01),MZF1-SiRNA组组DNA合成能力显著低于SiRNA组(SW480中P<0.01),MZF1-SiRNA组Ki67荧光强度显著低于SiRNA组(P<0.01)。我们对10例临床结直肠癌患者的肿瘤组织和正常组织中的MZF1和p55PIK的表达进行了检测和分析,结果显示,肿瘤组织中MZF1和p55PIK的表达显著高于正常组织(P
研究背景 胰岛素瘤是最常见的胰腺内分泌肿瘤,占功能性胰腺内分泌肿瘤的70-80%,但由于其年发病率仅为4/百万,病例资源的稀缺导致临床医师对其临床特点及生物学行为认识不够透彻,并且也大大限制了对其发病机制的基础研究,国内外尚无关于其发病危险因素的大样本量流行病学调查,其发病、演进及转移机制目前仍不明了。近年研究发现哺乳动物雷帕霉素靶蛋白mTOR参与多种肿瘤的发生及进展,并且PRAS40在其中发挥重要的调节作用,mTOR/PRAS40/P70S6K信号转导通路是否参与胰岛素瘤的发病,PRAS40表达水平是否对mTOR活性及胰岛素瘤增殖产生影响,目前仍不明了。 目的 (1)探索胰岛素瘤发病危险因素及高危人群；

(2)了解mTOR/P70S6K通路在胰岛素瘤组织中活化、表达情况； (3)观察mTOR及PI3K/mTOR双重抑制剂对mTOR通路活性及对胰岛素瘤细胞增殖、胰岛素分泌功能及凋亡的影响； (4)探讨PRAS40表达水平对mTOR氵舌性及胰岛素瘤细胞增殖的影响。 方法 (1)对北京协和医院基本外科2000年1月至2010年1月期间收治的196例胰岛素瘤患者病历资料进行回顾性分析,并以同期收治的233例非肿瘤患者作为对照,进行以医院为基础的病例-对照研究,采用单因素及多因素分析方法评价环境因素、生活方式、家族史等相关危险因素是否与胰岛素瘤发病存在关联及联系程度大小； (2)采用RT-PCR法观察mTOR及P70S6K 为什么 mRNA在胰岛素瘤及正常胰腺组织的表达情况,另外用免疫组织化学及Western blottting方法,观察p-mTOR及p-P70S6K在胰岛素瘤组织及正常胰腺组织中的表达差异； (3)分别使用mTOR抑制剂(雷帕霉素)及PI3K/mTOR双重抑制剂(NVP-BEZ235)干预胰岛素瘤INS-1细胞,RT-PCR及Western blotting观察抑制剂对该通路关键基因及蛋白表达影响,并采用MTT、流式细胞仪检测增殖及凋亡、葡萄糖刺激胰岛素分泌实验(GSIS)等方法评价两种抑制剂对胰岛素瘤细胞增殖、胰岛素分泌功能及凋亡等影响； (4)使用PRAS40-siRNA瞬时转染INS-1细胞,Taqman Real time PCR法了解PRAS40沉默效果,Western blotting观察其对nTOR及P70S6K磷酸化水平的影响,MTT比色法观察下调PRAS40表达对INS-1细胞增殖的影响。 结果 (1)农村人口(OR=4.950,P
多药耐药是癌细胞对多种结构和功能不相关的化疗药物都存在耐药性的一种现象。乳腺癌在临床治疗中经常产生多药耐药。米托葸醌(mitoxantrone,MXT)是一种常用的临床治疗乳腺癌的化疗药物,其主要机制为抑制拓扑异构酶Ⅱ,从而阻碍DNA合成与修复,导致乳腺癌细胞周期阻滞于S和G2/M期。已有大量文献报道PI3K/Akt信号通路与细胞生长和抗凋亡有关,抑制PI3K/Akt信号通路能诱导细胞死亡、增加肿瘤细胞对化疗药物的敏感性。LY294002和Wortmannin是两种常用的PI3K抑制剂,被广泛用于PI3K在细胞内的功能研究。现有文献表明利用LY294002或Wortmannin联合化疗药物能逆转磷酸化糖蛋白(P-glycoprotein,P-gP)和多药耐药相关蛋白(multidrug

时间 mTOR抑制剂 resistance associated proteins,MRPs)介导的多药耐药。 本论文主要研究磷脂酰肌醇(-3)激酶(PI3K)抑制剂对乳腺癌耐药蛋白(breastcancer resistance protein,BCRP)介导的乳腺癌耐药细胞株MCF-7/MXT对MXT的耐药的逆转作用。MCF-7/MXT细胞是高表达乳腺癌耐药蛋白的耐药细胞株,是利用MXT浓度梯度对敏感细胞株MCF-7进行筛选而获得。 本研究应用多项实验技术检测多种指标:MTT法检测PI3K抑制剂与MXT单独或共同作用时乳腺癌敏感株MCF-7或耐药株MCF-7/MXT的细胞活性;流式细胞术检测敏感株MCF-7或耐药株MCF-7/MXT细胞内MXT的积聚与外排、线粒体膜电位及细胞周期分布;Western

blot检测细胞凋亡相关信号通路。 本研究发现wortmannin不能增加耐药株MCF-7/MXT对MXT的敏感性,而LY294002却能显著地逆转MCF-7/MXT对MXT的抗性(P＜0.01)。Wortmannin对MCF-7/MXT细胞内MXT的积聚、外排,线粒体膜电位及细胞周期分布都没有影响。LY294002使MXT对MCF-7/MXT的半抑制率减少了35.4倍。在LY294002的共同作用下,MCF-7/MXT细胞二小时MXT的积聚增加了14倍,1小时的外排减少了4倍。MXT单药作用会引起MCF-7/MXT细胞显著的G2/M期和轻微的S期阻滞,LY294002单药作用会引起G0/G1期阻滞,而MXT和LY294002联合作用96小时,导致MCF-7/MXT细胞明显的S和G2/M期阻滞。MXT或LY294002单独处理MCF-7/MXT细胞24小时都不会引起细胞线粒体膜电位下降,而联合处理24小时却显著地降低了细胞线粒体膜电位。LY294002的作用导致了PI3K下游靶点Akt磷酸化即活性的下降。在LY294002与MXT联合作用下,caspase 8,9,3,7及PARP的活性都有不同程度的增加。LY294002与MXT单独或联合作用都导致了Bcl-2表达明显的下调。 由此可见,LY294002可能通过抑制PI3K活性和BCRP外排MXT的功能,激活细胞内与细胞外依赖性两条细胞凋亡信号通路,从而逆转MCF-7/MXT细胞对MXT的耐药。同为PI3K抑制剂,wortmannin却不能增加MCF-7/MXT对MXT的敏感性,其原因可能是wortmannin在溶液中的半衰期只有4至6小时,也可能与其分子结构不能抑制BCRP外排MXT有关,或与LY294002在细胞内还有其它功能有关,如抑制钙、钾离子通道、DNA依赖性蛋白激酶、钙蛋白激酶等等。LY294002与MXT联合作用具有良好的临床研究与应用价值。
1.

p38 MAPK通路蛋白参与IBS-D粪便上清液诱导的Caco-2细胞BDNF过表达为进一步研究PAR-2介导BDNF表达的下游通路,我们检测了MAPK p38和NF-κB p65两个PAR-2受体下游通路蛋白。结果显示IBS-D FSN能够快速诱导p38MAPK磷酸化增加,但对p65蛋白无明显影响。PAR-2抑制剂ENMD-1068可阻断IBS-D

FSN对p38磷酸化的诱导。p38 MAPK抑制剂SB203580可阻断IBS-DFSN对Caco-2细胞BDNF蛋白的上调,但NF-κB抑制剂PDTC则无此作用。5.结直肠灌注IBS-D粪便上清液可诱导C57小鼠结肠高敏感,其作用依赖于结肠PAR-2激活和BDNF的过表达Western blotting结果显示,与对照FSN相比,结肠灌注IBS-D FSN可显著上调小鼠结肠上皮BDNF蛋白的表达,且此作用可被FUT-175和ENMD-1068抑制。免疫组化验证了Western blotting结果,显示上调的BDNF主要分布于结肠上皮和粘膜。功能上,腹壁肌电记录显示结直肠灌注生理盐水和对照FSN对小鼠结肠敏感性没有明显影响,IBS-D KRX0401 FSN可则显著增强小鼠对CRD的腹壁肌电反应。阻断BDNF或PAR-2,以及消除IBS-D FSN丝氨酸蛋白酶活力均显著抑制IBS-D FSN对结肠高敏感的诱导作用。第二部分1.研究对象基本情况连续纳入符合罗马III诊断标准的IBS患者30例和正常对照者30例。IBS患者腹痛程度和腹痛频率评分均显著高于对照组,IBS亚型之间无明显差异。IBS-D患者粪便上清(IBS-DFSN)丝氨酸蛋白酶活力为明显高于正常对照(median (IQR) 1521(905.3-1983) U/mg蛋白vs.465 (264.3-708.0) U/mg蛋白；P
研究背景假体周围炎性骨溶解是人工关节置换术后的严重并发症。目前,大量研究提示无菌性松动主要与假体长期磨损或腐蚀产生的微粒所诱导的生物学反应有关。早在1977年Willert等人首先提出了假体无菌性松动是巨噬细胞对磨损微粒反应的结果。磨损微粒诱导人工关节周围组织内的单核巨噬细胞、成纤维细胞和滑膜细胞释放炎性细胞因子,引起一系列体内持续性炎性反应,促使局部破骨细胞增加,发生骨质吸收破坏,并最终导致假体的无菌性松动。近年来的研究提示,这些炎性细胞因子主要通过骨保护素/核因子κB受体活化因子配体/核因子κB受体活化因子(OPG/RANKL/RANK, Osteoprotegerin /Receptor Actibator of Nuclear Factor Kb Ligand /Receptor Actibator of NuclearFactor κB)信号系统激活破骨细胞,导致了假体周围骨量的丢失,产生骨溶解。肿瘤坏死因子样弱凋亡诱导因子(tumor necrosis factor like weak inducer of apoptosis, TWEAK)是1997年新发现的肿瘤坏死因子配体超家族中的一员。TWEAK在人体多种组织中均有表达,是一种广泛表达的肿瘤坏死因子家族的配体。多种免疫细胞(单核-巨噬细胞,树状突细胞,活化的T细胞等)均可产生其可溶性的细胞因子形式。在急慢性炎症或损伤的情况下,TWEAK表达显著增加。已经越来越多研究发现,TWEAK通过与其受体相结合,发挥各种各样的生物学效应,包括释放促炎性因子、调节免疫反应、刺激细胞凋亡以及调节组织修复与再生。TWEAK能促激活经典的核转录因子κB

(Nuclear Factor κ BNF-κB)通路,除此之外,研究发现,TWEAK还可激活非经典的NF-κB通路以及丝氨酸/苏氨酸丝裂原激活蛋白(mitogen-ativated

protein kinase, MAPK)激酶通路。MAPKs信号通路具有生物进化的高度保守性,广泛存在于细胞内,其主要功能是将细胞外刺激信号传递到细胞内,并引起细胞的一系列生物学反应。目前已发现细胞内有多条MAPK通路：细胞外信号调节激酶(extracellular Capmatinib 花费 signal regulated kinase, ERK1/ERK2)通路、c-jun氨基末端激酶(c-jun N-terminal kinase, JNK)通路(又称为应激活化蛋白激酶stress-activated CP-868596小白鼠 protein kinase.SAPK).p38MAPK(p38α, p38β, p38γ and p38δ)通路和ERK3/ERK4/ERK5通路。其中p38 MAPK是MAPK家族的重要成员,当他们受到环境应激或细胞因子刺激时,能使效应细胞产生增殖、分化、迁移、浸润和炎症等生命活动。p38 MAPK的抑制剂SB203580,为吡啶咪唑类衍生物,能特异性地作用于p38 ATP结合活性位点Thr106,使p38失去了与ATP结合的能力,从而使其失去激酶活性。白介素-6(Interleukin 6, IL-6)是一种多功能的细胞因子,主要由单核细胞、淋巴细胞、成纤维细胞等分泌,发挥一系列的免疫效应。单核细胞趋化蛋白-1(Monocyte chemiattractant protein 1.MCP-1)属于趋化因子超家族的一员,其主要功能是通过趋化作用,使单核细胞离开血流而分化成为分布于组织中的巨噬细胞,参与着机体的免疫和炎症反应。研究表明这些因子都参与着关节置换术后假体周围无菌性松动的病理过程随着对炎性骨溶解研究的深入,特别是在溶骨性因子,受体／配体家族成员及其细胞内信号传导通路对破骨前体细胞分化、成熟及破骨细胞活化、功能影响方面研究的进展,针对骨溶解机制中某一环节进行干预成为可能。目前已有少量文献报道,p38 MAPK信号通道参与了磨损微粒诱导的骨溶解这一病理过程,Zwerina等人通过风湿性关节炎的小鼠模型研究,不仅发现p38MAPK对于炎性骨破坏起着重要作用,同时还发现抑制p38MAPK是减轻炎性骨破坏的重要手段。此外,在临床上对狼疮肾炎、肌炎等疾病的研究中发现,p38 MAPK信号通道能被TWEAK激活,并发挥致病作用。但是p38 MAPK信号通道在人工关节置换术后假体松动的界膜组织中如何表达,尚存在争议。而TWEAK作为TNF配体超家族的成员是否也参与假体周围无菌性松动的发生和发展,尚未见文章报道。基于以上的理论支撑,本研究拟通过组织形态学观察及分子生物学实验方法,探讨人工关节假体周围骨溶解的相关问题。1.在松动假体周围界膜组织中,TWEAK和p38 MAPK表达情况,探讨其表达与假体松动的相关性。2.用钛微粒刺激体外培养巨噬细胞(RAW246.7),通过p38 MAPK抑制剂进行干预,观察TWEAK及p38 MAPK的表达,探讨TWEAK-p38 MAPK信号通过在其中可能的作用机制。3.制备小鼠颅骨骨溶解的动物模型,用p38MAPK抑制剂进行干预,观察TWEAK及p38MAPK的表达,探讨TWEAK-p38MAPK-IL-6/MCP-1信号通道在炎性骨溶解中的作用,以及p38 MAPK抑制剂对人工关节无菌性松动靶向治疗的可能性。一.

407,癌旁组织是3.657,p=0.473,三者在癌组织中的表达均高于癌旁组织。mTORmRNA在乳腺癌组织和癌旁组织中表达的平均水平分别是14.83、19.78, t=-1.376, p=0.174; S6K1mRNA在乳腺癌组织和癌旁组织中表达的平均水平分别是66.06,87.51, t=-1.15, p=0.254;4EBP1mRNA在乳腺癌组织和癌旁组织中表达的平均水平分别是12.70、10.33,t=0.379,p=0.706,三者差异均无明显统计学意义(p>0.05)。结论:mTOR信号通路及其下游分子4EBP1和S6K1在浸润性乳腺癌组织中的表达明显高于癌旁组织,该信号通路在浸润性乳腺癌组织中被显著激活。mTOR及其下游分子4EBP1和S6K1mRNA在癌组织中的表达未见明显增高,其相应蛋白质表达的调控位点可能位于转录后水平或蛋白质水平。 点击此处 第三部分：mTOR信号及其下游分子4EBP1和S6K1在新疆维、汉不同民族浸润性乳腺癌中表达的差异研究目的：探讨mTOR及其下游分子4EBP1和S6K1在新疆维吾尔族和汉族浸润性乳腺癌组织中的表达差异情况。方法：随机选取285例于2005年3月1日-2009年9月30日就诊于新疆医科大学附属肿瘤医院的维吾尔族、汉族女性浸润性乳腺癌患者癌组织病理资料,使用免疫组化方法检测磷酸化的mTOR及其下游分子4EBP1和S6K1的表达状况；选取63例维、汉新鲜乳腺癌组织样本,使用荧光定量rtPCR方法进一步检测mTOR及其下游分子4EBP1和S6K1的mRNA表达状况。结果：免疫组化染色结果显示,在维吾尔族和汉族乳腺癌组织中,p-mTOR的表达阳性率分别是54%和46%(p=0.067), p-4EBP1的表达阳性率分别是62%和38%(p=0.020),p-S6K1的表达阳性率分别是49%和51%(p=0.695)。荧光定量rtPCR结果显示,维、汉乳腺癌组织中mTORmRNA2－ΔΔct平均值分别为10.88和19.7,差异有统计学意义(p=0.045),4EBP1mRNA2－ΔΔct平均值分别为52.72和80.74,差异无统计学意义(p=0.128),S6K1mRNA2－ΔΔct平均值分别为7.97和17.92,差异无统计学意义(p=0.404)。结论：在mTOR信号通路中,p-mTOR和p-S6K1蛋白的表达无明显维、汉民族差异,而p-4EBP1在维吾尔族中的表达显著升高,且存在统计学差异,可能成为研究维、汉不同民族之间乳腺癌差异及个体化治疗的新方向。维、汉之间mTORmRNA表达水平存在差异,但因P值接近0.05,仍需进一步研究证实。维、汉之间4EBP1和S6K1mRNA的表达不存在显著差异。由于mRNA与蛋白检测的结果不一致,因而不能通过单纯的mRNA的检测来说明维、汉乳腺癌中mTOR信号通路的激活状态。
在世界范围内，膀胱癌在美国是第七位最常发生的肿瘤，每年大约有13,000人因此死亡，在中国居泌尿生殖系统肿瘤发生率的第一位。膀胱尿路上皮癌作为最常见的膀胱癌亚型占所有膀胱癌的90%以上。尽管膀胱尿路上皮癌发生发展期间其诊断策略和生物分子标记研究取得了很大的进展，但是多于30%的膀胱尿路上皮癌病人复发，并最终进展为浸润型。因而，寻找和鉴定新的诊断或治疗膀胱癌病人的分子标记具有十分重要的意义。

研究显示，恶性肿瘤是一种以细胞增殖、分化以及凋亡异常为特征的疾病。其主要特点是细胞的无限增殖能力和细胞周期的异常调控，这些成为肿瘤发生发展的主要原因。近年来，科研人员对肿瘤的关注逐渐转移到细胞周期的调控上，尤其是中心体，并发现中心体在调控细胞周期分布的变化以及细胞周期相关蛋白的表达中发挥重要的作用。因此中心体相关蛋白是继细胞周期，信号转导和细胞凋亡之后又一个肿瘤研究的热点。此外，越来越多的研究显示，中心体有望成为恶性肿瘤治疗的新的分子靶点，从而为恶性肿瘤的分子靶向治疗开辟了新的途径。

以及 LY294002分子重量 TPX2是目前发现的一个与中心体密切相关的蛋白，在肿瘤细胞染色体20q经常出现基因的扩增，其中常常伴有TPX2的扩增存在。此外，TPX2也是一个微管相关蛋白，主要是哺乳动物细胞在着丝粒处负责微管的组装和形成，这一过程是通过与非洲爪蟾驱动蛋白类似的蛋白2（Xenopus kinesin-like protein2，Xklp2）的羧基末端结构域的结合来介导的。TPX2是Ran-GFP的下游调控基因，在纺锤体的组装和形成中发挥重要作用。在有丝分裂早期，TPX2以依赖RanGTP的方式被释放，从而和AuroraA激酶相互作用，进而起始纺锤体的装配。TPX2的表达在细胞周期阶段被严密的调控，经常在G1向S期过渡的时期可见其表达，在细胞质分裂时表达消失。因而TPX2表达对于评估肿瘤细胞的增殖行为具有重要的价值。 近几年来，许多肿瘤中呈现出TPX2的异常表达，如在非小细胞肺癌中染色体20q11.2的扩增驱动了TPX2的拷贝数显著增加，胰腺导管腺癌中高水平的TPX2mRNA和蛋白的表达以及多于50%的巨大细胞骨肿瘤病人中呈现TPX2的高表达，这些研究提示TPX2可能成为肿瘤诊断和治疗的新的分子靶点。然而，迄今为止，世界范围内均未见TPX2在膀胱癌发生发展中的作用的研究报道，因此为了初步阐明TPX2在膀胱癌发生发展中的作用，在本研究中，作者首先通过免疫组织化学，半定量RT-PCR和实时荧光定量PCR检测膀胱癌组织和正常组织中TPX2mRNA和蛋白的表达，并通过半定量RT-PCR检测不同临床阶段和不同转移状态的膀胱癌组织中TPX2的表达，分析其表达与膀胱癌病人临床病理学参数之间的关系，并通过资料随访探讨其表达与膀胱癌病人预后之间的关系，初步探讨其在膀胱癌发生发展中的可能作用。进一步通过TPX2基因获得或缺失技术分别上调或下调膀胱癌细胞TPX2的表达，研究其表达变化对膀胱癌细胞增殖、细胞周期和细胞凋亡的影响，并探讨其可能的分子机制。最后采用裸鼠移植瘤模型研究TPX2表达上调或下调对膀胱癌裸鼠移植瘤生长的影响。该研究有望为以TPX2为靶点的膀胱癌的分子靶向治疗提供新的实验证据。 第一部分TPX2在膀胱癌组织中的表达及其在膀胱癌病人预后中的价值 方法 （1）采用免疫组织化学方法检测71例膀胱癌组织和相应的71例正常膀胱组织中TPX2蛋白表达。 （2）采用半定量RT-PCR分析了随机选择的21例膀胱癌组织和相对应的正常组织中TPX2mRNA的表达。 （3）采用实时荧光定量PCR检测随机选择的8例膀胱癌组织和相对应的正常组织中TPX2mRNA的表达。 （4）采用Kaplan–Meier存活曲线分析TPX2蛋白表达与膀胱癌病人预后之间的关系。 （5）统计学处理：应用SPSS17.0统计软件进行统计学处理，统计学数据用X±S表示。免疫组织化学结果采用X2进行评估，半定量RT-PCR和实时荧光定量PCR采用单因素方差分析（One-wayANOVA），TPX2表达和膀胱癌病人预后之间的关系采用Kaplan–Meier存活曲线分析。P＜0.

05μg/ml和0.1μg/ml PLY分别处理THP-1细胞12h后，通过瑞氏染色观察到细胞发生明显的凋亡形态学改变，透射电子显微镜观察到THP-1细胞发生凋亡，并且出现凋亡小体和核碎裂象等典型凋亡形态特征；0.05μg/ml PLY和0.1μg/ml PLY作用THP-1细胞6h后通过AnnexinV-FITC/PI双标法检测细胞凋亡率分别为13.15%和24.58%，作用12h后细胞凋亡率分别为17.09%和60.08%（P
目的：通过研究姜黄素对转化生长因子-β

（Transforming growthfactor-β，TGF-β1）诱导的乳腺癌MDA-MB-231细胞内基质金属蛋白酶-9(Matrix metallopeptidase-9, MMP-9)表达以及侵袭能力的影响，探讨TGF-β/Smad和(或)TGF-β/MAPKs信号通路在姜黄素抑制TGF-β1诱导的乳腺癌侵袭转移中可能存在的作用机制。 方法：1. CCK-8法检测姜黄素对乳腺癌MDA-MB-231细胞的细胞毒性作用。 2．侵袭小室观察姜黄素对TGF-β1诱导的乳腺癌MDA-MB-231细胞内的侵袭能力的影响。 3. Western blot检测姜黄素对TGF-β1诱导的MDA-MB-231细胞内MMP-9的蛋白表达以及上游Smad2、ERK1/2、p38的磷酸化水平。 4.明胶酶谱法检测姜黄素对TGF-β1诱导的MDA-MB-231细胞上清液中MMP-9的活性变化。 5. Western blot和酶谱法检测姜黄素，ERK特异性抑制剂PD98059，p38特异性抑制剂SB203580对TGF-β1诱导的MDA-MB-231细胞MMP-9蛋白表达及活性变化。 结果：1. CCK-8结果证实低浓度(≤10μM)姜黄素作用48h内，对乳腺癌MDA-MB-231细胞没有明显的细胞毒性作用（P＞0.05）；浓度大于10μM的姜黄素呈剂量，时间依赖性抑制细胞的生长（P＜0.05）。 并且 2.侵袭小室检测显示姜黄素(≤10μM)呈剂量依赖性明显减少了TGF-β1诱导的细胞穿膜数量（P＜0.05）。 3. Western blot显示姜黄素(≤10μM)可显著抑制TGF-β1诱导的MDA-MB-231细胞MMP-9，p-Smad2，p-ERK1/2以及p-p38的蛋白表达，其抑制作用呈浓度，时间依赖性。 很少 4.明胶酶谱法结果表明姜黄素(≤10μM)随浓度增加对TGF-β1诱导的MMP-9活性的抑制作用显著增强（P＜0.05）。 5. ERK特异性抑制剂PD98059（30μM）抑制MMP-9蛋白表达及活性的作用与姜黄素(10μM)相似，而p38特异性抑制剂SB203580（20μM）对MMP-9没有明显影响（P＞0.05）。 结论：姜黄素可能通过TGF-β/Smad，TGF-β/ERK信号通路降低TGF–β1诱导的MMP-9表达及其活性，从而抑制MDA-MB-231细胞侵袭性。
目的：甲基乙二醛（MGO）是葡萄糖活性代谢产物，晚期糖化终产物受体（RAGE）可抑制MGO代谢的关键酶乙二醛酶1（GLO-1）。MGO和晚期糖化终产物受体的水平在糖尿病人中明显增高，与糖尿病加速动脉粥样硬化有关，但它们之间相互作用在糖尿病加速动脉粥样硬化中的意义仍不清楚。本课题组前期研究发现MGO诱导Jurkat细胞分泌炎症因子TNF-α、IFN-γ。本实验将进一步研究RAGE及其胞内信号对MGO诱导的Jurkat细胞分泌TNF-α和IFN-γ的影响，为了解糖尿病加速动脉粥样硬化机制提供了实验基础。

方法：①不同浓度的MGO（0、15、30、60μM）作用PHA（0.25μg/ml）预刺激的Jurkat细胞24h，Western blot检测RAGE表达。②不同浓度MGO（0、15、30、60μM）作用于PHA预刺激的Jurkat细胞24h，ELISA检测TNF-α和IFN-γ的分泌；部分实验加RAGE抗体（1μg/ml）预处理，同时设非特异抗体（1μg/ml）为对照。③不同浓度MGO（0、15、30、60μM）作用PHA预刺激的Jurkat细胞24h, 获悉更多 Western blot测钙调蛋白依赖性蛋白激酶IV（CaMKIV）的表达；部分实验加RAGE抗体（1μg/ml）预处理，同时设非特异抗体（1μg/ml）为对照。免疫荧光检测30μM MGO作用0、15、30、60min后的Jurkat细胞内CaMKIV转核情况；部分实验加RAGE抗体（1μg/ml）预处理，同时设非特异抗体（1μg/ml）为对照。④30μM

MGO作用PHA预刺激24h的Jurkat细胞0、15、30、60min，Western blot检测p38MAPK磷酸化表达；部分实验加RAGE抗体（1μg/ml）预处理，同时设非特异抗体（1μg/ml）为对照。⑤30μMMGO作用于CaMKIV抑制剂KN62（10μM）、p38MAPK抑制剂SB203580（25μM）预处理的Jurkat24h，ELISA检测TNF-α和IFN-γ的分泌。 结果：①MGO作用于PHA预刺激的Jurkat细胞24小时，Western Blot显示Jurkat细胞表达RAGE，15、30、60μM MGO均上调RAGE的表达，与MGO未作用组比较差异有统计学意义（P<0.05）。RAGE抗体能抑制MGO诱导Jurkat细胞分泌TNF-α及IFN-γ（p0.05）。③15-60μM MGO能增加CaMKIV的表达，与MGO未作用组比较差异有统计学意义（p<0.05）。RAGE抗体抑制MGO诱导的CaMKIV的表达（p0.05）。免疫荧光显示30μM MGO作用15-60min促进Jurkat细胞CaMKIV核转位；RAGE抗体抑制MGO诱导的CaMKIV蛋白核转位，而非特异抗体预处理对MGO诱导CaMKIV蛋白核转位无影响。④30μM MGO作用Jurkat细胞15-60min引起Jurkat细胞内p38MAPK磷酸化表达增加（p<0.05）；RAGE抗体抑制MGO引起的p38MAPK磷酸化（p0.05）。⑤CaMKIV，p38MAPK通路抑制剂预处理抑制MGO诱导TNF-α和IFN-γ的分泌（p
目的：探讨烟酸能否通过诱导血红素加氧酶1表达抑制氧化应激导致的内皮细胞凋亡，以及烟酸诱导血红素加氧酶1表达的信号途径。进一步阐明烟酸抗动脉粥样硬化的药理机制，为烟酸的临床应用提供新的实验依据。 方法：过氧化氢（100uM）用于诱导氧化应激，实验分别使用不同浓度烟酸（0.25，0.5或1.

二亚硝基哌嗪诱发力竭游泳大鼠鼻咽上皮细胞癌变(“气虚染毒”)的细胞凋亡信号传导通路特征 随DNP诱导时间的延长,大鼠鼻咽上皮细胞病理变化日趋明显,最终发生恶变。在同一实验时段,模型组Ⅱ鼻咽上皮细胞病变发生率明显高于模型组Ⅰ,只是在同一病理阶段,所检测的基因表达活性在两组间的差异无统计学意义。 在正常鼻咽上皮细胞和单纯性增生病理阶段,二者之间的细胞凋亡活性和PCNA蛋白表达活性差异均无统计学意义(P>0.05)。随着鼻咽上皮细胞癌变过程的进展,异型增生组织和癌变组织中的细胞凋亡活性降低；虽然该二阶段的细胞凋亡活性差异无统计学意义(P>0.05),但分别与之前的两个阶段比较,其差异都具有统计学意义(P<0.05)；分别与之前的两个病理阶段比较,指标值差异也分别具有统计学意义(P0.05)。随着鼻咽上皮细胞病理变化的进展,异型增生组织和癌变组织中的Bcl-2蛋白表达活性增强,分别与之前的两个病理阶段比较,其差异均具有统计学意义(P0.05)。异型增生组织和癌变组织中的Cytochrome-C与Caspase-3蛋白表达活性减弱,分别与此前的两个病理阶段比较,其差异均具有统计学意义(P0.05)。随着鼻咽上皮细胞诱发性癌变进程的发展,Bax蛋白的活性表达程度呈现逐步降低趋势,但各病理阶段间的比较结果显示,其差异均无统计学意义(P>0.05)。进一步的相关分析提示,在此病理进程中,Bax蛋白活性与Bcl-2.Cytochrome-C和Caspase-3表达活性亦无明显的相关性关系(r分别为-0.157,0.196,0.334；P分别为0.593,0.501,0.243),但Bcl-2与Cytochrome-C和Caspase-3的表达活性之间则呈现明显的负相关(r分别为-0.668,-0.871；P0.05),但NF-K

B p65蛋白在异型增生组织和癌变组织中的表达活性都增强,而且该二病理阶段之间的指标值差异还具有统计学意义(P<0.05)；分别与此前的两个病理阶段比较,指标值差异也具有显著性意义(P0.05)；但分别与此前的两个病理阶段比较,其差异值却具有显著性意义(P0.05)；在异型增生阶段,益气解毒方组鼻咽上皮细胞凋亡活性明显高于模型组(P0.05)。而在异型增生阶段,益气解毒方组鼻咽上皮细胞的Bcl-2蛋白表达活性显著低于模型组(P0.05)。在同一病理阶段,各组鼻咽上皮细胞的Bax

selleckchem 哪里 mRNA和Bcl-2 mRNA转录活性与各自蛋白的表达活性呈现平行趋势。 在诱发性鼻咽癌变进程的单纯性增生阶段,3组大鼠鼻咽上皮细胞的NF-κB p65和IκBα蛋白表达活性均未出现显著性变化(P>0.05),但在异型增生阶段,益气解毒方组鼻咽上皮细胞的NF-κBp65蛋白表达活性显著低于模型组(P<0.05),而IκBα蛋白表达活性显著高于模型组(P
肿瘤细胞的多药耐药性(Multidrug Resistance,MDR)是肿瘤化疗失败的重要原因之一。其中,位于细胞膜上外排抗肿瘤药物蛋白的超表达是主要原因,如P-糖蛋白(P-glycoprotein,P-gp)。本论文选用了几种本研究所正在研究的新型天然产物,研究其克服人乳腺癌耐多柔比星MCF-7/DOX细胞的多药耐药性的特点,以及组蛋白乙酰化修饰对多药耐药mdr-1基因及其编码蛋白P-gp表达等方面的影响,研究克服肿瘤细胞多药耐药性的机制。 CB-839 solubility dmso 在以表观遗传修饰为靶标,抑制MDR产生基因的表达策略中,我们选择组蛋白去乙酰化酶(Histone deacetylase,HDAC)为切入点,深入研究了不同类型HDAC抑制剂如何克服以及调节多药耐药性,结果表明:Ⅲ型组蛋白去乙酰化酶SIRT1抑制剂烟酰胺(NAM)和Sirtinol对人乳腺癌MCF-7/DOX耐药细胞无交叉耐药性,通过引起细胞凋亡而起作用。通过MTT法和药物联合作用评价,我们发现:此类抑制剂不能逆转MCF-7/DOX细胞对抗肿瘤药物的多药耐药性,但是对于MCF-7敏感细胞有增加抗肿瘤药物疗效作用。进一步研究发现,无论是通过多柔比星引起的SIRT1表达增加,还是白藜芦醇所引起的SIRT1去乙酰化酶活性增加,都可以诱导MCF-7细胞表达P-gp。Ⅰ、Ⅱ型HDAC抑制剂TSA和VAS同样对MCF-7/DOX细胞无交叉耐药性,反而MCF-7/DOX细胞对TSA更加敏感。对于MCF-7细胞,VAS与紫杉醇、多柔比星合用具有协同作用,而在MCF-7/DOX细胞内无协同作用。TSA既能诱导MCF-7细胞表达P-gp,又能使MCF-7/DOX细胞P-gp表达增加。

在对康乐霉素C的研究中,我们发现康乐霉素C能抑制肿瘤细胞增殖,并诱导肿瘤细胞发生线粒体通路凋亡。康乐霉素C(1、2μg/ml)处理人肝癌HepG2细胞24小时,可观察到典型凋亡特征的DNA梯带和染色质凝集,Annexin V/PI双染色法分别观测到74.4%和94.4%细胞凋亡。在康乐霉素C诱导细胞凋亡的过程中,免疫印迹检测到P53蛋白的表达明显增加,caspase-3、-7、-9活化,PARP蛋白的切割,凋亡信号通路中的激酶P38和JNK磷酸化水平明显升高。并且康乐霉素C处理的HepG2细胞发生G_2/M期阻滞;不同浓度的康乐霉素C处理细胞4小时后,活性氧自由基明显增加,线粒体膜电位降低。同样康乐霉素C对MCF-7/DOX细胞无交叉耐药性,并诱导MCF-7/DOX细胞凋亡,但是其凋亡通路中Caspase激活明显滞后,也不涉及MAPK信号通路的改变。 在对天然产物PBC的研究中,我们发现PBC复合物和PBC-b单体增加罗丹明123在MCF-7/DOX耐药细胞和HR-20耐药细胞中的积累,并且与多柔比星合用后具有协同作用,表明PBC具有逆转多药耐药性的作用。有趣的是PBC复合物的作用要强于PBC-b单体,我们推测可能是PBC复合物中还含有逆转多药耐药性的其它成分。 总之,本论文的结果表明:1.Ⅲ型组蛋白去乙酰化酶SIRT1抑制剂对人乳腺癌MCF-7/DOX耐药细胞无交叉耐药性,通过引起细胞凋亡而起作用,此类抑制剂对于MCF-7敏感细胞有增效作用,是值得发展的新型抗肿瘤药物。2.

It becomes a critical determinant for the attenuation of TLR4-initiated apoptosis byβ-arrestin 2. Taken together, we demonstrate that the TLR4 possesses the capability of accelerating GSK-3βactivation thereby deteriorating SD-induced apoptosis;β-arrestin 2 represents an inhibitory effect on TLR4-mediated apoptotic cascade, through controlling the homeostasis of activation and inactivation of GSK-3p. Stress, either physical or psychological,

can modulate immune function. However, the mechanisms associated with stress-induced immune suppression remains to be elucidated. P-arrestin 有 2 serves as adaptors, scaffolds, and/or signal transducers. The role ofβ-arrestin 2 in stress-induced immune suppression is not known yet. Here, we demonstrate thatβ-arrestin 2 deficiency in mice increases the sensitivity of chronic stress-induced lymphocyte

reduction. Interestingly, the stress-induced suppression of T help 1 (Th1) cytokine and increased production of Th2 cytokine was greatly increased in P-arrestin 2 deficient mice compared with wild type mice. Moreover, inhibition of PI3K in P-arrestin 2-deficient mice exerts an additive effect on stress-induced lymphocyte reduction. Our study thus 一般 demonstrates thatβ-arrestin 2 plays an important role in stress-induced immune suppression. Background:Although it is established that opioid and Mycobacterium tuberculosis are both public health problems, the mechanisms by which they affect lung functions remain elusive. Methodology/Principal Findings:We report here that mice subjected to chronic morphine administration and M. tuberculosis infection exhibited significant apoptosis in the lung in selleck wild type mice as demonstrated by the terminal deoxynucleotidyl transferase-mediated deoxyuridine triphosphate nick end labeling assay. Morphine and M. tuberculosis significantly induced the expression of Toll-like

receptor 9 (TLR9), a key mediator of innate immunity and inflammation. Interestingly, deficiency in TLR9 significantly inhibited the morphine and M. tuberculosis induced apoptosis in the lung. In addition, chronic morphine treatment and M. tuberculosis infection enhanced the levels of cytokines (TNF-a, IL-1β, and IL-6) in wild type mice, but not in TLR9 knockout (KO) mice. The bacterial load was much lower in TLR9 KO mice compared with that in wild type mice following morphine and M. tuberculosis treatment. Morphine alone did not alter the bacterial load in either wild type or TLR9 KO mice. Moreover, administration of morphine and M. tuberculosis decreased the levels of phosphorylation of Akt and GSK3βin the wild type mice, but not in TLR9 KO mice, suggesting an involvement of Akt/GSK3p in morphine and M. tuberculosis-mediated TLR9 signaling. Furthermore, administration of morphine and M.

在转录水平研究罗格列酮对炎症介质生成的影响,用RT-PCR的方法检测BV-2细胞内TNF-a和诱导型一氧化氮合酶(inducible nitric oxide synthase, iNOS)的基因表达变化。 2.在蛋白水平探讨罗格列酮对炎症反应标志性蛋白的影响,用Western blot的方法检测LPS和罗格列酮作用前后iNOS的表达变化。 3.在转录因子水平探讨罗格列酮的抑制作用是否与NF-κB的活化有关,用Western的方法检测LPS和罗格列酮作用前后IκBα (NF-κB抑制蛋白)和磷酸化NF-κB p65的表达变化,并用免疫荧光染色的方法检测NF-κB p65核移位的变化。 4.在信号转导通路水平探讨罗格列酮对丝裂原活化蛋白激酶(Mitogen-activated JQ1 protein kinases, MAPKs)三条信号通路(p38MAPK、 JNK和ERK)激活的影响,用Western的方法检测LPS和罗格列酮作用前后三条通路的磷酸化情况,分析罗格列酮发挥抑制作用可能的途径。

结果： 1.LPS激活BV-2细胞后, TNF-a和iNOS的基因表达显著上调,炎症反应的标志性蛋白iNOS表达增多；应用罗格列酮后,TNF-a和iNOS的基因表达明显下降,TNF-a和iNOS蛋白表达受到抑制,以上结果表明罗格列酮可以在转录水平和蛋白水平抑制炎症介质的产生。 2. NF-κB是机体调控免疫炎症反应的重要转录因子。Western检测发现：LPS激活BV-2细胞后,IKBα表达降低,罗格列酮可以部分恢复IKBα的表达：LPS可以诱导磷酸化NF-κB p65的水平显著升高,罗格列酮作用后可以抑制其升高。另外,NF-κB激活后其p65亚基需进入细胞核与相应DNA特定序列结合而启动炎症介质的表达,免疫荧光染色显示提示罗格列酮可抑制NF-κB的核移位,以上实验结果提示罗格列酮减少炎症介质的释放与抑制NF-κB通路的激活关系密切。

这个 3. MAPKs是与炎症反应密切相关的信号通路,LPS激活BV-2细胞后,p38MAPK、 JNK和ERK通路均发生激活,罗格列酮抑制了p38MAPK和JNK通路的激活,而对ERK的激活无显著影响,说明在信号转导水平,罗格列酮可能通过抑制p38MAPK和JNK通路而发挥抗炎作用。 结论： 罗格列酮可以抑制活化BV-2细胞炎症介质的基因转录,并抑制炎症反应蛋白的表达；在转录因子水平罗格列酮可通过抑制NF-κB活化与核移位而发挥作用；在信号转导水平罗格列酮可通过抑制p38MAPK和JNK的激活而发挥抑制BV-2细胞活化的作用。 总结 本研究利用体外PD炎症模型,系统研究了PPARγ激动剂罗格列酮对小胶质细胞活化的抑制作用及对多巴胺能神经元的保护作用,首次阐明罗格列酮通过抑制NF-κB、 p38MAPK和JNK通路的激活而发挥抗炎作用。另外,本研究首次利用小胶质细胞系BV-2细胞的条件培养液在MN9D细胞上模拟了炎症损伤,直观显示了炎症介质对多巴胺能神经元造成的氧化应激和线粒体功能障碍,两者是导致多巴胺能神经元退变凋亡的主要机制,并证实罗格列酮抑制炎性介质释放与保护多巴胺能神经元的高度相关。本研究深化了罗格列酮抑制小胶质细胞活化药理机制的认识,为TZDs类药物治疗PD提供了新的实验依据。
研究背景： 神经系统疾病是全球首位致残疾病和第3位主要致死因素。如脑中风会引起大脑损伤区域神经元和神经元连接广泛缺失,导致长期的神经功能障碍。目前药物干预主要局限在急性期的脑损伤保护,如重组组织型纤溶酶原激活剂(t-PA)仅适合于急性期恢复脑供血等。尚不能对中风引起的长期神经功能障碍起到有效的治疗和恢复作用。因此,寻找能有效恢复损伤后亚急性其和慢性期神经功能的治疗方法,药物或保健食品意义都非常重大

并且 在我国,海参一向被视为药食两用的海产佳品,其中尤以剌参为佳。刺参广泛应用于年老体弱者,记忆力减退着,中风患者术后以及神经退行性疾病患者的保健和恢复。可见刺参对预防神经衰退,增强和恢复神经组织功能发挥积极作用,且食用刺参没有副作用。所以,深入研究刺参活性成分的药理作用对发挥刺参在维护人民身体健康方面具有重要的意义,同时也为刺参产业的发展起积极的作用。本研究从刺参体壁中分离获得具有药理活性的刺参多糖,探讨其对神经细胞的作用方式及其作用机制。 实验方法： 1.刺参多糖的分离纯化、活性筛选和理化性质鉴定 实验采用为蛋白酶/胰蛋白酶双酶解法,乙醇沉淀获得粗多糖,大孔吸附树脂脱色,用DEAE-sepharose阴离子交换柱分离,获得A、B、C、D四个多糖组分,用Sephacryl S-200凝胶进一步春华并脱盐。将分离获得的组分分别用神经干细胞球迁移实验(HS-3活性最好)和星形胶质细胞活化进行活性筛选(HS-4活性最好)。选取有活性的单一糖组分进行理化性质鉴定，采用HPLC法做纯度检查，自动旋光仪检测比旋光度，苯酚硫酸法检测总糖含量，硫酸咔唑法检测糖醛酸含量,明胶BaCl2法检测硫酸根含量, Bradford法检测蛋白质含量,凝胶色谱法检测多糖分子量。 2、HS-3促进神经干细胞球迁移作用研究。 本实验从孕14.

95±10.05岁。其中肝郁痰凝证95例,占80.51%,冲任失调证13例,占11.02%,正虚毒炽证10例,占8.47%。 经统计学分析,Her-2阳性乳腺癌的导管内癌、淋巴结转移情况、年龄、TNM临床分期在乳腺癌中医辨证分型的分布,差异具有统计学意义(P0.05)。 结论： 年龄、TNM临床分期,导管内癌、淋巴结转移情况与Her-2阳性乳腺癌中医辨证分型存在相关性,可作为Her-2阳性乳腺癌中医辨证分型的影响因素。其中,在Her-2阳性乳腺癌三组中医辨证分型中,冲任失调证的年龄较大,肝郁痰凝证的年龄较小,正虚毒炽证主要集中在41-60岁之间；正虚毒炽证的TNM分期较其它两组分期更晚；肝郁痰凝证中导管内癌阳性率最高,冲任失调证次之,正虚毒炽证最低；正虚毒炽证的淋巴结转移阳性率最高,肝郁痰凝证次之,冲任失调证最低。

病理组织学分级,ER、PR、Ki-67的表达状态,小叶内瘤变、淋巴管血管侵犯、微钙化灶的有无与Her-2阳性乳腺癌中医辨证分型无相关性,不能作为Her-2阳性乳腺癌中医辨证分型的影响因素；
背景： 随着分子靶向药物在临床中的应用，肿瘤对药物的耐受成为制约其疗效的重要因素，而对于临床试验的药物，药物耐受更是导致其失败的重要原因之一。肿瘤耐药机制研究成为肿瘤生物学和治疗学的重要领域。磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)家族成员参与多种细胞信号通路，调控着众多肿瘤发生发展中至关重要的生物学过程，包括细胞生长、存活、增殖、血管生成、迁移和转移等，且PI3K通常以异常活化的形式存在于人类许多肿瘤中，因而PI3K是个具有巨大潜力的药物治疗靶点。其中PI3K亚型的扩增和突变是导致该信号通路过度活化的重要原因，多个靶向性候选药物正处于积极的临床研究中。PI3K处于庞大的细胞信号传导网络中，与多个信号通路存在交互通话，持续给药后很可能产生获得性耐药，所以前瞻性的研究靶向PI3K抗肿瘤药物耐受机制具有重要的意义，不仅能够为可能出现的临床耐受提供应对措施，还能指导PI3K抑制剂的合理使用。 确认细节 目的： 本课题旨在构建对PI3K亚型选择性抑制剂耐受的人乳腺癌细胞SKBR3，探索靶向PI3K抗肿瘤药物产生获得性耐药的潜在分子机制。寻找基于耐药机制的用药策略，为指导PI3K抑制剂合理应用提供理论与实验依据。 Raf 抑制剂 方法： 以本实验室发现的PI3K亚型选择性抑制剂CYH33为工具化合物，在体外采用低浓度逐步加量诱导法作用于人乳腺癌细胞SKBR3，建立CYH33耐药细胞株SKBR3/CYH33。SRB法检测耐药细胞对各种抗肿瘤化合物的敏感性。计算耐药指数。观察并记录亲本和耐药细胞的形态学变化。采用细胞计数法进行细胞增殖曲线绘制和群体倍增时间测定。流式细胞术（FCM）检测亲本和耐药细胞的大小和周期分布。高效液相色谱法检测进入亲本和耐药细胞内CYH33的浓度。采用mRNA微阵列分析筛选出SKBR3及SKBR3/CYH33细胞中差异表达的mRNA。选取与PI3K/mTOR信号通路关系密切且mRNA表达水平差异大的若干个基因，应用实时荧光定量PCR技术进行验证；Western

blotting方法检测亲本和耐药细胞中PI3K下游主要效应分子对CYH33的响应，考察信号通路的改变是否介导细胞耐药。基于耐药机制，采用联合用药方法提高耐药细胞对CYH33的敏感性。实验数据以平均数±标准差（Mean±SD）表示，采用Microsoft excel软件进行统计分析，组间差异采用t检验，统计结果以P>0.05表示差异无统计学意义，P<0.05表示差异有统计学意义，P
目的：PTEN/PI3K/Akt信号通路在肿瘤发生、发展中的重要作用已受到越来越多的重视，该通路上基因的表达已被证实可成为预测肺癌、子宫内膜癌等肿瘤预后的重要标志。随着我国生活水平的提高，结肠癌发病率逐年上升，故对结肠癌的诊断、治疗及预测预后愈发重要。目前对于结肠癌组织中PTEN/PI3K/Akt通路的研究相对较少，因此本实验通过对于结肠癌及正常结肠组织中PTEN/PI3K/Akt信号通路上PTEN及PI3K表达的分析，讨论PTEN、PI3K与结肠癌各临床病理因素的关系，PTEN、PI3K在结肠癌中表达的差异以及两者的表达与结肠癌预后的相关性，探讨PTEN、PI3K在结肠癌的发生、发展、预后及临床个体化治疗中的作用。

方法：1.选取2008年1月-2011年12月大连医科大学附属第一医院外科术后病理证实的结肠癌组织石蜡标本45例。45例术后结肠癌组织石蜡包埋标本中42例可进行免疫组化实验，具备完整临床病例资料，可纳入实验组。实验组患者术前未进行任何抗肿瘤治疗，术后均接受FOLFOX方案化疗8-12周期，共完成408周期，平均完成10.72个周期。其中左半结肠者30例，右半结肠者12例；男性患者32例，女性患者10例；肿瘤>5cm者21例，≤5cm者21例；年龄37岁-75岁，平均年龄50.5岁，>50岁者37例，≤50岁者5例；高分化7例，中分化21例，低分化14例；有远处转移17例，其中肝转移13例，肺转移3例，腹膜转移1例，无远处转移25例；有淋巴结转移23例，无淋巴结转移19例；未出现化疗副反应不可耐受的病例；随访时间为手术日期至患者复发日期，末次随访时间为：2013年5月。对照组设为42例正常结肠组织。2.检测实验组及对照组中PTEN及PI3K的表达用免疫组织化学二步法。3.统计学分析：将实验数据经SPSS18.0软件进行统计学分析。采用χ2检验分析PTEN、PI3K的阳性表达率与结肠癌临床病理因素的关系及两者不同表达与化疗毒副反应的关系。采用Spearman秩和检验分析PTEN与PI3K在结肠癌中的不同表达有无相关。采用Kaplan-Meier法分析PTEN、PI3K的不同表达与疾病进展时间（TTP）的相关性，用Log-rank检验比较PTEN、PI3K不同表达者的中位TTP差异。检验水准采取双尾α=0.05，P GSK2656157供应商 0.05），与肿瘤分化程度、淋巴结转移、远处转移、肿瘤分期相关（P 0.05）。 3.42例结肠癌组织中，PTEN阳性表达但PI3K阴性表达为9例，PI3K阳性表达但PTEN阴性表达为13例，PTEN及PI3K同时阳性表达为14例，PTEN、PI3K同时阴性表达为6例。两者的表达呈显著负相关（r=-0.325，P=0.0230.05）。 5.42例结肠癌患者中PTEN阳性表达者的中位TTP为22.17个月，阴性表达者的中位TTP为12.25个月，前者明显高于后者且有统计学意义（χ2=21.429，P=0.0000.05）。 结论： 1.

5％琼脂糖凝胶电泳后，成像分析。 Western blot：收集转染组和对照组细胞，提取总蛋白，进行SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳，转膜。经凝胶成像系统采集，进行灰度值测定，以β-actin为内对照，计算Survivin的相对表达量。 MTT比色分析法和Annexin V-FITC／PI双标记流式细胞术检测其对T47D细胞增殖和凋亡的影响。

(3)收集转染组和各对照组细胞，提取总蛋白，Western blot检测对JNK信号通路关键分子MKK7-JNK1／2-c-Jun蛋白表达的影响。 结果 (1)49例乳腺癌中Survivin蛋白表达率为71.6％，浸润性导管癌阳性表达率最高(75.6％)，其次为导管内癌(58.5％)、重度非典型增生(55.6％)，中度非典型增生(36.4％)。轻度非典型增生(16.7％)。其中浸润性导管癌阳性表达率显著高于中度非典型增生病例。JNK1／2在乳腺癌中高表达率为69.4％，在浸润性导管癌和导管内癌中阳性高表达率相近，分别为70.3％和66.7％，依次略高于重度非典型增生(55.6％)、中度非典型增生(45.5％)和轻度非典型增生(33.3％)。在组织学Ⅰ级病例中JNK1／2高表达率为83.1％，高于在组织学Ⅱ级和Ⅲ级中的表达率。两者的阳性表达与有无淋巴结转移无明显关系。统计学分析表明两种蛋白在乳腺癌中表达有一定的相关性。 selleck化学药品 (2)反义Survivin寡核苷酸转染T47D细胞，转染后Survivin mRNA和蛋白表达均下调(分别下调了57.9％和35.0％)，P＜0.05。MTT分析，转染组细胞生长抑制率高于空白对照组。流式细胞术检测发现，转染反义Survivin后，T47D细胞的凋亡率明显增加。 (3)反义Survivin转染T47D细胞，转染后除了下调Survivin的蛋白表达外，MKK7、JNK1／2和c-Jun蛋白的表达也有不同程度的降低。结论 (1)Survivin和JNK1／2在乳腺癌及导管上皮非典型增生病变中均有表达，且两者在乳腺癌中的表达具有一致性。 (2)反义Survivin可下调乳腺癌T47D细胞Survivin mRNA和蛋白的表达，并诱导T47D细胞凋亡，抑制其增殖。 (3)反义Survivin可下调乳腺癌T47D细胞JNK信号通路关键分子的表达。
背景：糖尿病血管病变严重，发病年龄轻，进展快，累及范围广，并且伴有严重的侧支动脉发育受损，是造成糖尿病死亡的主要原因。内皮祖细胞(EPC)是骨髓干细胞的一种亚群，是血管内皮细胞的前体细胞，不仅在血管新生中作用显著，也有强烈的内皮保护作用。成年人体内存在骨髓内皮祖细胞(BM-EPC)和循环内皮祖细胞(circulating EPC)，后者又具有两种亚型，循环早期内皮祖细胞(early EPC)和循环晚期内皮祖细胞(late EPC)。研究发现，无论是1型还是2型糖尿病，其内皮祖细胞的增殖、黏附、整合入血管结构以及成血管能力均显著下降，糖尿病血管病变与其内皮祖细胞功能不全密切相关。然而糖尿病影响内皮祖细胞功能的机制、糖尿病对不同来源内皮祖细胞功能影响是否存在差别、内皮祖细胞移植是否会改善高糖环境下缺血心肌的灌注等远未明确。

目的：1．探讨BM-EPC和late EPC的生物学特征差异。2．探讨高糖、高胰岛素对体外培养的BM-EPC和late EPC增殖以及血管内皮细胞生长因子(VEGF)和碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)mRNA表达的影响。3．探讨四氧嘧啶诱导的糖尿病对兔BM-EPC和late EPC集落形成能力以及增殖和黏附功能的影响。4．探讨糖尿病来源的BM-EPC和late EPC心肌内移植对四氧嘧啶诱导的糖尿病兔急性心肌梗死的修复作用。 方法：1．分别抽取健康兔骨髓4ml和外周血10ml，采用淋巴细胞分离液分离单个核细胞，在含有VEGF、bFGF、IGF、EGF的DMEM／DF12或M199培养液中培养BM-EPC和late 一般 EPC；流式细胞仪检测两种细胞的细胞表面标志CD14、CD34、CD45、CD54、CD105、CD106、CD133、KDR和vWF的阳性率；激光共聚焦显微镜检测两种细胞吞噬ac-LDL以及结合UEA-1的能力。2．收集健康兔来源的P2代BM-EPC和late 那个 EPC，分为5组：对照组(5.5mmol／l葡萄糖)，glucose11组(11mmol／l葡萄糖)，glucose30组(30mmol／l葡萄糖)，ins100组(100nmol／l胰岛素)，ins1000组(1000nmol／l胰岛素)，采用不同浓度的葡萄糖和胰岛素刺激。MTT法检测刺激48小时和96小时后两种细胞的增殖能力。RT-PCR法检测两种细胞在接受高糖、高胰岛素刺激96小时后VEGF和bFGF

mRNA表达的水平。3．四氧嘧啶诱导兔糖尿病模型后4周，培养糖尿病组(n=6)和对照组(n=6)动物BM-EPC和late EPC。分别检测原代培养的两组BM-EPC和late EPC集落形成数，以MTT法检测细胞增殖，并检测细胞对纤维连接蛋白的黏附能力。4．四氧嘧啶诱导糖尿病模型后将动物分为对照组(n=8)，骨髓内皮祖细胞移植组(n=8)和循环晚期内皮祖细胞移植组(n=8)。糖尿病造模6周后结扎动物前降支造成急性心肌梗死模型，之后于对照组心肌内注射M199培养液200μl，骨髓内皮祖细胞移植组注射BM-EPC 5×10~6，循环晚期内皮祖细胞移植组注射late EPC 5×10~6。以激光共聚焦显微镜观察移植细胞的分布；以Masson三色染色法检测细胞移植后心肌纤维化面积；以Ⅷ因子免疫组化法标记毛细血管，计算毛细血管密度；以心脏超声观察心功能的改变；以实时定量PCR检测VEGF和bFGF的表达。 结果：1．BM-EPC与late EPC CD14，CD54，CD105，KDR，vWF阳性率无差异(P＞0.05)；BM-EPC CD45，CD133阳性率高于late EPC(P＜0.05)；BM-EPC的CD34和CD106阳性率低于late EPC(P＜0.05)；两种细胞都能吞噬ac-LDL并结合UEA-1，吞噬ac-LDL的能力相当(P＞0.05)。2．高糖刺激48小时对BM-EPC增殖功能无明显影响(P＞0.05)，刺激96小时后11mmol／l的葡萄糖促进BM-EPC的增殖(P＜0.05)，而30mmol／l葡萄糖与对照组无明显差别(P＞0.05)。高糖刺激48小时后，随着葡萄糖浓度的增加，late EPC增殖能力逐渐减弱(P＜0.05)；刺激96小时后葡萄糖仍呈浓度依赖性抑制late EPC增殖，glucose11组增殖能力较对照组明显下降(P＜0.05)，glucose30组不但较对照组(P＜0.01)也较glucose11组(P＜0.05)明显下降。胰岛素刺激48小时可以促进BM-EPC的增殖，ins100组和ins1000组细胞增殖均较对照组增高(P＜0.05)；而随着培养时间的延长胰岛素的促增殖作用则逐渐减弱(P＞0.

通过分析不同参数下使用水热法制备出的掺锶种植体表面的表征,推导掺锶纳米表面形成的机理。 2.通过体外细胞实验,研究掺锶种植体和非掺锶种植体对前成骨细胞、骨髓间充质干细胞增殖、分化以及体外成骨的影响。 也许 3.通过体内植入实验,研究掺锶和非掺锶种植体周围早期骨组织形态学改变及对骨髓间充质干细胞行为的影响。 研究方法： 1.根据不同的Sr(OH)2水热液浓度、水热温度、时间制备出一系列掺锶二氧化钛种植体表面。使用扫描电镜、透射电镜、X射线衍射、X射线光电子能谱分析、接触角等方法分析掺锶二氧化钛种植体表面的表征。 2.在掺锶种植体和非掺锶种植体表面培养前成骨细胞(MC3T3-E1)及骨髓间充质干细胞(BMSC),一定时间点下检测增殖能力、粘附能力、碱性磷酸酶(ALP)活性、骨钙素(OC)释放、关键成骨基因表达、钙盐沉积量来评价体外细胞在不同表面的增殖和分化能力。 3.掺锶种植体和非掺锶种植体植入SD大鼠股骨干骺端,6天后取出,扫描电镜下观察种植体表面形貌,种植体周骨组织进行HE染色及Stro-1免疫组化标记,分析早期骨愈合能力及不同种植体对骨髓间充质干细胞招募的影响。 结果： 1.水热液浓度、水热温度、时间可显著影响种植体表面形貌和表面物质成分、晶型。 2.掺锶种植体可释放锶离子长达一周以上,与非掺锶种植体相比可显著的促进细胞分化,上调成骨相关基因的表达,增加体外钙盐沉积(P
丝裂原激活蛋白激酶(MAPKs)也称为细胞外信号调节蛋白激酶(ERKs)是一种细胞质/细胞核内丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶,可以将细胞的胞外信号转导至胞内引起细胞反应的一类重要信号系统。在哺乳动物中,ERKs广泛参与细胞生长、分化、生殖、凋亡、应激等多种生理过程。在雄性生殖方面,ERKs参与调节精子发生、精子活力、超活化和顶体反应。为了探究ERKs在中华绒螯蟹生殖相关功能的调节作用,我们从成功中华绒螯蟹的精巢中获得了ES-ERK基因cDNA全长序列。ES-ERK基因的ORF为1098bp,编码365个氨基酸,相对分子量大小约为42KD。生物信息学分析发现ES-ERK蛋白具有ERK

ATM激酶抑制剂溶解度 MAPK蛋白激酶结构域,在结构域内存在ES-ERK蛋白特有的双磷酸化位点T-E-Y基序。系统进化树分析发现,ES-ERK蛋白首先与拟穴青蟹等非脊椎动物聚类,再与脊椎动物依次聚类,符合生物学进化的规律。实时荧光定量PCR和western blotting检测分析发现ES-ERK在中华绒螯蟹不同组织和不同发育阶段的精巢中均有表达。与其他组织相比,ES-ERK在精巢中的表达量相对较高。在不同发育阶段的精巢中,ES-ERK的表达量在精细胞期逐渐增加,在成熟精子期达到峰值。Western

blotting检测ES-ERK总蛋白有类似的表达情况,而磷酸化的ERK BI 6727分子重量 (p-ERK)则在精细胞期的表达量高于精子期。这表明,ES-ERK可能与精子成熟相关。利用免疫荧光检测发现,p-ERK和ERK均分布在中华绒螯蟹输精管内成熟精子的细胞核及头帽处。此外,我们用台盼蓝和苏木精曙红染色以确定中华绒螯蟹顶体反应过程(AR)精子的结构变化。整个顶体反应分为四个阶段：1)头帽凸起阶段；2)顶体囊外翻阶段；3)顶体管前伸阶段；4)完成顶体反应阶段。体外诱导发生AR后,我们发现ES-ERK在整个过程中均有分布,且ES-ERK由精子的细胞核移位到顶体管尖端。这个结果表明了ERK MAPK可能参与了中华绒螯蟹精子顶体反应的调节作用。
研究目的:观察在泡球蚴肝脏组织中Smad2和P38MAPK的表达,并分析二者在肝纤维化进程中的作用及其相互关系。研究方法:将20例经手术治疗的肝泡状棘球蚴病肝组织匹配后分为两类:邻近病变的组织(即病灶旁)与正常肝组织。利用IHC的方式检测Smad2及P38MAPK的表达情况。苏木素-伊红和马松染色,光镜下观察病理改变与肝纤维化程度。结果:1,泡球蚴肝脏病灶旁组织比正常肝组织纤维化程度高。2,Smad2和P38MAPK在病灶旁组织均比正常肝组织的表达明显较高。3,Smad2和P38MAPK无论在正常肝组织,病灶肝组织,还是整个肝组织中,其表达水平均与纤维化程度正相关;随着纤维化程度的加重,Smad2和P38MAPK的表达水平也都相应增加。4,病灶旁组织中Smad2和P38MAPK的表达成正相关。结论:1,泡球蚴肝脏病灶旁组织比正常肝组织纤维化程度明显严重。2,Smad2和P38MAPK均介入泡球蚴引起肝纤维化的机制中。3,在病灶旁组织中,P38MAPK参与调控对Smad2的正向调节。
MAPK

(Mitogen-activated protein kinases)信号通路是真核生物信号传递网络中的一条重要的途径。P38 MAPK信号通路是MAPK四条信号通路之一,由一系列丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶组成,具有响应炎症因子等外界刺激的重要作用。在哺乳动物的研究中已经证实,p38 MAPK信号通路在调控细胞周期、细胞分化、细胞凋亡、囊胚发育、炎症反应和肿瘤细胞的生长迁移等生理过程中发挥了重要作用。本文以中华绒螯蟹(Eriocheir sinensis)精巢和副性腺转录组数据中获得的p38基因部分片段为基础,采用RACE技术对5’端和3’端序列分别进行克隆,通过序列拼接首次获得了中华绒螯蟹p38基因(E.