7细胞系中,CADPE在早期抑制RANKL诱导的破骨细胞分化但是对M-CSF诱导的骨髓巨噬细胞细胞增殖和分化没有抑制作用。在分子水平上,CADPE抑制RANKL诱导的丝裂原活化蛋白激酶信号通路中ERK1/2, p38和JNK的蛋白磷酸化而对于NF-κB信号通路中IκBα的降解和p65的磷酸化没有影响。另外,CADPE抑制RANKL诱导的AP-1/c-Fos的入核和活性,并且过表达c-Fos阻止了CADPE对于破骨细胞形成的抑制作用。CADPE还能够抑制RANKL诱导的钙离子的振荡,降低破骨细胞形成相关基因的表达,包括NFATcl,

TRAP, cathepsin K和c-Src。为了检测CADPE对于破骨细胞活性在体内的效果,我们还检测了在卵巢切除诱导的骨质疏松模型中CADPE的效果,实验结果表明CADPE可以抑制卵巢切除导致的骨缺失。总之,我们的数据表明CADPE可通过抑制MAPKs和Ca2+-NFATc1信号通路来抑制RANKL诱导的破骨细胞形成和骨缺失。因此,CADPE成为治疗骨质疏松等破骨细胞相关疾病的新的候选药物。
乳铁蛋白是一种具有抗菌、抗病毒、免疫调节等多功能性铁结合糖蛋白，它广泛存在于哺乳动物乳汁中，一些外分泌物如泪液、滑液、唾液等也含有少量乳铁蛋白。近年来发现乳铁蛋白对骨生长和代谢的作用逐渐成为研究热点。本研究从新鲜牛乳中分离纯化得到乳铁蛋白，研究乳铁蛋白对成骨细胞增殖作用影响，考察乳铁蛋白对成骨细胞MAPK信号转导通路影响，同时研究不同加热处理参数对乳铁蛋白成骨活性影响及对成骨细胞MAPK信号转导通路影响，进而为乳铁蛋白在工业化生产中的应用工艺开发奠定一定的理论基础。 可能 本研究以新鲜牛乳为原料，通过脱脂、除酪蛋白、SP Sepharose Big Bead离子交换层析、Superdex200凝胶层析、超滤除盐浓缩及真空冷冻干燥等一系列过程，最终获得乳铁蛋白纯品。在纯化过程中对Superdex200层析条件进行优化，通过优化条件来分离纯化乳铁蛋白，得到乳铁蛋白分子量约为76kDa，乳铁蛋白纯度约为93.82%，得率为68.19%。通过差示扫描量热法测定得到的乳铁蛋白热变性温度为70.4℃和88.2℃。综合考虑乳铁蛋白热变性温度及实际生产加工中乳的热处理参数，设置以下加热参数：62-65℃加热处理30min、72℃加热处理10s、85℃加热处理10min、95℃加热处理10min对乳铁蛋白进行热处理，进而考察热处理对乳铁蛋白活性的影响。

从新生SD乳鼠中提取成骨细胞，通过形态观察、HE染色、碱性磷酸酶染色及矿化结节染色来鉴定成骨细胞。运用MTT法进行细胞增殖实验，比较不同加热处理乳铁蛋白对成骨细胞增殖影响。研究结果表明未加热乳铁蛋白能显著促进成骨细胞增殖，且在生理浓度（1-100μg/mL）范围内呈剂量依赖关系。与未加热乳铁蛋白对成骨细胞增殖作用相比，62-65℃加热处理低浓度乳铁蛋白（1、10、50μg/mL）对成骨细增殖作用无显著变化，而处理高浓度乳铁蛋白（1000、1250、1500μg/mL）则会显著降低对成骨细胞增殖作用；72℃加热处理乳铁蛋白对成骨细胞作用，作用24h时，低浓度（1、10μg/mL）对成骨细胞增殖作用显著提高，作用48、72h时则无显著变化，72℃加热处理高浓度乳铁蛋白（1000、1250、1500μg/mL），作用24h、48h会显著降低对成骨细胞增殖作用，作用72h则无显著作用；85℃加热处理和95℃加热处理浓度高于50μg/mL乳铁蛋白都会显著降低对成骨细胞增殖作用。 PLX3397体外 研究乳铁蛋白对成骨细胞MAPK信号通路影响发现：乳铁蛋白可通过介导ERK1/2、p38MAPK、JNK亚通路来促进成骨细胞增殖，通过介导ERK1/2提高ALP活性。不同加热处理乳铁蛋白则通过介导ERK1/2、p38MAPK、JNK亚通路抑制成骨细胞增殖和ALP活性。
目的: Fasudil 研究柚皮苷(Naringin)对人卵巢癌SKOV3细胞P38丝裂原活化蛋白激酶(P38mitogen activated protein kinases,P38MAPK)蛋白与细胞外信号调节激酶1/2(extra cellular signalregulated protein kinase,ERKl/2)蛋白表达的影响，初步探讨柚皮苷的抗肿瘤作用。 方法: 体外培养人卵巢癌SKOV3细胞,分为空白对照组、柚皮苷10μmol/L组、20μmol/L组、40μmol/L组、塞来昔布80μmol/L组。采用MTT比色法在48h测定不同浓度的柚皮苷对SKOV3细胞的抑制率，运用WesternBlot法测定培养48h后各组细胞中P38MAPK及ERK1/2蛋白表达水平。

结果: 1.MTT检测法显示，柚皮苷对卵巢癌SKOV3细胞生长具有明显的抑制作用。 2.WesternBlot法结果显示，与空白对照组相比，低浓度柚皮苷组（10μmol/L、20μmol/L）对SKOV3细胞P38MAPK蛋白表达的无明显影响，而40μmol/L柚皮苷及塞来昔布组可明显下调P38MAPK蛋白表达,具有统计学意义（P
目的:探讨姜黄素对DSS诱导的小鼠急性期UC的肿瘤坏死因子（TNF）-α、髓过氧化物酶（MPO）影响及其对UC治疗作用，同时检测结肠黏膜磷酸化p38MAPK及p38MAPK mRNA的表达，探讨p38MAPK信号通路在溃疡性结肠炎疾病中的机制，以及姜黄素对小鼠UC模型中p38MAPK通路的影响。方法：将健康60只雌性BALB/c小鼠，鼠龄6-7wk，体重16-20g，按随机数字表分为6组：正常组（A组）、模型组（B组）、地塞米松干预组（C组：1.5mg/kg.d）、姜黄素低剂量干预组（D组:姜黄素15mg/kg.d）、姜黄素中剂量干预组（E组：姜黄素30mg/kg.d）、姜黄素高剂量干预组（F组：姜黄素60mg/kg.d），每组10只。正常组自由饮水，其余各实验组小鼠均给予5％DSS溶液连续7d自由饮用，并在造模第一天同时开始腹腔注射给药，姜黄素低、中、高剂量干预组分别按上述剂量给药，正常组注射等体积生理盐水，模型组注射等体积的2.

tM的SB431542,RA组的DMEM完全培养基中含RA浓度分别为0.05、0.10、0.20、0.40 nM。分化培养4 d后观察细胞形态,流式细胞术检测细胞表面标志物CDl05和干细胞抗原1(Sca-1)的表达,以CD105+细胞和Sca-1-细胞的比例确定iPS和ES向MSC分化的程度。结果：1)小鼠ES和iPS在ESGRO-2i培养基里生长较好。ES分化4 MDV3100核磁共振 d后,对照组和SB431542组ES和iPS分化成内皮样细胞,在含有不同浓度RA的培养基中ES和iPS可有效分化为纤维状细胞；2)ES分化4

d后,SB431542组Sca-1+细胞比例显著高于对照组(P0.05)。在RA浓度为0.05、0.10、0.20、0.40 nM组中,ES分化的CD105+细胞比例显著高于对照组和SB431542组(P<0.05),Sca-1+细胞比例显著高于对照组(P<0.05),但与SB431542组比较显著降低(P<0.05),Sca-1+细胞比例显著高于对照组(P<0.05),但与SB431542组比较均显著降低(P0.05)。结论：利用RA可以促进多能干细胞向MSC样细胞分化,分化方法较为简单,分化周期较短,为多能干细胞向MSC样细胞的分化提供了一定的方法基础。背景：结节硬化复合物1(Tscl)和结节硬化复合物2(Tsc2)结合形成一个复合物,这个复合物可以通过哺乳动物雷帕霉素靶蛋白1(mTORC1)来调节细胞代谢和能量的稳定,TSC1和TSC2功能的丢失可引起mTORC1活性的升高,进而引起细胞体积增大、增殖能力增强。有研究称Tscl调节巨噬细胞M1/M2的极化,但对于Tscl对巨噬细胞的功能和自稳的精确调控作用尚不明确,本研究我们揭示Tscl对于调节巨噬细胞的生存、生长、迁移和吞噬功能具有十分重要的作用。材料与方法：我们将由Lysozyme启动子控制表达Cre重组酶的LysMCre鼠与Tsc1flox/flox鼠交配获得髓系细胞特异性的Tscl条件性敲除鼠(LysMCreTsc1flox/flox);PCR鉴定鼠的基因型,western blot鉴定鼠巨噬细胞Tscl蛋白的敲除情况；巨噬细胞的凋亡和生长由流式细胞术、RT-PCR进行检测；巨噬细胞精氨酸酶活化由QuantiChromTM arginase assay kit进行检测；M1和M2相关的基因的mRNA的表达由RT-PCT进行检测；巨噬细胞对T细胞活化的功能通过CD4+T细胞和巨噬细胞体外共培养3天后CD4+T细胞的活化进行鉴定；巨噬细胞的吞噬功能由VybrantTM

BTK pathway inhibitor phagocytosis assay试剂盒进行检测；巨噬细胞的迁移由Transwell实验进行检测；脾脏细胞和淋巴结细胞Foxp3的染色是通过Treg检测试剂盒进行。结果：Tsc1 KO鼠巨噬细胞凋亡增加、细胞变大,腹腔注射Rapa可部分抑制Tscl缺陷引起的巨噬细胞的凋亡和细胞生长；在稳定和炎症状态下,Tscl缺陷的巨噬细胞在稳定和诱导作用下M1和M2特性均较WT巨噬细胞高,抑制mTORC1部分逆转了Tscl缺陷引起的巨噬细胞的M2和M1的变化；Tscl缺陷的巨噬细胞CCR2和CCR5趋化受体表达降低、迁移能力下降、趋化因子升高,抑制mTORC1部分逆转了Tscl缺陷引起的巨噬细胞的趋化因子和趋化受体的变化；另外,Tscl缺陷的巨噬细胞的吞噬能力和产生活性氧(ROS)的能力增加；与Tsc1缺陷的巨噬细胞共培养的CD4+T细胞的增殖和活化功能减弱。结论：1)Tscl促进巨噬细胞的生存、抑制巨噬细胞的凋亡,并且这两种作用是与]mTORC1的活性有关。CD71和CD98可能参与了Tsc1调节的巨噬细胞的生长；2)Tsc1促进巨噬细胞M1和M2的特性,Tsc1缺陷的巨噬细胞在稳定状态下,分别增高了M1和M2的特性。在LPS和IL-4刺激下,Tsc1缺陷的巨噬细胞分布增高了M1和M2的极化特性；3)Tsc1促进巨噬细胞的迁移,Tscl缺陷的巨噬细胞的CCR2和CCR5的趋化受体表达降低,CCL2趋化引起的迁移能力降低。另外,Tsc1缺陷的巨噬细胞趋化因子表达升高。Tscl抑制巨噬细胞的吞噬和ROS的产生,促进CD4+T细胞的活化；4)

Tscl KO鼠引起自发的淋巴组织增生性的疾病。脾脏和淋巴结增大,CD4+T细胞和CD8+T细胞活化严重。另外,鼠的体重没有明显的变化。
目的意义:放射性肺纤维化是临床胸部肿瘤放疗常见的并发症之一,也可发生于骨髓移植手术前的放疗预处理及其它意外照射,其主要特征为肺脏内纤维结缔组织增多,实质细胞减少,持续进展可致肺脏结构破坏和功能减退,乃至肺功能衰竭,严重威胁人类健康和生命。临床上放射性肺纤维化缺乏特异、有效的治疗措施,患者预后较差。因此研究并阐明放射性肺纤维化发生的规律与特征和分子机制,对于临床上预测放射性肺纤维化的发生和转归,寻找干预、治疗的手段有着极其重要的意义。研究表明,转化生长因子β-1(transforming selleck产品 growth factor-β,TGF-β1)是重要的促纤维化因子之一,在肺纤维化过程中调控成纤维细胞分裂、增殖及细胞外基质的沉积,促进纤维化的发生。然而TGF-β3在组织损伤修复中表现出了不同于TGF-β1的抗纤维化特性,但是目前缺少TGF-β3用于放射性肺纤维化干预措施的依据。本研究以雌性C57BL/6小鼠为实验对象,建立放射性肺纤维化模型,观察TGF-β3对小鼠放射性肺纤维化的影响,寻找TGF-β3在放射性肺纤维化中可能的调控机制,为临床放射性肺纤维化的预防和治疗提供新的线索。材料与方法:雌性C57BL/6小鼠(6-8周,20±2g)麻醉后固定于自制的照射板上,除胸部外其余部分用10cm铅砖防护,采用60Coγ-射线单次胸部照射,照射剂量为20Gy,照射源距3m,剂量率215c Gy/min。在照后4h照射组给予腹腔注射0.5ml生理盐水,TGF-β3组给予0.

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目的探讨MAPK(mitogen-activated protein kinases)信号通路在瑞芬太尼预处理减轻心力衰竭大鼠离体心脏缺血再灌注损伤中的作用及其机制。方法成年雄性SD大鼠,尾静脉注射阿霉素,制备慢性心力衰竭模型,通过随机数字表将72只模型大鼠分为9组:假手术组(sham,n=9),缺血再灌注组(IR,n=9),瑞芬太尼预处理组(RPC,n=9),ERK抑制剂PD98059+RPC组(RPD,n=9),p38抑制剂SB203580+RPC组(RSB,n=9),JNK抑制剂SP600125+RPC组(RSP,n=9)以及抑制剂对照组PD(n=6)、SB(n=6)、SP(n=6)。化…
研究背景严重烧伤又称“烧伤病”,它所带来的问题不只是皮肤的损伤,还引起全身各系统和各脏器代谢和功能的一系列变化。近年来,有人称烧伤为“一种创伤后炎症反应性疾病”(a

Cytoskeletal Signaling抑制剂 post-trauma inflarnmato- ry disease)。“反应性”是生物固有的特性,对于多细胞、多脏器、多系统的高级生物来说,位于深部的细胞无法直接接受外部环境的刺激,在很大程度上根据来自其它细胞的信息调整自身的反应。细胞与细胞之间的信息交流除了靠神经系统之外,还通过信号细胞释放的各种信号物质,当这些物质作为“配体”与靶细胞的受体相结合时,就能改变靶细胞的代谢和功能。受体后信号调控是指对配体受体结合后发生的…
目的:探讨P38MAPK在大鼠重症急性胰腺炎急性肺损伤发病机制中的作用,观察肺组织中炎症因子水平、血中内毒素、淀粉酶含量等相关指标的变化及中药清胰汤的影响,进一步明确清胰汤的作用机理。方法:健康SD大鼠随机分为假手术组、模型组、抑制剂组、清胰汤组。除假手术组外,其余三组大鼠经胰胆管逆行注入去氧胆酸钠复制大鼠重症急性胰腺炎急性肺损伤模型。柳制剂组为术前1h腹腔注射SB203580,1mg/Kg。清胰汤组于术前1h及术后清醒时灌胃,1ml/kg。术后24h采取标本做病理检查和各项指标检测。肺组织ICAM-1、P38MAPK的检测方法采用Western

AG-014699制造商 Blot法。肺组织TNF-a检测采用放免法。肺…
目的:观察p38MAPK信号通路抑制剂–SB203580对内毒素休克大鼠生物喋呤／NO表达的影响,并探讨 p38MAPK信号通路在生物喋呤诱生中的作用机制及意义。方法:采用内毒素休克模型,56只大鼠随机分为正常对照组(n=8)、内毒素休克组(n=32)和SB203580拮抗组(n=16),留取肝、肺、肾组织测定三磷酸鸟苷环水解酶I(GTP-CHI)与诱生型一氧化氮合酶(iNOS)mRNA的表达,同时测定血浆与相应器官中BH4、
目的动脉粥样硬化(AS)已公认是一种炎症反应性疾病,诱导型环氧合酶(COX-2)及CD40与其配体 (CD40L)参与AS进程的多种炎性因子调节。CD40L对COX-2表达影响的研究尚不多见,为此,我们观察了 rhCD40L刺激对U937细胞表达COX-2的影响,并从细胞内信号转导通路的水平探讨其潜在的机制。方法以终浓度为0．05、0．1、0．2、0．4μg／ml的rhCD40L分别刺激U937细胞;0．4μg／ml的rhCD40L分别刺激3、6、12、24h;RI:PCR及Westen blot分别检测 COX-2mRNA和蛋白表达,ELISA检测PGE2活性代表COX- 2酶活性。分…
目的探讨p38蛋白激酶对LPS诱导肺泡巨噬细胞活化的调控机制。方法分离培养肺泡巨噬细胞。设正常对照组、LPS刺激组、SB203580(p38蛋白激酶抑制剂)干预组、PDTC(NF-κB抑制剂)干预组和SB203580+PDTC干预组。分别采用免疫细胞化学和蛋白质印迹检测NF-κB、p38蛋白激酶和NF-κB 抑制蛋白(Ⅰ-κB)的表达。结果 LPS刺激肺泡巨噬细胞胞核NF-κB和p38蛋白激酶染色显著增强,胞核染色阳性细胞百分比分别由正常对照组的(7．34±1．33)％、(6．12±2．15)％上升到(38．52± 9．71)％、(35．20±8．51)％,而Ⅰ-κB的表达较正常对照组显…
目的探讨P38MAPK与iNOS在肾脏缺血预处理时两者的上下游关系,旨在阐明肾脏缺血预处理延迟保护的可能机制。方法选用180-220g雄性wistar大鼠60只． SB203580(P38MAPK特异性抑制剂),氨基胍(AG)(iNOS特
目的:乳腺癌是女性最普遍的恶性肿瘤,乳腺癌转移是造成患者死亡的主要原因,迄今为止乳腺癌转移的发病机理尚不清楚。我们前期建立了具有高转移倾向的乳腺癌

这个 LM—MCF-7细胞系。本文应用MLCK的特异性抑制剂 ML-7作用LM—MCF-7细胞,旨在进一步探讨ML-7在 LM—MCF-7细胞生长、浸润、运动和凋亡等方面的作用。此外,还应用多种激酶相关抑制剂,采用免疫荧光、免疫印迹等实验方法对上述作用的机制和相关信号传导途径进行了深入研究。方法:应用20 μmol／L ML-7作用于LM— MCF-7细胞,测定细胞生长曲线并应用MTT检测细胞的增殖变化,台盼兰染色检测细胞的死亡率,应用Annexin V…
目的观察红茶多酚对牛主动脉内皮细胞(BAECs)增殖的影响,并探讨其作用机制。方法用四甲基偶氮噻唑蓝(MTT)检测细胞增殖活性,用蛋白免疫印迹测定 p38丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)磷酸化表达。结果不同浓度红茶多酚对牛主动脉内皮细胞(BAECs)均有明显抑制作用,呈剂量时间依赖关系;红茶多酚(0.4mg/L)可以降低佛波酯(PMA)或血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)刺激的细胞增殖(P
目的探讨 p38激酶途径在严重烧伤后早期心肌胞质型磷脂酶 A_2(cPLA_2)表达及膜磷脂降解中的作用。方法将 Wistar 大鼠分为:正常组(8只)、单纯烧伤组(40只)、烧伤+SB203580 组(16只)和烧伤+等渗盐水组(16只)。各组设不同检测时相点,每时相点8只。后3组大鼠制成40%TBSA、Ⅲ度烧伤模型,后2组伤后按实验设计分别注射 p38激酶抑制剂 SB203580或等渗盐水。检测各组心肌 cPLA_2 mRNA 水平和膜磷脂含量变化。缺氧复合烧伤血清处理体外培养的大鼠心肌细胞, 观察 SB203580对其 cPLA_2 mRNA 水平的影响。结果单纯烧伤组大鼠伤后各时相点 …

1-DCN质粒纯化,酶切鉴定,又用脂质体介导法将其转染
肝癌是诊治困难、预后极差的一种恶性肿瘤,全球肝癌发病率、病死率均位居各肿瘤前列,转移复发是影响肝细胞性肝癌(human hepatocellular carcinoma,HCC)术后生存的最大障碍。肝癌的发生发展以及转移复发均是多因素参与的多环节的病理过程,传统的单基因研究模式限制了肝癌相关因素的研究发展。近年来迅速发展的蛋白质组学研究,能动态、整体、定量地考察疾病发生发展过程中全部蛋白质种类和数量的变化,对于探讨疾病机理、寻找疾病诊断的特异性标志物和药物治疗的靶标来说,是一种有效的高通量的研究模式,可获得一些传统手段无法得到的新蛋白标志物、新关键分子,极大地丰富诊断标志物的选择组合及复杂致病机理的全面阐明。运用该研究策略,本研究通过对转移和非转移人肝细胞性肝癌组织、肝癌与癌旁组织的全蛋白质组表达谱差异分析,筛选出一些有潜在应用价值的差异蛋白质,并对其中的差异分子HSP27在肝癌组织和肝癌细胞系中进行验证,同时采用RNA干扰技术以及与癌发生、侵袭等生物学特性有关的鉴定方法对HSP27进行了功能分析。

所以 第一部分 人肝细胞性肝癌组织转移相关的蛋白质组学研究 本部分的研究目的是应用双向凝胶电泳(two-dimensional electrophoresis,2-DE)结合基质辅助的激光解吸离子化—飞行时间质谱(matrix assisted laser desorption/ionization-time of flight mass spectrometry,MALDI-TOF-MS)等蛋白质组学技术,对临床和病理上均发现有转移的HCC组织和未发生转移的HCC组织的全蛋白质差异表达谱进行分析,筛查在转移过程中发挥重要作用的差异蛋白分子。

选择在临床和病理上提示有转移和未发生转移的肝细胞癌组织各6例,提取肝癌组织总蛋白,应用非线性pH3～10,长24cm的固定pH梯度的IPG胶条和12.5%的SDS-PAG进行双向凝胶电泳分离总蛋白,每一例样本均分别进行2次双向电泳以保证重复性,用Image Master软件对两组的全蛋白质组表达谱进行差异分析。结果在相同条件下,转移组(M组)平均检测到1102±56(n=12)个
目的:探讨p38和p130蛋白的增龄表达变化与SAMP10小鼠快速老化伴脑萎缩病理特征的相关性,以及“益气调血,扶本培元”针法延缓衰老,改善学习记忆障碍的可能机理。 点击此处 方法:采用westernblotting技术,以快速老化伴学习记忆障碍模型小鼠SAMP10为研究对象,以正常老化小鼠SAMR1为对照,观察R1与P10在2、4、6、8、10、12月龄阶段海马和皮层中p38、p130表达的增龄变化,以及“益气调血,扶本培元”针法对8月龄SAMP10海马和皮层p38,p130表达的影响。 结果:1.正常对照R1可见,p38和p130在海马和皮层的表达随增龄均呈平稳上升趋势。 selleck中国 2.在P10海马和皮层中,p38表达总体上随增龄呈显著波动上升趋势;p130表达总体上随增龄呈显著波动下降趋势。两种蛋白变化初始期为4～6月龄,并于随后月龄持续存在波动现象。这与P10渡过生长期(4～6月龄)后出现明显衰老表型在时间上比较吻合。此外,两种蛋白的变化在时间上具有同步性,且变化趋势相反。因此p130和p38的增龄变化可能存在某种联系,并可能与SAMP10快速老化伴脑萎缩的形成直接相关。

3.在相同脑区不同月龄间,p38、p130含量变化在R1表现为差异小,变化平稳;而P10表现为差异大,变化剧烈。2月龄时R1和P10在海马、皮层两种蛋白的含量上就存在显著差别,推测这是导致后期两品系生物学差异的原因之一。 4.8月龄P10与R1相比,p38在P10海马和皮层表达普遍增高;p130在海马有所增高,而皮层明显降低。“益气调血,扶本培元”针法可全部和部分改善两种蛋白在P10两个脑区的含量,使之接近R1对照的水平。非穴虽有类似的改善现象,但作用不明显。 结论:p38和p130蛋白可能直接参与了SAMP10快速老化伴脑萎缩的形成过程。“益气调血,扶本培元”针法可以这两种信号途径上的关键蛋白为作用靶点,有效调节两者在海马和皮层的异常表达,从而起到延缓衰老,改善认知障碍的作用。
脑血管疾病损伤的脑保护与促进康复,降低致残率,恢复受损的机体功能仍是神经科学的前沿问题。目前临床上已知作用途径的治疗药物未能使脑病致残率获得有效降低。而“九五”、“十五”数项国家攻关课题研究显示了中药方剂及方中有效组分对脑损伤保护具有一定作用。 目的: 客观评价中药丹酚酸A对脑缺血损伤的神经保护效应,初步探讨丹酚酸A保护神经元的作用机制、可能途径和相关靶点,为研制中药神经保护制剂提供科学依据。 方法: 采用在体和离体相结合的综合评价方法,复制/建立大脑中动脉阻塞模型和缺氧/复氧损伤的细胞模型;以神经功能评分、脑梗塞指数、脑含水量、脑组织形态学等为评价指标,在体考察了丹酚酸A对急性脑缺血损伤的保护作用;集成流式细胞术、酶联免疫(ELISA)、RT-PCR等细胞分子生物学先进技术,以细胞活力、乳酸脱氢酶(LDH)、细胞存活率(台盼蓝排斥法)、早期凋亡率(FCM)、电镜超微结构、神经特异性烯醇化酶(NSE)/神经生长因子(NGF)、致炎因子(IL-1 β)作为评价指标,先后评价了丹酚酸A对缺氧/复氧损伤神经元和星形胶质细胞的作用;在此基础上,制备了星形胶质细胞四种条件培养液,对不同条件下中药干预星形胶质细胞产生的保护效应进行了比较和验证;最后以IL-1 β——p38MAPK——Bax为线索,对中药丹酚酸A神经保护作用的可能途径和相关靶点进行了初步探讨。 结果: 1 丹酚酸A能够明显改善急性脑缺血大鼠的神经行为缺损症状,显著减小梗塞指数,减轻脑水肿,且低剂量组(2.

3%,接近半数抑制浓度(IC5o)。HE染色结果显示：云芝氯仿萃取物处理的肝癌HepG-2细胞,与对照组相比细胞间距增大,细胞变小、失去原有形态、细胞核皱缩、染色变深、细胞碎裂、可见凋亡小体,并目随着时间和剂量的增加凋亡程度越严重。DNA

查找更多 ladder方法检测结果显示,与对照组相比较,云芝氯仿萃取物低、中、高剂量组作用48h时HepG-2细胞DNA降解成DNA片段,并随着剂量增加,降解作用越明显。Western方法检测云芝氯仿萃取物作用HepG-2细胞48h后,用药组与对照相比,凋亡相关基因Bcl-2、Bax及Caspase-3蛋白表达均有显著性改变：其中Bc1-2蛋白表达显著下降(P<0.01),Bax、Caspase-3蛋白表达显著升高(P
类风湿性关节炎(rheumatoid arthritis，RA)是一种以多对称性关节炎为主要临床表现的慢性自身免疫功能障碍性疾病。关节滑膜炎症细胞浸润、血管新生增多、滑膜血管翳形成、软骨及骨组织侵蚀是RA的主要病理学特征。血管新生是产生和维持RA血管翳的必需条件，因此，抑制血管新生可能是治疗RA的一个新的靶点。本课题组前期体内实验研究发现穿山龙总皂苷可以减少胶原诱导性关节炎(collagen-induced arthritis，CIA)大鼠关节滑膜组织的新生血管数量，显著性下调血管内皮细胞生长因子(vascular endothelial growth factor，VEGF)及其受体的表达，进一步证明了抑制血管新生可以作为治疗RA的靶点，抑制血管新生是穿山龙总皂苷治疗RA的机制之一；在体外，IL-17联合TNF-α能够刺激大鼠滑膜细胞株RSC-364细胞分泌大量VEGF，此作用可以被核转录因子-κB(nucleartranscription factors-κB，NF-κB)特异性阻断剂PDTC部分阻断，说明NF-κB途径不是调控VEGF产生的唯一途径；并且在实验中证实穿山龙总皂苷能够抑制炎性因子诱导的RSC-364细胞VEGF的分泌。 本研究在前期对穿山龙总皂苷抑制血管新生作用的研究基础上，以胶原诱导性关节炎大鼠(CIA)和大鼠滑膜细胞株RSC-364细胞模型为研究对象，通过体内、体外实验观察穿山龙总皂苷对NF-κB p65、信号转导子和转录激活因子3(signal

NVP-BGJ398数据表 transducer and activator of transcription3，STAT3)及激活蛋白-1(activator protein-1，AP-1)表达的影响，进一步阐明穿山龙总皂苷通过抑制血管新生治疗RA的调控机制。 第一部分穿山龙总皂苷对CIA大鼠关节滑膜组织NF-κB p65、STAT3及AP-1表达的影响 目的： 通过观察穿山龙总皂苷对胶原诱导性关节炎(CIA)大鼠滑膜组织NF-κB p65、STAT3及AP-1表达的影响，深入探讨穿山龙总皂苷抑制类风湿性关节炎血管新生可能的信号转导通路作用机制。 方法： 健康清洁级Wistar大鼠100只，随机取24只做正常对照组，其余76只大鼠均建立CIA模型。将造模成功的72只CIA大鼠随机分为3组：CIA模型组、雷公藤组(阳性对照组)、穿山龙总皂苷组，每组24只。在初次免疫后第16d起，雷公藤组大鼠给予雷公藤多甙片(12mg·kg﹣1·d﹣1)灌胃，穿山龙总皂苷组大鼠给予穿山龙总皂苷(25mg·kg﹣1·d﹣1)灌胃，正常组和CIA模型组大鼠分别给予等体积溶媒(0.5%CMC)灌胃，各组连续用药时间均为35d。 分别于16d，23d，30d，37d，44d，50d观察各组大鼠关节炎指数(arthritisindex，AI)评分的变化情况；应用TransAMTMNF-κB p65活性检测试剂盒检测滑膜组织中NF-κB p65的DNA结合活性；免疫组织化学染色方法观察滑膜组织中STAT3蛋白的表达；原位杂交方法检测滑膜组织AP-1的两个亚单位c-fos和c-jun的mRNA表达水平；凝胶电泳迁移率实验(electrophoretic mobility shift assay，EMSA)检测滑膜组织核蛋白提取物AP-1的DNA结合活性。 结果： 1大鼠治疗前后不同时间点关节炎指数(AI)评分 大鼠初次免疫后14d逐渐出现足趾部及踝关节皮肤发红，轻度肿胀等关节炎症状。造模成功分组以后分别于16d，23d，30d，37d，44d，50d检测各组大鼠AI评分，CIA模型组大鼠AI值在不同时间点与正常对照组相比均有显著性差异(P＜0.01)；雷公藤组、穿山龙总皂苷组均可明显抑制CIA大鼠AI值(P＜0.01)；两治疗组之间比较无显著性差异(P＞0.05)。

2各组大鼠滑膜组织核蛋白提取物NF-κB p65的DNA结合活性 Epigenetics合成 Library体外 CIA模型组与正常对照组比较，大鼠滑膜组织核蛋白提取物中NF-κBp65的DNA结合活性显著增高(P＜0.01)；与CIA模型组相比，雷公藤组、穿山龙总皂苷组的NF-κB p65DNA结合活性均显著降低(P＜0.01)；两治疗组之间比较无显著性差异(P＞0.05)。 3各组大鼠关节滑膜组织STAT3蛋白的表达 STAT3免疫组化阳性产物黄色或棕黄色颗粒主要分布于细胞浆，少量在细胞核中。STAT3蛋白在CIA模型组大鼠关节滑膜中的表达与正常对照组相比显著增多(P＜0.01)；与CIA模型组相比，雷公藤组、穿山龙总皂苷组STAT3蛋白的表达均显著减少(P＜0.01)；两治疗组之间两两比较无统计学意义(P＞0.05)。 4各组大鼠关节滑膜组织中c-fos mRNA的表达 c-fos mRNA阳性信号主要分布于细胞浆，细胞浆显黄色或棕黄色颗粒为阳性反应。与正常对照组相比， CIA模型组大鼠关节滑膜组织可见到大量细胞浆染成棕黄色至棕褐色，c-fos mRNA的表达水平显著增多(P＜0.01)；与CIA模型组相比，雷公藤组、穿山龙总皂苷组c-fos mRNA的表达水平均显著减少(P＜0.01)；两治疗组之间无统计学意义(P＞0.05)。 5各组大鼠关节滑膜组织中c-jun mRNA的表达 c-jun mRNA阳性反应主要分布于细胞浆，细胞浆显黄色或棕黄色颗粒。与正常对照组相比， CIA模型组大鼠关节滑膜组织可见到大量细胞浆染成棕黄色至棕褐色，c-jun mRNA的表达水平显著增多(P＜0.01)；与CIA模型组相比，雷公藤组、穿山龙总皂苷组c-jun mRNA的表达水平均显著减少(P＜0.01)；两治疗组之间比较无统计学意义(P＞0.05)。 6各组大鼠滑膜组织核蛋白提取物AP-1的DNA结合活性 与正常对照组比较，CIA模型组滑膜组织核蛋白提取物AP-1的结合活性显著增高(P＜0.01)；与CIA模型组相比，雷公藤组、穿山龙总皂苷组的AP-1DNA结合活性均显著降低(P＜0.

The pathway for p38 MAP kinase phosphorylationis different from that of p44/42 MAP kinase,suggestingthat it piays a different role in the cellular response to IL-1β.
目的 :探讨p38MAPK在介导TNF α所致大鼠胶质瘤细胞C6凋亡中的作用。方法 :应用MTT法检测TNF α处理的C6细胞的增殖活性 ,采用透射电镜和流式细胞仪观察凋亡的发生 ,应用SABC法和Westernblot检测p38MAPK的表达 ,应用流式细胞仪及SABC法观察 p38MAPK特异性抑制剂SB2 0 2 1 90对TNF α诱导C6细胞凋亡的影响。结果 :TNF α(2× 1 0 5U/L)对C6细胞增殖的抑制率为 43 .75 % ,透射电镜下可见典型的凋亡细胞 ,流式细胞仪检测凋亡率为 37.5 % ,SABC法和Westernblot显示P38MAPK表达阳性 ;加入SB2 0 2 1 90后 ,其凋亡率为 7.0 % ,未见P38MAPK表达。结论 :TNF α能诱导C6细胞凋亡和 Compound C p38MAPK表达 ,p38MAPK的活化促进了C6细胞凋亡的发生
目的 研究离体肝脏缺血再灌注期间p38信号转导途径的激活对其损伤程度的影响。 方法 通过自行建立的兔离体肝脏缺血再灌注模型,将一定剂量的特异性p38丝裂原激活蛋白激酶(MAPK)抑制剂SB202190加入到保存液中,根据原位灌注液及保存液中加入SB202190的剂量再将离体肝分为A、B、C、D4组。分别于冷保存前、冷保存末及再灌注5、10、15、30、60、120

min获取离体肝组织及受体兔静脉血液标本。分别应用免疫印迹杂交和免疫沉淀法测定离体肝组织磷酸化p38M A P K的活性。用全自动生化分析仪测定离体兔肝功酶学含量;并测定再灌注120 min内的胆汁分泌总量。 结果 在正常肝组织中p38 MAPK即有一定的基础活性;经冷保存后有一定的升高,再灌注10 min时达到峰值,然后逐渐下降,至再灌注120 min时降低至正常水平,而在冷保存液中加入SB202190后,再灌注期间p38 MAPK的活性受到显著性抑制,其中B、C、D组p38 MAPK活性峰值仅分别为A组的53.9％,12.8％,9.6％;再灌注期间各组受体肝酶学水平均表现为A>B>C>D,而胆汁分泌量表现为AObjective:

To study the role of p38MAPK in mediating TNF-α-induced apoptosis of rat glioma cell line C6. Methods: Effect of TNF-α on the proliferation of C6 cells was determined by MTT assay. The TNF-α induced apoptosis was detected by transmission electron microscopy and flow cytometry. The expression of p38MAPK was detected by SABC method and Western-blot. The effect of SB202190,

a specific inhibitor 时间 of p38MAPK, on TNF-α-induced apoptosis was observed by flow cytometry and SABC method. Results: Inhibitory rate of TNF-α(2×105 U/L) on C6 cells was 43. 75% . In the TNF-α treated group, apoptotic cells were observed by transmission electron microscopy and the apoptotic rate was 37. 5% by flow cytometry. p38MAPK positive signals were detected by SABC method and Western-blot. In the SB202190 treated group, the apoptotic rate was 7. 0% and no p38MAPK signals were found. Conclusion: Apoptosis of C6 cells and expression of p38MAPK can be induced by TNF-α. The activation of p38MAPK promotes the apoptosi
AIM:Activated pancreatic stellate cells(PSCs)have beenimplicated 可能 in the pathogenesis of pancreatic fibrosis andinflammation.Primary PSCs can be subcultured only severaltimes because of their limited growth potential.A continuouscell line may therefore be valuable in studying molecularmechanisms of these pancreatic disorders.The aim of thisstudy was to establish a cell line of rat PSCs by spontaneousimmortalization.METHODS:PSCs were isolated from the pancreas of maleWistar rats,and conventional subcultivation was performedrepeatedly.Telomerase activity was measured using thetelomere repeat amplification protocol.Activation of transcriptionfactors was assessed by electrophoretic mobility shift assay.

5mmol/L glucose)、高糖组(HG,25mmol/L glucose)、高糖+10mmol/L肌肽组、高糖+20mmol/L肌肽组、高糖+40mmol/L肌肽组、高糖+SB组(HG+10μmol/L SB203580)、高糖+PD组(HG+10μmol/L PD98059)。ELISA检测胶原Ⅰ、Ⅲ的含量,Western blot检测TGF-β1、p-p38 MAPK和p-ERK(1/2)等蛋白的表达。结果:与正常糖组相比,高糖组中胶原Ⅰ和胶原Ⅲ含量增加(P<0.01);TGF-β1、p-p38和p-ERK等表达增加(P<0.01);与高糖组相比,高糖+肌肽组中胶原Ⅰ、Ⅲ、TGF-β1、p-p38、和p-ERK等均降低(P<0.05);高糖+SB组和高糖+PD组中胶原Ⅰ、Ⅲ表达减少(P<0.05)。结论:肌肽对心肌成纤维细胞中胶原生成具有抑制作用,且通过MAPK通路实现。
慢性疼痛中,神经元-脊髓小胶质细胞间的信号分子可以激活脊髓小胶质细胞,而激活的脊髓小胶质细胞可以释放多种与慢性疼痛有关的活性物质。实验研究表明,脊髓小胶质细胞表面受体的上调及细胞内激酶的激活在细胞的激活和慢性疼痛的发生和发展中起重要作用。
目的检测巨噬细胞炎性蛋白-1α(MIP-1α)和基质金属蛋白酶-9(MMP-9)表达在Ⅲ型前列腺炎疾病中相关性及作用,探讨两者在Ⅲ型前列腺炎中表达的意义。方法采用双层夹心抗体ELSIA法检测MIP-1α、MMP-9在15例Ⅲa型、20例Ⅲb型前列腺炎患者及10例健康男性前列腺液中的表达情况。采用t检验分析各组之间差异,Spearman法了解MIP-1α、MMP-9与慢性前列腺炎疼痛症状评分、白细胞计数之间的相关性。结果

MIP-1α在Ⅲa组、Ⅲb组及对照组表达分别为(148.11±11.47)、(144.09±7.96)和(117.61±16.52)pg/mL;MMP-9在Ⅲa组、Ⅲb组及对照组中的表达分别为(429.17±58.25)、(435.01±65.96)和(270.06±78.78)ng/mL。MIP-1α水平与MMP-9成正相关;两者与白细胞计数无明显相关;MIP-1α、MMP-9表达与NIH-CPSI疼痛评分成正相关。结论

Proteasome抑制剂 Proteases抑制剂 MIP-1α和MMP-9参与了Ⅲ型前列腺炎的发生发展,并且可能与慢性前列腺炎疼痛的发生相关,MIP-1α和MMP-9可能成为Ⅲ型前列腺炎的临床诊断、分型、随访疗效的重要指标。
胰蛋白酶及蛋白酶激活受体-2(PAR-2)在多种肿瘤细胞中异常表达,且与肿瘤细胞的生物学特性及恶性程度密切相关。PAR-2激活后可通过多种信号转导途径导致细胞增殖和侵袭转移。PAR-2和胰蛋白酶可能成为肿瘤细胞生物学行为的新标志物,为临床恶性肿瘤的早期诊断和治疗提供一个新的方向。现全文对胰蛋白酶和PAR-2在恶性肿瘤调控途径中的最新进展作一全面的综述。
目的探讨N-乙酰半胱氨酸(NAC)对化疗所致骨髓抑制的改善作用。方法①体内实验:将C57BL/6j小鼠随机分为正常对照组、环磷酰胺(Cy)所致骨髓抑制模型对照组(ip给予生理盐水)以及模型+NAC 30,90和270 mg·kg-1组,每天1次,连续10 d。给药第4天一次性ip给予Cy 380 mg·kg-1制备骨髓抑制小鼠模型。造模后第1,2,3,4和7天,鼠尾静脉取血20μl检测外周血像,同时取一侧股骨骨髓,检测骨髓单个核细胞(BM-MNC)数目;造模后第1天,检测BM-MNC凋亡和细胞内活性氧(ROS)水平。②体外实验:C57BL/6j小鼠一次性ip给予Cy Selleckchem LY294002 380 mg·kg-1后第3天,取BM-MNC进行造血祖细胞培养,在培养体系中加入NAC 0.01,0.1,1和5 mmol·L-1,于第7～12天检测造血祖细胞粒红巨噬巨核系集落形成单位(CFU-Mix)、粒细胞巨噬细胞集落形成单位(CFU-GM)和红系爆式形成单位(BFU-E)数目,观察NAC体外对骨髓抑制模型小鼠造血祖细胞增殖分化的影响。结果①体内实验:与正常对照组相比,ip给予Cy后第1～4天,模型组BM-MNC和外周血白细胞(WBC)数目显著下降,造模后第7天仍未恢复正常。与模型组相比,造模第2天,NAC 270 mg·kg-1组WBC数目降低;其余各时间点,NAC各治疗组的WBC数目无明显差异,NAC 30和90 mg·kg-1组WBC最低值于造模后第4天出现。与模型组比较,造模后第1天NAC

30和90 mg·kg-1组ROS水平降低,BM-MNC凋亡率无明显差异;造模后第1～2天BM-MNC明显增加。②体外实验:与正常对照组相比,模型组造血祖细胞CFU-Mix,CFU-GM和BFU-E数目均明显降低;与模型组比较,NAC 0.1 mmol·L-1能够增加骨髓抑制小鼠骨髓造血祖细胞CFU-GM和BFU-E数目,但NAC 5 mmol·L-1减少模型小鼠CFU-GM,BFU-E和CFU-Mix数目。结论 NAC通过降低ROS水平对化疗所致骨髓抑制有一定的改善作用。
二氢青蒿素是青蒿素的重要衍生物,具有显著的抗疟作用。对多种肿瘤动物模型具有一定的肿瘤抑制作用,提示其具有抗肿瘤作用。二氢青蒿素的抗肿瘤作用机制可能与抑制肿瘤细胞增殖包括诱导肿瘤细胞周期阻滞和促进肿瘤细胞凋亡、抑制肿瘤新生血管生成以及抗肿瘤细胞侵袭和转移等有关。细胞内亚铁或亚铁血红素可能是二氢青蒿素抗肿瘤作用的直接靶点。由于二氢青蒿素具有广谱抗肿瘤作用、对正常细胞毒性小及对多药耐药细胞有效等优点,因此有可能被开发为新的抗肿瘤药物。
OBJECTIVE TO investigate the effect of high dose β-amyloid 1-42 oligomers(AβO1-42) on adult hippocampal neural stem/progenitor cells(NSC) in vitro.METHODSNSC was treated with AβO1-42(3-10 μmol·L-1) for 5 d.Measurements of cell proliferation were performed using a bromodeoxyuridine(5-bromo-2-deoxyuridine,BrdU) incorporation assay.

s-p38蛋白)。通过生物信息学对E.s-p38蛋白的功能域、二级结构、三维结构等进行了分析。E.s-p38蛋白有一个p38 MAPK的功能域(STKc_p38),是一个典型的丝氨酸/苏氨酸激酶,在其结构域内有ATP结合位点、底物结合位点、KIM docking位点、脂质结合位点等。通过多重比对发现不同物种的p38蛋白的氨基酸序列相似度较高,尤其在A-loop和T-G-Y基序上高度保守。系统进化树构建显示E.s-p38蛋白首先与虾蟹类等甲壳纲动物的同源蛋白聚为一类,然后依次和其他节肢动物聚类,与传统的分类学结果基本一致。在获得的E.s-p38基因的cDNA的基础上,使用RT-PCR和实时荧光定量PCR检测了E.s-p38基因在中华绒螯蟹不同组织内的表达情况,E.s-p38基因在各组织中普遍表达,但在肌肉、肝胰腺、肠、卵巢和精巢中表达较高。为了初步探明E.s-p38基因在中华绒螯蟹生殖中的作用,进一步检测了不同发育时期的精巢中该基因的表达水平发现,E.s-p38基因在精母细胞期、精细胞期和精子期的前期表达没有显著差异,在精子期的中后期表达水平显著上升,这种变化趋势与中华绒螯蟹性腺发育和交配繁殖期呈正相关,初步表明E.s-p38基因可能在中华绒螯蟹精巢发育和精子发生过程中发挥作用。在蛋白层面上,通过Western

Blot实验分析E.s-p38蛋白在中华绒螯蟹精巢不同发育阶段的表达情况。结果显示在精子发生过程中,Es-p38总蛋白表达量逐渐增加,而精细胞期的磷酸化Es-p38蛋白表达水平较精母细胞期与精子期高。利用A23187钙离子载体对中华绒螯蟹成熟精子进行体外诱导顶体反应实验,并通过台盼蓝染色技术计算体外诱导过程中精子的存活率等,通过苏木精／伊红染色技术获得中华绒螯蟹精子在顶体反应过程中所发生的一系列形态变化,保证后续实验的顺利进行。运用免疫荧光技术对处于顶体反应不同阶段的精细胞上的E.s-p38蛋白进行定位,并追踪其随顶体反应过程的进行分布位置如何发生迁移。通过实验我们发现,激活的E.s-p38蛋白主要分布于精子的细胞核和顶体帽部分,并且逐渐在顶体管前段堆积。证实p38 也许 MAPK信号通路可能参与中华绒螯蟹精子顶体反应过程中的调控。综上所述,本论文首次在中华绒螯蟹中证实了p38蛋白的存在,并且从基因与蛋白两个角度论述了p38在中华绒螯蟹精子顶体反应过程中可能发挥的重要作用。本文所取得的研究成果将为进一步探索MAPK信号通路在调控中华绒螯蟹雄性生殖领域的研究提供重要的参考。
目的:观察臭氧抗福尔马林炎性痛中p38/MCP-1信号通路的作用。方法:成年雄性sprague-dawley(SD)大鼠84只,体重250-300 g,测量其机械缩足阈值(MWT)和热缩足潜伏期(TWL)的基础值。随机分为空白对照组(C组)、炎性痛组(F组)、F+氧气组(FO2组)、F+臭氧组(FO3组)、F+p38抑制剂组(FSB组)、F+p38抑制剂溶剂对照组(FD组)、F+MCP-1中和抗体组(FM组)。炎性痛组:左足底掌部皮下注射5%福尔马林100μl。福尔马林注射后1 h,FO2组、FO3组患侧足底分别注射纯氧、臭氧(30μg/ml)50μl,FSB组、FD组、FM组鞘内分别注射p38抑制剂SB203580(10μl/rat)、D

以及 MSO(10μl/rat)、MCP-1中和抗体(10μl/rat、1μg/μl)。分别于福尔马林注射后1 h、2 h、4 h、24 h时测定大鼠患侧足机械缩足痛阈(MWT)和热缩足潜伏期(TWL),同时间点取脊髓腰膨大及L4-5背根神经节(DRG),同时用免疫组化(immunohistochemical,IHC)和Western Blot测定脊髓背角和DRG中MCP-1和P-p38含量。结果:1、组织病理学观察:与C组相比,福尔马林注射后1 h,F组、FO2组、FO3组、FSB组、FD组、FM组真皮组织排列紊乱,纤维组织疏松、断裂、炎性细胞浸润;给药后4 h、24 h,与F组相比,FO3组炎性细胞浸润明显降低,有新生成纤维细胞,FO2组、FSB组、FD组、FM组真皮组织排列紊乱,纤维组织疏松,炎性细胞浸润基本一致。2、大鼠痛阈的变化:福尔马林注射前,各组大鼠患侧足底MWT、TWL基础值无差别。与C组相比,建模后F组、FO2组、FO3组、FSB组、FD组、FM组MWT降低,TWL缩短(P<0.01);与F组相比,给药后4h、24h,FO3组、FSB组MWT显著升高,TWL明显延长(P0.05),FM组MWT明显升高,TWL明显延长(P0.05)。IHC与Western Blot结果一致。3.2、MCP-1:与C组相比,其他各组在福尔马林注射后,大鼠脊髓背角和DRG中MCP-1蛋白表达比C组有明显升高(P<0.01),FM组有明显降低(P
背景：绵羊肺腺瘤(OPA)是由绵羊肺腺瘤病毒(JSRV)引发的一种接触传染性肺脏肿瘤疾病。env基因是JSRV的癌基因,透明质酸酶2

(Hyal-2)是JSRV的作用受体。JSRV的囊膜蛋白(Env)转化NIH 一般 3T3细胞是通过其胞质尾(CT)直接激活信号通路；而Env转化上皮细胞,是先与其受体Hyal-2结合,进而激活下游细胞信号通路。目的：绵羊Hyal-2是JSRV Env诱导细胞转化的受体,研究绵羊Hyal-2与Env之间的相互作用,对于揭示JSRV致瘤机理具有重要意义。方法：1.采用绵羊Hyal-2基因真核表达质粒pDsRed-monomer-N1-Hyal-2转染TC-1细胞,经G418筛选、纯化,构建稳定表达绵羊Hyal-2的TC-1细胞系。在核酸水平及蛋白水平上分别利用RT-PCR方法和Western blot方法验证Hyal-2在TC-1细胞内表达的稳定性,并通过激光共聚焦显微镜来观察载体自带红色荧光来确定Hyal-2蛋白在细胞内的定位。2.采用pEGFP-C1-env瞬时转染TC-1细胞、TC-1-Hyal2细胞和NIH 3T3细胞。通过RT-PCR方法和Western blot方法验证Env在上述3种细胞内的表达,同样使用激光共聚焦来观察Env在上述3种细胞内的定位。3.转染pEGFP-C1-env后,通过荧光定量PCR和Western blot方法分别检测其对细胞中AKT、ERK和TERT表达量的影响。结果及结论：1.建立了稳定表达绵羊Hyal-2蛋白的TC-1细胞系,命名为TC-1-Hyal2。2.完成了pEGFP-C1-env真核表达质粒瞬时转染NIH 3T3细胞、TC-1细胞和TC-1-Hyal2细胞。3.转染pEGFP-C1-env后,TC-1-Hyal2细胞和TC-1细胞中AKT、ERK和TERT表达量均升高,并且在TC-1-Hya12细胞中的表达量比TC-1细胞中升高更显著。4.

5±10.6%;经10ng/ml TGFβ1预处理后,丝裂霉素对SGC-7901细胞的抑制率降为35.0±4.1%,二者间有显著性差异(反应细胞增殖情况OD490值的比较,均P＜0.05)。表明TGFβ1预处理可降低SGC-7901细胞对丝裂霉素的敏感性,诱导其对丝裂霉素耐药。表明TGFβ1能增强肿瘤细胞的耐药性。 2、运用Hoechst 33258荧光染色法及流式细胞术检测了TGFβ1处理前后SGC-7901细胞凋亡率的变化,结果发现TGFβ1处理对SGC-7901细胞的凋亡率无影响。 3、采用高通量的蛋白质组学技术,通过二维凝胶电泳技术分析经TGFβ1预处理的SGC-7901细胞和未处理的SGC-7901细胞的差异蛋白表达谱,结合基质辅助激光解析离子化飞行时间质谱技术初步鉴定差异蛋白,以初步探讨TGFβ1诱导SGC-7901细胞耐药的作用机制。比较两组细胞总蛋白的2-D图谱后,在相同的实验条件下,它们蛋白质点的分布十分相似,位置重复性分析表明TGFβ1处理SGC-7901细胞在等电聚焦(IEF)方向上的平均偏差为0.908±0.102mm,在垂直板SDS-PAGE电泳方向上的平均位置偏差为1.032±0.108mm;未处理SGC-7901细胞在IEF方向上的平均偏差为0.838±0.116

INCB024360化学结构 mm,在垂直板SDS-PAGE电泳方向上的平均位置偏差为1.075±0.168 mm。表明我们成功地建立了分辨率较高,重复性较好的TGFβ1预处理SGC-790l细胞和未处理SGC-7901细胞的二维凝胶电泳图谱。使用PDquest分析软件对TGFβ1预处理SGC-7901细胞和未处理SGC-7901细胞的各蛋白质点的表达丰度进行分析,我们发现30个差异点,随机选取2个差异点,经原位酶解和MALDI-TOF质谱分析测定它们的PMF,初步鉴定了其中的2个蛋白质点。部分候选的蛋白质差异表达水平经Western selleck blotting分析可以看出SGC-7901细胞经TGFβ1处理后GST-π,MDR1蛋白表达上调,这些结果与我们蛋白质组学的分析结果是一致的。 4、应用免疫组织化学方法检测TGFβ1、GST-π和MDR1在胃癌组织中的表达情况并分析其与临床病理参数间的关系。结果表明:TGFβ1、GST-π和MDR1的阳性信号主要在细胞浆。在76例胃癌组织中,TGFβ1、GST-π和MDR1的阳性率分别为75%、81.5%及61.8%,且三种蛋白的表达均与分化程度、浸润深度、淋巴结转移有关(P＜0.05),但与年龄和性别等无关(P＞0.05)。 5、利用Smad4 siRNA、MAPK通路特异性阻断剂处NSGC-7901细胞,然后分别检测GST-π、MDR1的表达水平,以期明确TGFβ1上调GST-π、MDR1表达的信号途径。结果表明:TGFβ1作用SGC-7901细胞后GST-π的表达水平明显上调,但经Smad4

siRNA及PD98059预处理后,其表达水平随之降低;而在SB203580及SP600125处理组GST-π的表达水平无明显变化,提示TGFβ1可能通过经典Smad通路及ERK途径诱导SGC-7901细胞GST-π的表达。而利用外源性TGFβ1处理胃癌细胞SGC-7901,探讨其对SGC-7901细胞MAPK通路的影响时亦发现,SGC-7901的p-ERK表达水平上调,这亦再次表明ERK通路在此分子事件中发挥了重要作用。同时本实验中,我们亦发现TGFβ1作用SGC-7901细胞后MDR1的表达明显上调,但在经SP600125及PD98059预处理后,其表达水平随之降低;而在SB203580及Smad4 siRNA处理组MDR1的表达水平无明显变化,这就提示TGFβ1可能通过JNK通路及ERK途径诱导SGC-7901细胞MDR1的表达。而利用外源性TGFβ1处理胃癌细胞SGC-7901,探讨其对SGC-7901细胞MAPK通路的影响时亦发现,SGC-7901的p-ERK、p-JNK表达水平上调,这亦再次表明ERK、JNK通路在此分子事件中发挥了重要作用。

四、结论 1、成功发现TGFβ1可诱导胃癌细胞耐药的发生,其部分机制可能与上调GST-π和MDR1的表达相关; 2、首次发现TGFβ1可分别通过经典Smad通路、ERK途径及JNK、ERK通路上调SGC-7901细胞GST-π和MDR1的表达。
随着社会经济发展和人们生活方式的改变,人类疾病谱正在发生变化,慢性肾脏病(CKD)已呈现流行特征,并成为21世纪全球性的公共卫生问题。CKD一旦发展为终末期肾脏病(ESRD),则必须依赖肾脏替代治疗(RRT),即血液透析、腹膜透析、或肾移植来维持生命,给患者家庭及社会带来沉重的经济负担和社会压力。因此,早期诊断及防治慢性肾脏病有着特殊重要的意义。研究表明,肾素—血管紧张素—醛固酮系统(RAAS),尤其是血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)在CKD的发生和进展中发挥重要作用。AngⅡ是RAAS系统最主要的效应分子,业已证实AngⅡ不仅通过改变肾小球血流动力学促进肾小球硬化,还可促进系膜细胞、内皮细胞和肾小管上皮细胞增生、生长因子表达及细胞外基质积聚。AngⅡ的作用是通过与Gq蛋白偶联的Ⅰ型血管紧张素受体(AT1受体)完成的,而AT1受体为跨膜糖蛋白,本身不具有酪氨酸激酶(此酶介导有丝分裂的细胞信号)活性,也不直接与酪氨酸激酶发生联系。本研究将深入探讨AngⅡ介导肾小球系膜细胞增殖及炎症介质的表达的信号转导机制,这不仅有助于加深人们对CKD发病机制的认识,同时也为未来CKD治疗策略的制定提供理论依据。 LEE011供应商 本研究包括两部分内容: 一、c-Jun氨基末端激酶介导血管紧张素Ⅱ诱导的人肾小球系膜细胞增殖及炎症介质表达 目的:AngⅡ可诱导体外培养的系膜细胞c-Jun氨基末端激酶(JNK)活化,但其活化后的生物学意义仍不清楚。本研究选用新型的JNK特异性阻断剂SP-600125,探讨JNK-c-Jun/AP-1信号通路在AngⅡ诱导的肾小球系膜细胞增殖及炎症介质表达中的作用。 方法:体外分离培养人肾小球系膜细胞,应用SP-600125预处理后加入AngⅡ刺激,应用Western Blot检测JNK、细胞外调节蛋白激酶(ERK1/2)和p38的活性以及c-Jun磷酸化;应用荧光素酶(Luciferase)活性检测法检测c-Jun转录活性及单核细胞趋化蛋白(MCP-1)启动子活性;凝胶电泳迁移率(EMSA)检测活化蛋白-1(AP-1)DNA结合活性;核酸酶保护法检测MCP-1 mRNA表达;ELISA检测培养上清中MCP-1、转化生长因子(TGF-β1)和纤维连接蛋白(FN)的分泌;~3H-胸腺嘧啶(~3H-TdR)掺入法和细胞计数法测定系膜细胞的增殖。 结果:1.

It involves the use of a microkeratome to create a thin corneal flap followed by excimer laser ablation of the corneal stroma and repositioning of the flap.However,complications are bound to occur when a surgical procedure is performed with increasing frequency.In some cases,serious complications such as keratectasia SB431542 occurred.Risk factors for corneal keratectasia include a thin cornea at

baseline,thick corneal flap,excessive ablation,irregular corneal thickness,diverse ablation rates,preexisting keratoconus or form fruste keratoconus,and high intraocular pressure(IOP)~[1].It is evident from incisional refractive surgery that the cornea is not mechanically inert.The mechanical environment of the central corneal tissue is also altered un-
大肠癌是世界第三大常见肿瘤,全球每年确诊约100万新发病例。同时大肠癌也是人类癌症第三位死因,每年有超过50 000人死于大肠癌相关疾病[1]。阿司匹林诞生于1899年,是一种历史悠久且临床应用最广泛最普通的解热镇痛药和抗风湿药。近年来,阿司匹林在多种肿瘤防治方面所起的作用被医学界广泛重视,尤其是在大肠癌防治研究中有诸多报道。本文就阿司匹林防癌抗癌作用的最新研究进展综述如下。
咖啡因(caffeine)是从茶叶、咖啡果、可可中提炼出的一种生物碱,适度地使用有兴奋解乏之功效。近年来,咖啡因能防治肿瘤的作用引起关注,如其作用机制进一步明确,临床效果进一步验证,将为防治肿瘤带来新的希望。在此介绍近年来咖啡因用于肿瘤防治方面的研究进展,特别是其在肿瘤治疗方面的研究情况。
正常细胞在环境中有害因素的持续刺激下转化为肿瘤细胞。然而,天然化学预防剂,如茶多酚(tea

NSC683864 plyphenols,TP)可以延缓这一过程。大肠癌是最常见的恶性肿瘤之一,发病率和死亡率呈逐年上升趋势。在大肠癌组织中,TP的主要活性成分表没食子儿茶素没食子酸酯[()-epigallocatechin-3-gallate,
器官移植是目前治疗器官终末期病变的最有效手段,但是移植后的免疫排斥反应明显降低了器官移植的治疗效果。抑制免疫排斥反应是器官移植界的重要课题。丝裂原活化蛋白激酶(mitogen-activated

protein kinase,MAPK)信号通路是当今的研究热点,其与免疫细胞的相关性研究已受到广泛关注。p38MAPK作为MAPK家族的重要一员,它不仅参与细胞增殖、分化、凋亡及炎症刺激等病理生理过程,还在免疫系统中起着重要作用。
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目的观察慢性阻塞性肺疾病(COPD)患者中磷脂酰肌醇-3激酶(PI3K)、蛋白激酶B(PKB)与γ-谷氨酰半胱氨酸合成酶(γ-GCS)的表达,研究PI3K、PKB通路和γ-GCS的关系。方法将手术切除的肺癌患者肺组织标本(16例)分为COPD组和对照组,每组8例,检测肺组织中γ-GCS活性,原位杂交检测肺组织中γ-GCS 5-FU半抑制浓度 mRNA的表达,免疫组化分析肺组织中PI3K、PKB与γ-GCS的蛋白水平。结果 COPD组中γ-GCS活性明显高于对照组,差异有统计学意义(P<0.01)。PI3K、PKB与γ-GCS免疫组化在COPD组可见肺泡、支气管壁细胞及小血管平滑肌细胞胞浆中皆有蛋白阳性信号表达,图像定量分析显示COPD组PI3K、PKB与γ-GCS蛋白表达显著高于对照组,差异有统计学意义(P<0.01)。直线相关分析得出PI3K、p-PKB蛋白表达与γ-GCS活性、mRNA及蛋白表达呈正相关。结论COPD患者肺组织γ-GCS蛋白和mRNA表达增高,PI3K、p-PKB蛋白也有相应高表达,提示PI3K、PKB和γ-GCS可能在COPD的发病机制中发挥作用,且可能参与了γ-GCS的信号传导通路。
肝纤维化(hepatic fibrosis,HF)发生的中心环节是肝星状细胞(hepatic stellate cells,HSCs)的活化,实质是细胞外基质(extracellular matrix,ECM)的合成大于降解。TGF-β1不仅影响HSC的活化,还影响ECM的合成与降解,故在HF的发生发展中起重要作用。本文通过对TGF-β1的信号通路及其信号通路间的对话(crosstalk)来阐述TGF-β1与HF的关系。
目的:探讨脂多糖(LPS)对哮喘小鼠肥大细胞活化及p38蛋白激酶(p38MAPK)表达的影响。方法:将24只BALB/c小鼠随机分为3组:A(哮喘组)、B(0.1mg LPS+OVA组)、C(对照组),每组8只,采用免疫佐剂(氢氧化铝)与卵清蛋白(OVA)腹腔注射致敏及用1%OVA生理盐水雾化激发的方法制备哮喘小鼠模型。采用免疫组织化学染色SP法半定量测定肺组织中类胰蛋白酶及p38MAPK表达的情况,HE染色观察肺组织病理变化。结果:与A组相比,B组小鼠肺组织类胰蛋白酶及p38MAPK的MOD显著升高(P<0.