, p-Smad2)和磷酸化Smad3 (phosphorylation-Smad3, p-Smad3) mRNA和蛋白表达的影响,探讨芩丹胶囊对外膜成纤维细胞TGF-β1/Smad信号转导通路的作用。 方法 1.芩丹胶囊的制备及质量标准的研究：采用高效液相色谱法(High performance liquid chromatography, HPLC)和薄层层析法(Thin-layer chromatography, TLC),明确芩丹胶囊的有效成分。 2.成纤维细胞的复苏与传代：取出冻存管,快速解冻,用正常培养基悬浮细胞,离心后转移至培养瓶。待细胞长至90%融合时进行传代。 3.芩丹胶囊含药血清的制备：60只健康雄性Wistar大鼠随机分为3组：芩丹胶囊大剂量组(QC大剂量组)给予QC 750mg/(kg·d);芩丹胶囊小剂量组(QC小剂量组)给予QC 150mg/(kg·d);氯沙坦组给予氯沙坦30 Protein Tyrosine激酶抑制剂 mg/(kg-d)。各组均大鼠灌胃给药,最后一日禁食24h,末次给药后1h(氯沙坦组)和2h(芩丹胶囊组)后乙醚麻醉,腹主动脉取血,37℃水浴1 h,3000 rpm离心15min,取上清,过滤除菌,然后在-57℃条件下真空干燥,-20℃保存备用。 4.MTT比色法检测细胞增殖能力：制备细胞悬液,接种于96孔板,各组加入相应血清继续孵育48h,换用含20 ng/ml TGF-β1的培养基诱导24h,在刺激结束前4h加入MTT,弃上清,加入DMSO,振荡,比色。

5. Transwell法检测细胞迁移能力：细胞分组和处理同前,经过处理的细胞被消化,然后用DMEM制成细胞悬液,取0.6ml细胞悬液接种于上室,1.5ml含10%FCS的正常培养基加入下室。置入孵箱内培养6h,取出小室用湿棉签擦内侧的细胞,然后固定染色,计数。 6.实时定量PCR技术检测相关因子mRNA的表达：细胞处理同前,提取总RNA,将RNA逆转录为cDNA。观察芩丹胶囊和氯沙坦含药血清对TGF-β1诱导的Smad2、Smad3、Smad7、α-SMA、Ⅰ型及Ⅲ型前胶原肽mRNA的表达。用2-△△Ct的方法对mRNA的表达进行相对定量分析。 7. Western-blot技术检测相关因子蛋白的表达：细胞分组和处理方法同前,提取蛋白并定量,western-blot检测p-Smad2、p-Smad3、Smad2、Smad3、Smad7、α-SMA、Ⅰ型前胶原肽蛋白表达。 点击此处 寻找更多 8.统计学处理所有实验数据用x±s表示,数据资料均用SPSS 16.0进行统计处理。组间差异采用one-way ANOVA分析和t检验,设P<0.01)；各药物处理组增殖与TGF-β1刺激组相比,有非常显著性差异(P<0.05或P<0.01),其中以氯沙坦组减弱最为显著(P<0.01),其次为QC大剂量组(P<0.01),QC大剂量组和氯沙坦组较QC小剂量组有显著差异(P<0.01)；经药物处理以后,与TGF-β1刺激组相比,药物组细胞迁移数目均明显下降(P<0.05或P<0.01),其次为QC大剂量组(P<0.01)；QC大剂量组、氯沙坦组与QC小剂量组比较有显著差异(P0.05)；与氯沙坦组相比,QC小剂量组Smad3

mRNA表达差异有显著性(P0.05)；与TGF-β1刺激组相比,各药物处理组Smad7 mRNA表达均显著提高(P<0.01)；QC大剂量组、氯沙坦组与QC小剂量组比较,差异具有统计学意义(P<0.01),其次为QC大剂量组(P<0.01),小剂量组与氯沙坦组比较差异具有统计学意义(P<0.01)；与TGF-β1刺激组相比,QC大剂量组和氯沙坦组Ⅰ型前胶原mRNA表达均显著下降(P0.05)。 (6)Ⅲ型前胶原mRNA表达比较：与正常对照组相比,TGF-β1刺激组细胞Ⅲ型前胶原mRNA表达表达显著升高(P<0.01)；与TGF-β1刺激组相比,各药物处理组Ⅲ型前胶原mRNA表达均显著降低(P<0.05或P<0.01)；其中氯沙坦组下降最为显著(P<0.01),其次为QC大剂量组(P<0.01)；氯沙坦组与QC小剂量组比较有显著差异(P<0.01)。与TGF-β1刺激组相比,各药物组Smad2蛋白表达有所下降(P均<0.01)；氯沙坦组显著下降(P<0.01),且下降幅度大于QC大剂量组与QC小剂量组(P<0.05或P<0.01)；与TGF-β1刺激组相比,各药物处理组p-Smad2蛋白表达均显著下降(P<0.01)；QC大剂量组和氯沙坦组表达低于QC小剂量组(P<0.05或P<0.01)。与TGF-β1刺激组相比,氯沙坦组表达水平下降最明显(P<0.05),其次为QC大剂量组(P<0.

05）。在p38MAPK AS-ODNs+CIP组中，PPARγ蛋白和NF-κB p50蛋白的表达均明显降低，且随着p38MAPK AS-ODNs剂量的增大，PPARγ蛋白和NF-κB

p50蛋白的表达呈剂量依赖性降低。p38MAPK S-ODNs+CIP组与CIP组相比，PPARγ蛋白和NF-κB p50蛋白的表达无明显变化（P＞0.05）。在2d时间点，各组中PPARγ蛋白和NF-κB p50蛋白表达的变化趋势同6h时间点一致。结果表明p38MAPK AS-ODNs剂量依赖性地阻断CIP后PPARγ蛋白和NF-κB p50蛋白表达的上调。 3、p38MAPK AS-ODNs对CIP诱导脑缺血耐受过程中大鼠海马CA1区PPARγ、NF-κB p50蛋白表达的影响 Western blot分析显示，在6h时间点，与CIP+II组相比，p38MAPKAS-ODNs+CIP+II组PPARγ蛋白和NF-κB p50蛋白的表达均明显降低，且随着p38MAPK AS-ODNs剂量的增大，PPARγ蛋白和NF-κB p50蛋白的表达呈剂量依赖性降低；p38MAPK S-ODNs+CIP+II组PPARγ蛋白和NF-κB p50蛋白的表达无明显变化（P＞0.05）。在2d时间点，各组中PPARγ蛋白和NF-κB p50蛋白表达的变化趋势同6h时间点一致。结果表明p38MAPK AS-ODNs剂量依赖性地阻断CIP诱导脑缺血耐受过程中PPARγ蛋白和NF-κB p50蛋白表达的上调。 Selleckchem PD 332991 4、p38MAPK AS-ODNs对CIP诱导的脑缺血耐受的影响 在Sham组、CIP组中，大鼠海马CA1区神经元致密有序的排列、共2~3层，胞核饱满，核仁清晰，均未见神经元受损，组织学的分级为0级，ND值分别为196.12±6.93和182.67±10.07。同sham组相比，II组出现了较明显的迟发性的神经元死亡，神经元的密度明显下降，组织学的分级为Ⅱ~Ⅲ级，ND值为17.33±6.11，显著降低（P＜0.01）。在CIP+II组与II组相比，神经元的存活状态有明显改善，即CIP可显著抑制脑缺血损伤引起的迟发性神经元死亡，ND值为178.67±6.11，明显增高（P＜0.01）。ACSF+CIP+II组与CIP+II组相比，神经元的存活状态没有发生改变，即注射脑脊液对神经元的存活状态无影响，ND值为178.78±7.03，无差异（P＞0.05）。与ACSF+CIP+II组相比，p38MAPKAS-ODNs+CIP+II组出现了显著的迟发性神经元死亡，表现为组织学分级升高，锥体神经元密度降低，且此种变化与p38MAPKAS-ODNs的注射剂量呈明显正相关。在p38MAPK

查找更多 S-ODNs+CIP+II组中，海马CA1区锥体神经元存活状态良好，未见锥体神经元受损，ND值为174.20±13.61，与ACSF+CIP+II组相比无差异（P＞0.05）。结果表明p38MAPK AS-ODNs剂量依赖性地阻断CIP所诱导的脑缺血耐受。 结论：p38MAPK-PPARγ/NF-κB信号通路参与CIP诱导的脑缺血耐受。
目的：糖尿病神经痛（diabetic neuropathic pain, DNP）是糖尿病的常见并发症之一，而在糖尿病患者中，神经痛合并抑郁的发病率也逐渐增加，并严重影响糖尿病人的生活。糖尿病患者抑郁发病率可达到普通人群的1.6-2.0倍，其中2型糖尿病抑郁发病率更高达13%。糖尿病神经痛合并抑郁的形成机制是非常复杂的，目前已知中枢γ-氨基丁酸B型受体（GABAB受体）的表达变化在其形成中发挥重要作用，GABAB受体的激动剂和拮抗剂均被证实具有抗抑郁作用，但其具体机制尚不清楚，探讨其机制可为临床治疗提供更好的研究方向。 GABAB受体在神经系统广泛分布，调控突触传递，其中中枢GABAB受体与许多神经系统疾病密切相关，包括抑郁、焦虑、药物成瘾、疼痛、癫痫等。巴氯芬作为GABAB受体的特异性激动剂，具有明显的镇痛作用，且近年研究显示其具有显著的抗抑郁作用，GABAB受体抑制剂CGP55845也可产生抗抑郁作用。研究发现：各种原因导致的脑源性神经生长因子（BDNF）的减少易诱发抑郁，而大脑BDNF水平的升高可产生抗抑郁效果，这表明BDNF与抑郁形成密切相关。但是GABAB受体的表达变化是否通过影响BDNF的表达而参与抑郁的形成，目前尚不清楚。

本实验通过腹腔注射链脲佐菌素（STZ），结合强迫游泳实验，制备糖尿病神经痛合并抑郁大鼠模型，模型制备成功后给予GABAB受体激动剂（巴氯芬）和拮抗剂（CGP55845）。通过观察正常对照组（C组）、糖尿病神经痛合并抑郁模型（D1组）、巴氯芬组（D2组）、CGP55845组（D3组）、CGP55845+巴氯芬组（D4组）的50%机械缩足阈值（PWT），强迫游泳实验不动时间（IMSFT）变化，采用免疫组织化学法和分子生物学方法比较各组大鼠海马组织BDNF的表达变化，从而观察GABAB受体对糖尿病神经痛合并抑郁大鼠海马BDNF表达的影响，探讨其在抗抑郁方面的作用及其机制。 GDC-0449数据表 方法：清洁级雄性SD大鼠30只，180～200g，3～4周，由河北医科大学动物实验中心提供，随机分为两组，正常对照组（C组）10只和糖尿病神经痛模型组（D组）20只，分别腹腔注射生理盐水或链脲佐霉素(STZ，60mg/kg)。D组于腹腔注射后2周末测定空腹血糖浓度，空腹血糖浓度>16.7mmol/L的大鼠为糖尿病模型制备成功，然后对糖尿病大鼠进行15min/次（1次/周）强迫游泳实验以制备抑郁模型，其方法为：将大鼠单独放入高40cm、直径20cm的圆柱形玻璃缸中，缸内水深25cm，水温(25±2)℃，从大鼠入水后计时15min，为避免相互影响，每只大鼠进行强迫游泳之前更换玻璃缸中的水。于腹腔注射后3周末利用Von Frey针测定大鼠机械缩足阈值，采用Dixon方法计算出50%缩足阈值（PawWithdraw Threshold, PWT），PWT16.

Ang-(1-7)能有效抑制AngⅡ对VSMCs增殖和迁移的促进作用。 2.AngⅡ能有效激活ERK1／2、P38、JNK1／2,抑制SM22α表达。Ang-(1-7)能够下调AngⅡ引起的ERK1／2、P38激活,增加SM22α表达,A779可大部分逆转Ang-(1-7)的作用。Ang-(1-7)对JNK1／2的激活无显著作用。 3. Ang-(1-7)-MAS-ERK/P38-SM22α可能是影响VSMCs生物活性的主要信号通路。 1.背景 动脉粥样硬化(atherosclerosis, AS)是导致心脑血管疾病的病理学基础。肾素-血管紧张素系统(renin-angiotensin system, RAS)在血管平滑肌细胞(vascular somooth muscle cells,VSMCs)增殖、迁移及AS斑块形成和进展过程中起着重要的作用。血管紧张素Ⅱ(angiotensinⅡ,

或者 AngⅡ)是RAS系统的主要活性成分。大量的研究证实,AngⅡ可显著促进VSMCs的增殖和迁移活性,促进AS形成和进展。 血管紧张素-(1-7)[Angiotensin-(1-7), Ang-(1-7)]是近年来发现的RAS家族新成员,在体内主要由血管紧张素转化酶-2(angiotensin converting enzyme-2,ACE2)分解AngⅡ所产生。近年研究发现,Ang-(1-7)是AngⅡ重要的内源性拮抗剂,具有抑制炎症和氧化应激、激活磷酸酯酶、促进肾脏排钠、促进血管舒张等作用,介导了心肌重构和纤维化、高血压血管重构、血管平滑肌细胞增殖、炎症、血管内皮细胞功能调节等多个病理生理过程。 以往研究发现,Ang-(1-7)可抑制球囊内皮损伤模型中主动脉VSMCs增殖和迁移以及血管内膜增厚。本实验室的研究也发现,ACE2过表达可抑制早期AS病变的形成。这些研究提示,Ang-(1-7)在AS的进程中可能发挥着重要的保护作用。因此,通过直接应用Ang-(1-7),拮抗体内AS进程中过度激活的AngⅡ,对AS病变得预防和治疗可能起到有益的作用。然而,Ang-(1-7)对于AS病变形成的量效关系至今不明。此外,我们的体外研究证实,Ang-(1-7)可调节VSMCs的ERK1／2、P38、SM22α等信号蛋白的表达,抑制VSMCs的增殖和迁移,但这些体外实验的结果能否在体内得到验证尚不明了。

Idelalisib 因此,本研究提出如下假设：在ApoE-／-小鼠AS病变模型中,Ang-(1-7)可通过调节体内MAS-ERK/P38-SM22α信号转导通路,抑制VSMCs增殖和迁移,进而抑制AS的发展。 2.目的 2.1在体内试验中,观察不同剂量的Ang-(1-7)对ApoE-／-小鼠AS病变的抑制作用； 2.2在体内实验中,验证Ang-(1-7)抑制ApoE-／-小鼠AS病变形成的机制。 3.方法 3.1 ApoE-／-小鼠AS模型的建立 8周龄的雄性ApoE-／-小鼠实验全程高脂饮食(含0.25%胆固醇和15%脂肪)喂养8周。 获悉更多 3.2 Ang-(1-7)体内干预实验 高脂喂养4周后,随机分为PBS对照组(12只)、Ang-(1-7)干预组(36只)和A779干预组(36只)。Ang-(1-7)和A779组又分别分为3个剂量组(100ng／kg.min、200ng／kg.min、400ng／kg.min)。用药具体方法为：经植入式胶囊渗透压泵皮下持续泵入,用药28天。 分别于药物干预4周后处死动物,进行斑块的病理学和免疫组织化学检测。 3.3血液生化指标检测 分别检测血清甘油三酯、总胆固醇、高密度脂蛋白胆固醇和低密度脂蛋白胆固醇的水平。 3.4组织病理学检测 将主动脉纵剖后行大体油红O染色,对主动脉根部斑块进行H&E染色,心肌组织进行Masson染色；并通过免疫组织化学方法检测主动脉SM22α和肾脏内MOMA-2的表达。 3.5 Western blot检测 取新鲜主动脉根部组织,提取蛋白质,Western blot检测AS病变组织p-ERK1／2和p-P38的表达。 4.结果 4.1血液生化指标检测： 对照组、Ang-(1-7)各亚组和A779各亚组血清TC、TG、HDL-C、LDL-C未见统计学差异。 4.2 Ang-(1-7)的抗AS作用 大体油红O染色显示,与对照组相比,各Ang-(1-7)干预组均能有效抑制主动脉表面AS病灶范围。Ang-(1-7)抑制主动脉表面AS病变的作用呈剂量依赖性；随Ang-(1-7)浓度的增加,主动脉表面AS病灶范围逐渐减少。Ang-(1-7)最大剂量组与对照组主动脉表面AS病灶范围有显著统计学差异(2.58% vs.4.14%,P<0.05)和主动脉根部(23.22%vs.20.28%,P0.05),但均显著低于对照组(P值均0.

Real-time PCR, Western blotting and immunohistochemical SB431542体内 staining were used. RESULTS: SB216763 increased phospho-GSK-3β levels and suppressed GSK-3β activity (1880±229 vs 3280±272 cpm, P
目的:通过建立Wistar大鼠2型糖尿病(T2DM)动物模型,观察T2DM大鼠心肌细胞凋亡及游泳训练对该凋亡事件的保护作用,并探讨其内在影响机制.方法:实验材料Wistar大鼠60只,造模完成后随机分成3组,1)正常对照组(CON);2)Diabetes模型组(DI);3)游泳运动组(DI+SEX),每组15只.游泳训练共计8周.结果:T2DM造成心肌组织Bcl-2水平降低,Bax水平升高;线粒体内及胞浆蛋白中Bax/Bcl-2比值升高,促凋亡物质细胞色素c(Cyt c)向胞浆释放增多(P<0.01);糖原合成激酶3β(GSK-3β)磷酸化水平升高(P<0.05).另外,T2DM引起胰岛素受体亚型1(IR1)水平降低(P<0.05),显著性提高PI3K,Akt蛋白磷酸化及胰岛素受体IR1水平(P<0.05).虽对IR2水平有所提高,但无统计学意义.结论:游泳训练能有效抑制T2DM引起的Wistar大鼠心肌细胞凋亡.其抗凋亡作用可能是通过,至少部分通过上调IR1受体水平,激活PI3K-Akt生存通路,下调其下游关键蛋白GSK-3β磷酸化水平而实现.这表明游泳训练可以有效对抗T2DM引起的细胞凋亡事件的发生.
寒冷刺激与氧化应激及心脏功能异常有关。内皮素(endothelin,ET)系统在维持心肌细胞内环境稳定中起重要作用,可能参与寒冷刺激引起的心血管功能障碍。本研究旨在明确ET-1在寒冷刺激导致的心脏结构、功能异常中的作用。野生型和ETA受体敲除小鼠置于正常或寒冷环境(4℃)中2周、5周后检测心脏形态、收缩
目的探讨糖原合成激酶(GSK)3β抑制剂SB216763是否增强异氟醚(ISO)后处理对心肌缺血-再灌注损伤的保护作用。方法雄性新西兰白兔,体重2.5～3.0kg,将模型制备成功的48只白兔随机分为八组(n=6),缺血-再灌注组(A组);ISO0.5MAC组(B组)或1.0MAC组(C组);GSK3β抑制剂SB216763(SB)0.2mg/kg组(D组)或0.6mg/kg(E组);ISO+SB组(F组);SB+苍术苷(Atr)组(G组);ISO+SB+Atr组(H组)。于缺血前(基础值,T0)、缺血30min(T1)、再灌注30min(T2)、60min(T3)和120min(T4)时分别记录HR和MAP;再灌注结束时,TTC法染色心肌切片并计算心肌梗死面积的百分比。结果

buy Kinase 抑制剂 Library T0时各组血液动力学指标差异无统计学意义。与T0时比较,各组T3、T4时HR明显减慢、T2～T4时MAP明显降低(P<0.05)。与A组比较,C组、E组和F组心肌梗死面积明显缩小(P
缺血性心脏病是严重危害人类健康的常见病,其发病机理和防治方法的研究是医学界关注的焦点。对于心肌保护作用研究始于70年代以前,主要侧重于调节心肌血氧的供需平衡,降低心肌的负荷,增加冠状动脉血流以及如何促进侧枝循环的建立。1986年Masolv等[1]首次提出心肌在经受了多次短暂的缺血-再灌注(ischemic reperfusion,I-R)后,能在随后的长时间缺血中延迟并减轻心肌细胞损伤。此后
目的:研究细胞信号分子糖原合成酶激酶-3β(glycogen

synthase kinase-3β,GSK-3β)在D-氨基半乳糖/脂多糖联合注射诱导小鼠重型肝炎肝衰竭中的作用.方法:以C57BL/6小鼠为研究对象,腹腔注射D-氨基半乳糖/脂多糖建立小鼠重型肝炎肝衰竭模型.动物实验分组:对照组,重型肝炎肝衰竭模型组,SB216763干预组(建模前2h腹腔注射),SB216763治疗组(建模后2h腹腔注射).Western 因为 blot检测肝脏组织GSK-3β磷酸化水平,检测血清转氨酶(alanine aminotransferase,ALT)、天门冬酸氨基转移酶(aspartate aminotransferase,AST)评价肝脏功能,观察肝脏组织病理变化评价肝脏损伤情况,实时荧光定量PCR法检测肝脏细胞炎症因子基因表达,并检测凋亡相关蛋白Caspase 3的活性表达.多组样本均数的两两比较采用One-way ANOVA分析(方差齐者用LSD-t检验,方差不齐者用Games-Howell法),P
糖原合成酶激酶-3(glycogen synthase kinase,GSK-3)是糖原合成的限速酶之一,调控细胞葡萄糖转运及糖原合成。通过对多种糖尿病动物模型的分析,逐步证实了GSK-3在糖尿病发病,尤其是胰岛素抵抗中的重要作用。本文就GSK-3α、β亚型的生物学特性、糖尿病不同组织GSK-3的差异表达、GSK-3对糖代谢的调节作用及分子机制进行了阐述,并指出开发新的GSK-3抑制剂对糖尿病治疗的重要性。
背景与目的:血管新生是导致大肠癌向其他脏器组织侵袭、转移的重要原因。血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)是重要的促血管生成因子之一,但其过表达机制尚不清楚。Wnt/β-catenin信号通路在大肠癌发生中存在过度激活,故与大肠癌的发生、发展密切相关。本研究旨在探讨Wnt/β-catenin信号通路对人肠癌VEGF表达的调控作用,揭示大肠癌血管新生的部分机制。方法:分别采用GSK-3β抑制剂SB-216763激活人肠癌HCT-116细胞Wnt/β-catenin信号通路和β-catenin/tcf抑制剂FH-535抑制Wnt/β-catenin信号通路,蛋白质印迹法(Western blot)法检测β-catenin蛋白表达,ELISA法检测细胞培养上清液中VEGF表达。结果:GSK-3β抑制剂SB-216763作用人肠癌HCT-116细胞后,β-catenin在细胞总蛋白、细胞质蛋白和核蛋白中的表达均明显升高,12 h达到最大值,分别是对照组的4.3、3.6和3.

5mmol/L glucose)、高糖组(HG,25mmol/L glucose)、高糖+10mmol/L肌肽组、高糖+20mmol/L肌肽组、高糖+40mmol/L肌肽组、高糖+SB组(HG+10μmol/L SB203580)、高糖+PD组(HG+10μmol/L PD98059)。ELISA检测胶原Ⅰ、Ⅲ的含量,Western blot检测TGF-β1、p-p38 MAPK和p-ERK(1/2)等蛋白的表达。结果:与正常糖组相比,高糖组中胶原Ⅰ和胶原Ⅲ含量增加(P<0.01);TGF-β1、p-p38和p-ERK等表达增加(P<0.01);与高糖组相比,高糖+肌肽组中胶原Ⅰ、Ⅲ、TGF-β1、p-p38、和p-ERK等均降低(P<0.05);高糖+SB组和高糖+PD组中胶原Ⅰ、Ⅲ表达减少(P<0.05)。结论:肌肽对心肌成纤维细胞中胶原生成具有抑制作用,且通过MAPK通路实现。
慢性疼痛中,神经元-脊髓小胶质细胞间的信号分子可以激活脊髓小胶质细胞,而激活的脊髓小胶质细胞可以释放多种与慢性疼痛有关的活性物质。实验研究表明,脊髓小胶质细胞表面受体的上调及细胞内激酶的激活在细胞的激活和慢性疼痛的发生和发展中起重要作用。
目的检测巨噬细胞炎性蛋白-1α(MIP-1α)和基质金属蛋白酶-9(MMP-9)表达在Ⅲ型前列腺炎疾病中相关性及作用,探讨两者在Ⅲ型前列腺炎中表达的意义。方法采用双层夹心抗体ELSIA法检测MIP-1α、MMP-9在15例Ⅲa型、20例Ⅲb型前列腺炎患者及10例健康男性前列腺液中的表达情况。采用t检验分析各组之间差异,Spearman法了解MIP-1α、MMP-9与慢性前列腺炎疼痛症状评分、白细胞计数之间的相关性。结果

MIP-1α在Ⅲa组、Ⅲb组及对照组表达分别为(148.11±11.47)、(144.09±7.96)和(117.61±16.52)pg/mL;MMP-9在Ⅲa组、Ⅲb组及对照组中的表达分别为(429.17±58.25)、(435.01±65.96)和(270.06±78.78)ng/mL。MIP-1α水平与MMP-9成正相关;两者与白细胞计数无明显相关;MIP-1α、MMP-9表达与NIH-CPSI疼痛评分成正相关。结论

MK-1775分子量 PLX4032供应商 MIP-1α和MMP-9参与了Ⅲ型前列腺炎的发生发展,并且可能与慢性前列腺炎疼痛的发生相关,MIP-1α和MMP-9可能成为Ⅲ型前列腺炎的临床诊断、分型、随访疗效的重要指标。
胰蛋白酶及蛋白酶激活受体-2(PAR-2)在多种肿瘤细胞中异常表达,且与肿瘤细胞的生物学特性及恶性程度密切相关。PAR-2激活后可通过多种信号转导途径导致细胞增殖和侵袭转移。PAR-2和胰蛋白酶可能成为肿瘤细胞生物学行为的新标志物,为临床恶性肿瘤的早期诊断和治疗提供一个新的方向。现全文对胰蛋白酶和PAR-2在恶性肿瘤调控途径中的最新进展作一全面的综述。
目的探讨N-乙酰半胱氨酸(NAC)对化疗所致骨髓抑制的改善作用。方法①体内实验:将C57BL/6j小鼠随机分为正常对照组、环磷酰胺(Cy)所致骨髓抑制模型对照组(ip给予生理盐水)以及模型+NAC 30,90和270 mg·kg-1组,每天1次,连续10 d。给药第4天一次性ip给予Cy 380 mg·kg-1制备骨髓抑制小鼠模型。造模后第1,2,3,4和7天,鼠尾静脉取血20μl检测外周血像,同时取一侧股骨骨髓,检测骨髓单个核细胞(BM-MNC)数目;造模后第1天,检测BM-MNC凋亡和细胞内活性氧(ROS)水平。②体外实验:C57BL/6j小鼠一次性ip给予Cy 此网站 380 mg·kg-1后第3天,取BM-MNC进行造血祖细胞培养,在培养体系中加入NAC 0.01,0.1,1和5 mmol·L-1,于第7～12天检测造血祖细胞粒红巨噬巨核系集落形成单位(CFU-Mix)、粒细胞巨噬细胞集落形成单位(CFU-GM)和红系爆式形成单位(BFU-E)数目,观察NAC体外对骨髓抑制模型小鼠造血祖细胞增殖分化的影响。结果①体内实验:与正常对照组相比,ip给予Cy后第1～4天,模型组BM-MNC和外周血白细胞(WBC)数目显著下降,造模后第7天仍未恢复正常。与模型组相比,造模第2天,NAC 270 mg·kg-1组WBC数目降低;其余各时间点,NAC各治疗组的WBC数目无明显差异,NAC 30和90 mg·kg-1组WBC最低值于造模后第4天出现。与模型组比较,造模后第1天NAC

30和90 mg·kg-1组ROS水平降低,BM-MNC凋亡率无明显差异;造模后第1～2天BM-MNC明显增加。②体外实验:与正常对照组相比,模型组造血祖细胞CFU-Mix,CFU-GM和BFU-E数目均明显降低;与模型组比较,NAC 0.1 mmol·L-1能够增加骨髓抑制小鼠骨髓造血祖细胞CFU-GM和BFU-E数目,但NAC 5 mmol·L-1减少模型小鼠CFU-GM,BFU-E和CFU-Mix数目。结论 NAC通过降低ROS水平对化疗所致骨髓抑制有一定的改善作用。
二氢青蒿素是青蒿素的重要衍生物,具有显著的抗疟作用。对多种肿瘤动物模型具有一定的肿瘤抑制作用,提示其具有抗肿瘤作用。二氢青蒿素的抗肿瘤作用机制可能与抑制肿瘤细胞增殖包括诱导肿瘤细胞周期阻滞和促进肿瘤细胞凋亡、抑制肿瘤新生血管生成以及抗肿瘤细胞侵袭和转移等有关。细胞内亚铁或亚铁血红素可能是二氢青蒿素抗肿瘤作用的直接靶点。由于二氢青蒿素具有广谱抗肿瘤作用、对正常细胞毒性小及对多药耐药细胞有效等优点,因此有可能被开发为新的抗肿瘤药物。
OBJECTIVE TO investigate the effect of high dose β-amyloid 1-42 oligomers(AβO1-42) on adult hippocampal neural stem/progenitor cells(NSC) in vitro.METHODSNSC was treated with AβO1-42(3-10 μmol·L-1) for 5 d.Measurements of cell proliferation were performed using a bromodeoxyuridine(5-bromo-2-deoxyuridine,BrdU) incorporation assay.

71%;大肠癌微淋巴管密度(microlymphatic density,MLD)显著高于正常大肠组织(t=3.624,P<0.01)。结论大肠癌β-catenin异位表达可能是诱导大肠癌淋巴管生成的重要原因。
目的探讨舒芬太尼后处理对在体大鼠心肌缺血再灌注损伤的影响。方法健康雄性SD大鼠经结扎冠状动脉左前降支制备心肌缺血再灌注损伤模型后随机分为8组:假手术(A)组:只穿线,不结扎;缺血再灌注(B)组:缺血30min,再灌注120

min,再灌注前5 min单次静脉注射生理盐水1 ml;缺血后处理(C)组:缺血30 min末行缺血10 s,再灌注10 s,重复3次后再灌注120 min;舒芬太尼后处理(D～H)组:再灌注前5 min分别单次静脉注射舒芬太尼0.1、0.3、1、3、10μg/kg,5 min后再灌注120 min。于结扎线缝好后平衡30 min(T0)、缺血30 min末(T1)、后处理末(T2)、再灌注120min末(T3)记录血流动力学参数。计算心肌梗死面积(IS)与缺血危险区(AAR)比值(IS/AAR)。选取A、B、C、最佳剂量舒芬太尼后处理组于T3时取颈动脉血2 ml,采用硫代巴比妥酸(TBA)法测定丙二醛(MDA)浓度,黄嘌呤氧化酶法测定超氧化物歧化酶(SOD)活性。结果与B组比较,C、E、F、G、H组IS/AAR降低(P<0.05);与B组比较,C、F组MDA降低,SOD活性升高(P<0.05)。结论舒芬太尼可模拟缺血后处理减轻在体大鼠心肌缺血再灌注损伤,并且呈剂量依赖性。
Reperfusion A-1210477分子量 therapy must be applied as soon as possible to attenuate the ischemic insult of acute myocardial infarction(AMI).However reperfusion is responsible for 所以 additional myocardial damage,which likely involves opening of the mitochondrial permeability transition pore(mPTP).In reperfusion injury,mitochondrial

damage is a determining factor in causing loss of cardiomyocyte function and viability.Major mechanisms of mitochondrial dysfunction include the long lasting opening of mPTPs and the oxidative stress resulting from formation of reactive oxygen species(ROS).Several signaling 不 cardioprotective pathways are activated by stimuli such as preconditioning and postconditioning,obtained with brief intermittent ischemia or with pharmacological agents.These pathways converge on a common target,the mitochondria,to preserve their function after ischemia/reperfusion.The

present review discusses the role of mitochondria in cardioprotection,especially the involvement of adenosine triphosphate-dependent potassium channels,ROS signaling,and the mPTP.Ischemic postconditioning has emerged as a new way to target the mitochondria,and to drastically reduce lethal reperfusion injury.Several clinical studies using ischemic postconditioning during angioplasty now support its protective effects,and an interesting alternative is pharmacological postconditioning.In fact ischemic postconditioning and the mPTP desensitizer,cyclosporine A,have been shown to induce comparable protection in AMI patients.