05),M组凋亡率显著低于S+M组(P
Objective Inactivated Sendai virus particle[hemagglutinating virus of Japan envelope(HVJ-E)]has a potential oncolytic effect due to its ability to induce apoptosis in tumor cells.However,the molecular mechanism of apoptosis induction in cancer cells mediated by HVJ-E has not been fully elucidated.This Baricitinib 价格 paper aims to investigate the underlying mechanism of apoptosis induction by HVJ-E in prostate cancer cells(PC3).Methods PC3 cells were treated with HVJ-E at various MOI,and then interferon-6(IFN-S) production,and the cell viability and

apoptosis were detected by ELISA,MTT-based assay and flow cytometry,respectively.Next,the roles of Jak-Stat,MAPK and Akt pathways played in HVJ-E-induced apoptosis in PC3 cells were analyzed by immunoblot assay.To further evaluate the cytotoxic effect of HVJ-E on PC3 cells,HVJ-E was intratumorally injected into prostate cancers on BALB/c-nude mice,and the tumor volume was monitored for 36 days.Results HVJ-E induced IFN-β production and activated Jak-Stat signaling pathway,which resulted

in the activation of caspase-8,caspase-3,and Selleck BAY806946 PARP in PC3 prostate cancer cells post HVJ-E treatment.Furthermore,we observed for the first time that p38 and Jnk MAPKs in PC3 cells contributed to HVJ-E-induced apoptosis.In addition,intratumoral HVJ-E treatment displayed a direct inhibitory effect in an in vivo BALB/c nude mouse prostate cancer model.Conclusion Our findings have provided novel insights into the underlying mechanisms by which HVJ-E induces apoptosis in tumor

cells.
饮酒对中枢神经系统有重大影响,小胶质细胞是脑内原位免疫效应细胞,它在乙醇引起的神经毒性中有重要作用,可导致神经元死亡与退行性变;小胶质细胞有利于维持稳态而不是导致神经退行性变,小胶质细胞活化是乙醇引起损害的结果而不是损害的原因。本文对乙醇引起的神经元死亡和退行性变中小胶质细胞的反应及相应机制作一综述。
目的:探讨NDRG2在热疗诱导的热应激抗肝癌细胞侵袭中所发挥的作用和机制研究。方法:构建NDRG2过表达和干涉表达的HepG-2细胞稳转细胞株,通过Transwell和Western-blot方法检测了和细胞侵袭力和细胞内NDRG2、MMP-2和MMP-9的表达量变化;构建荷瘤鼠模型,通过HE染色及免疫组化方法检测并对比了热对肿瘤细胞向周围肌肉组织的侵袭抑制作用。结果:给予NDRG2过表达的HepG-2细胞45℃、30min热处理后,细胞内NDRG2的表达明显增高,同时伴随细胞侵袭力、MMP-2和MMP-9的表达明显降低(P
目的:研究血小板源性生长因子(PDGF-BB)对血管平滑肌细胞(VSMC)G0S2基因mRNA表达的调控,并初步探讨其机制。方法:体外培养大鼠胸主动脉平滑肌细胞,逆转录实时定量聚合酶联反应(RT-QPCR)法测定PDGF-BBJVSMC中G0S2 这个 mRNA表达影响的时效关系和量效关系;运用不同细胞信号通路阻断剂处理,研究PDGF-BB影响G0S2 mRNA表达的信号途径;转染含有G0S2基因启动子的荧光素酶报告基因质粒pGL3-G0S2-Promotor,检测PDGF-BB对G0S2基因启动子活性的影响。结果:PDGF-BB能够增加平滑肌细胞G0S2 mRNA表达,PDGF-BB诱导VSMC表达G0S2mRNA在12h后达峰值[20ng/ml增加(2.83±0.81)倍;10ng/ml增加(2.99±0.

Western-blot证实胃泌素、曲妥珠单抗可协同下调SGC7901细胞中p16、AE1、CyclinD1、β-catenin蛋白表达,上调AE2蛋白,降低胞浆内p16蛋白并促进其入核。 5.裸鼠荷瘤实验显示胃泌素、曲妥珠单抗在体内亦有协同抗肿瘤作用,荷瘤免疫组织化学染色显示联合用药组细胞膜CCKBR蛋白表达较单药组明显增多,荷瘤组织提取蛋白做Western-blot示胃泌素、曲妥珠单抗在体内亦协同下调p16、AE1、CyclinDl蛋白、上调AE2蛋白,与体外实验结果一致。 结论： 1.胃泌素、曲妥珠单抗的体内、体外实验均证实对胃癌有协同抗肿瘤作用,并首次发现曲妥珠单抗在HER2阴性的胃癌细胞中同样具有协同抑癌作用。 2.胃泌素、曲妥珠单抗协同上调CCKBR蛋白表达并促进其膜定位,上调的CCKBR与胃泌素相结合启动并放大对下游信号分子的影响可能是胃泌素与曲妥珠单抗协同抗肿瘤增殖的关键环节。

3.上调的CCKBR与胃泌素结合后可影响AE1/p16/AE2复合体,使胞浆内p16减少、入核增加,AE1下调,AE2上调,细胞酸化,Wnt/β-catenin通路失活,CyclnD1下降,最终阻滞细胞于G1期从而抑制肿瘤细胞增殖。
目的：探讨mTOR及其下游分子4EBP1和S6K1在新疆维、汉乳腺癌组织中的分子病理学机制。方法：随机选取285例于2005年3月-2009年9月期间就诊于新疆医科大学附属肿瘤医院的维吾尔族、汉族女性浸润性乳腺癌患者,检测磷酸化mTOR及其下游分子4EBP1和S6K1的表达状况,分析其与各临床指标之间的关系及对预后的影响；选取46对维、汉新鲜乳腺癌组织和癌旁组织样本,使用免疫印记(Western-blot)蛋白方法检测磷酸化mTOR及其下游分子4EBP1和S6K1的表达情况,并测定其相对定量。选取63对维、汉新鲜乳腺癌组织和癌旁组织样本,检测mTOR及其下游分子4EBP1和S6K1mRNA的表达情况,并与蛋白检测的结果进行对照。结果：p-mTOR的表达阳性率分别是72%(206/285)和60%(170/285),,p=0.001；p-4EBP1的表达阳性率分别是26%(74/285)和8%(24/285),,p=0.000；p-S6K1的表达阳性率分别是42%(120/285)和18%(50/285),p=0.000,p值均小于0.01,差别均有显著统计学差异。三指标与各临床指标的单因素分析显示均与无病生存率无明显统计学差异,多因素分析显示不同民族(p=0.000)、BMI指数(p=0.048)、ki-67的表达(p=0.004)以及p-S6K1的表达(p=0.000)与无病生存率相关。无病生存的Log

已经 Selleck INCB28060 Rank检验的X2值分别为0.274,0.920和0.144,p值分别为0.619,0.337和0.704, p-mTOR、 p-4EBP1、p-S6K1的表达与无病生存率之间无明显统计学差异。在维吾尔族和汉族乳腺癌组织中,p-mTOR的表达阳性率分别是54%和46%(p=0.067), p-4EBP1的表达阳性率分别是62%和38%(p=0.020), p-S6K1的表达阳性率分别是49%和51%(p=0.695)。荧光定量rtPCR结果显示,mTORmRNA在乳腺癌组织和癌旁组织中表达的2-△△ct平均值分别是14.83、19.78, t=-1.376, p=0.174; S6K1mRNA在乳腺癌组织和癌旁组织中表达的2-ΔΔct平均值分别是66.06,87.51, t=-1.15, p=0.254;4EBP1mRNA在乳腺癌组织和癌旁组织中表达的平均值分别是12.70、10.33,t=0.379,p=0.706,三者差异均无明显统计学意义(p>0.05)。维、汉乳腺癌组织中mTORmRNA2－ΔΔct平均值分别为10.88和19.7,差异有统计学意义(p=0.045),4EBP1mRNA2－ΔΔct平均值分别为52.72和80.74,差异无统计学意义(p=0.128),S6K1mRNA2-－ΔΔct平均值分别为7.97和17.92,差异无统计学意义(p=0.404)。结论：mTOR信号通路及其下游分子4EBP1和S6K1在浸润性乳腺癌组织中被显著激活。磷酸化mTOR及其下游分子4EBP1和S6K1表达的调控位点可能位于转录后水平或蛋白质水平。p-4EBP1在维吾尔族中的表达显著升高,可能成为研究维、汉不同民族之间乳腺癌差异的原因之一。维、汉之间mTOR及其下游分子mRNA与磷酸化蛋白检测的结果不一致,因而mRNA的检测不能代表维、汉乳腺癌中mTOR信号通路的激活状态。

还有 第一部分：mTOR及其下游分子4EBP1和S6K1在浸润性乳腺癌中的表达和临床意义 目的：探讨磷酸化mTOR及其下游分子4EBP1和S6K1在浸润性乳腺癌组织和癌旁组织中的表达部位、表达量以及蛋白表达的相关性。探讨磷酸化mTOR、4EBP1和S6K1在浸润性乳腺癌患者当中与各临床指标以及预后的关系。方法：随机选取285例于2005年3月-2009年9月期间就诊于新疆医科大学附属肿瘤医院的维吾尔族、汉族女性浸润性乳腺癌患者,使用免疫组化检测磷酸化mTOR及其下游分子4EBP1和S6K1的表达状况及其相互关系,以及与各临床指标之间的关系及对预后的影响；选取46对维、汉新鲜乳腺癌组织和癌旁组织样本,使用免疫印记检测mTOR及其下游分子4EBP1和S6K1的表达情况,并测定其相对定量,分析mTOR及其下游分子4EBP1和S6K1的相互关系。结果:p-mTOR表达阳性率分别是72%(206/285)和60%(170/285), p=0.001; p-4EBP1的表达阳性率分别是26%(74/285)和8%(24/285),p=0.000；p-S6K1的表达阳性率分别是42%(120/285)和18%(50/285),p=0.000,p值均小于0.01,差别均有显著统计学差异。p-mTOR在癌组织与癌旁组织中定位表达未见明显统计学差异(p=0.554); p-4EBP.1和p-S6K1在癌组织和癌旁组织中的定位表达有显著统计学差异(p分别为0.001和0.000)。Western-blot结果提示p-mTOR、p-4EBP1和p-S6K1在癌组织中表达的灰度平均值均高于癌旁组织(P值分别为0.001、0.725和0.473)。p-4EBP1在维、汉民族之间的表达有统计学差异(p=0.020,r=0.138), p-S6K1的表达存在组织学分级之间的差异(p=0.029,r=0.044), p-mTOR和p-S6K1与ki-67的表达存在统计学差异(p值分别为0.028和0.011,r值分别为-0.130和-0.151)。三指标与各临床指标的单因素分析显示均与无病生存率无明显统计学差异,多因素分析显示不同民族(p=0.000)、BMI指数(p=0.048)、ki-67的表达(p=0.004)以及p-S6K1的表达(p=0.

25%胰蛋白酶-0.02%EDTA工作液消化分散细胞,进行传代或接种培养。 蛋白印迹(Western Blot)检测曲妥珠单抗对mTORC1和mTORC2信号通路的影响。将MDA-MB-453细胞接种于12孔板中,待细胞处于对数生长期后,在6组实验组中加入浓度分别为0.25、0.5、1.0、1.5、2.5和5.0mg/ml的曲妥珠单抗,设1组空白对照组及1组雷帕霉素对照组(雷帕霉素的浓度为0.1mg/ml),空白对照组加入等量生理盐水,孵育2h后提取蛋白,上样,电泳分离,转膜,室温封闭1h,加一抗4℃孵育过夜,加二抗室温孵育1h, 点击此处 ECL显色,曝光,洗片。 细胞增殖-毒性检测试剂盒(Cell Counting Kit-8, CCK-8)检测曲妥珠单抗对MDA-MB-453细胞增殖的影响。将生长状态良好的MDA-MB-453细胞调整细胞浓度为2×104个/ml,接种于96孔板,每孔200μl,每组设5个平行孔。培养24h待细胞贴壁后,更换新鲜培养基,分别为含生理盐水的培养基(空白对照组1组)、含有0.1mg/ml雷帕霉素的培养基(雷帕霉素对照组1组)和含有浓度分别为0.5、1.0、1.5、2.5和5.0mg/ml的曲妥珠单抗的培养基(实验组5组),继续培养3天后,按CCK8试剂盒说明书操作,最后用酶标仪测吸光度值(λ=450nm)。

平板克隆率试验检测在曲妥珠单抗的作用下乳腺癌细胞的克隆形成能力。将细胞接种于6孔板,每孔密度500个细胞,24h之后更换新鲜培养基,1组空白对照组、5组实验组培养基中分别加入生理盐水和浓度分别为0.5、1.0、1.5、2.5、5.0mg/ml的曲妥珠单抗。继续进行培养,每48h更换1次新鲜培养基,维持培养2周,2周后终止培养,弃去培养液,用PBS液冲洗2次,用甲醇室温固定15min,弃去甲醇,用0.15%结晶紫染液室温染色15min,用流水冲洗2次,室温晾干,拍照统计克隆形成数。 显微镜下观察乳腺癌细胞死亡情况。将生长状态良好的MDA-MB-453细胞调整细胞浓度为2×104个/ml,接种于24孔板,24h后待细胞融合密度达30%左右时,更换新鲜培养基,分别为含生理盐水的培养基(空白对照组1组)、含有0.1mg/ml雷帕霉素的培养基(雷帕霉素对照组1组)、含有浓度分别为0.5、1.0、1.5、2.5、5.0mg/ml的曲妥珠单抗的培养基(实验组4组)和含有0.1mg/ml雷帕霉素及浓度分别为0.5、1.0、1.5、2.5、5.0mg/ml的曲妥珠单抗的培养基(联合用药对照组4组),继续培养。每天同一时段对每一孔进行随机拍照,平均每孔三张照片,连续观察6天。

实验数据均用SPSS13.0统计软件处理。细胞增殖试验、克隆形成试验所有数据均用x±s表示。如果方差齐,采用方差分析(One-Way ANOVA)多组间比较,然后采用LSD法进行两两比较,如果方差不齐,采用Welch法多组间比较,然后采用Dunnet’s 这个 T3方法进行两两比较。检验水准a=0.05。 结果 Western Blot结果显示：雷帕霉素对照组的mTOR、S6、4EBP1磷酸化明显受抑制,实验组随曲妥珠单抗浓度的增大,mTOR、S6、4EBP1、Akt磷酸化水平越低,并且随着曲妥珠单抗的浓度增大,其对乳腺癌细胞mTOR信号通路的抑制效果较之雷帕霉素组更加明显。

http://www.selleckchem.cn/products/DAPT-GSI-IX.html CCK8试剂盒检测结果显示：空白对照组OD值为1.79±0.07,雷帕霉素对照组OD值为1.47±0.08,曲妥珠单抗实验组的OD值依浓度变化分别为1.37±0.11、1.28±0.03、1.03±0.09、0.68±0.09、0.37±0.03,对上述5个实验组和1个空白对照组进行方差齐性检验,6组数据的方差齐(P=0.083)；方差分析的结果显示,6组数据至少有2组的差异有统计学意义(F=221.863,P=0.000)。利用LSD法进行两两比较,与空白对照组相比,所有曲妥珠单抗实验组均可抑制MDA-MB-453细胞增殖,差异具有统计学意义(均为P=0.000)。根据细胞相对增殖率公式可得曲妥珠单抗实验组的细胞相对增殖率依浓度变化分别为(77±6.3)%、(71±1.5)%、(57±4.9)%、(38±5.1)%、(21±1.5)%,而雷帕霉素对照组的相对增殖率为(82±4.6)%。与空白对照组相比,雷帕霉素对照组可抑制MDA-MB-453细胞增殖,差异具有统计学意义(P=0.000)。 6组克隆形成数据显示：对照组与实验组的均值分别为每孔(519±32)、(283±23)、(140±18)、(110±12)、(83±10)和(19±6)个,克隆形成率分别为(100±6)%、(55±4)%、(27±3)%、(21±2)%、(16±2)%、(4±1)%。对上述6组克隆数据进行方差齐性检验,6组数据的方差齐(P=0.052)；方差分析的结果显示,6组数据至少有2组的差异有统计学意义(F=372.643,P=0.000)。利用LSD法进行两两比较,与空白对照组相比,所有曲妥珠单抗实验组P=0.000。 在显微镜下连续6天观察细胞死亡情况时发现,乳腺癌MDA-MB-453细胞为半悬浮圆形细胞,呈葡萄串样生长。使用药物6天后,不论是单药曲妥珠单抗组还是联合用药组,细胞数目都随曲妥珠单抗浓度增大而减少。但单用雷帕霉素从图片上看并不比曲妥珠单抗效果好,联合用药图片所见与曲妥珠单抗单药效果相差也不大,并且2.5mg/ml曲妥珠单抗+0.1mg/ml雷帕霉素药物组细胞数目却比2.

实验动物来源：过表达人类Hsp27B基因的转基因鼠(Hsp27B transgenic mice,Hsp27 Tg)由本课题组、南京大学模式动物研究所共同构建,饲养于南京大学模式动物研究所的SPF级动物房中。2.心脏质量检测：称量并计算心脏重/体重比(Heat Weight/Body Weight, HW/BW)和心脏重/胫骨长比(heat

weight/tibialength,HW/TL),组织切片比较二尖瓣平面心脏大小。3.心功能及心脏结构检测：1)超声心动图检测左室射血分数(ejection GSK2118436 fraction,EF%)及左室缩短率(fractional shortening,FS%)代表心功能；2)左室重构指标：舒张期/收缩期室间隔厚度(interventricular septal thickness at diastolic/systolic phase,IVSd/IVSs)、舒张期/收缩期左室内径(left ventricular internal diameter at diastolic/systolic phase, LVIDd/LVIDs)、舒张期/收缩期末期左室容积(left ventricle end-diastolic/systolic volume, LVVd/LVVs),左室质量(left ventricular mass,LV mass)。4.荧光定量PCR分析ATP能量代谢相关基因mRNA表达水平；心肌组织ATP含量测定。5.组织学及蛋白质印迹检测：1) 电镜观察心肌超微结构改变；2)心肌组织学检测：HE染色、免疫组化；3) Western Blot检测心肌蛋白质聚集；6. 心肌自噬水平检测及相关机制的研究：1) 电镜观察心肌自噬体数量；2) Western Blot检测LC3Ⅱ/Ⅰ、p62、hVps34,Bcl-2、p-ERK/ERK;3) TUNEL检测心肌凋亡。结果：1.根据Hsp27表达水平的高低,将转基因小鼠分为两个转基因系,表达量较高的Tg10转基因系、表达量中等的Tg85转基因系。2.与野生型鼠相比,高表达Hsp27的转基因小鼠的心脏重／体重比(HW/BW)、心脏重/胫骨长比(HW/TL)增高；二尖瓣平面心脏肥大；而野生型小鼠和低度表达Hsp27的转基因小鼠HW/BV及HW/TL无统计学差异。3.与WT及Tg85小鼠相比,Tg10小鼠EF%及FS%明显降低(P<0.05或0.01)；IVSd(P<0.01)、LVIDd(P<0.05)、LVIDs(P<0.01)、LVVd(P<0.01)。4.逆转录PCR检测线粒体能量代谢基因mRNA水平,明显低于WT(P<0.01或0.05),Bcl-2显著下调(P
目的：本实验旨在探讨晚期糖基化产物(advanced

哪里 glycation end products, AGEs)对心肌细胞自噬水平的影响及自噬在AGEs诱导心肌细胞凋亡中的作用。方法：AGEs处理SD乳鼠原代心肌细胞,Western blot检测蛋白表达水平,透射电镜观察自噬小体,MTT实验检测细胞活性,流式细胞术检测细胞凋亡水平。结果：与对照组相比较,AGEs处理原代心肌细胞后,自噬相关蛋白LC3-Ⅱ的表达水平上调,SQSTM1/P62水平下降,电镜观察到自噬小体数量增多；AGEs处理组心肌细胞凋亡率升高,细胞活性降低。而用自噬抑制剂3-MA预处理后AGEs处理组细胞凋亡率进一步升高,细胞活性更低。AGEs能活化ERK、JNK和P38MAPK信号通路,并且抑制PI3K/Akt/mTOR信号通路。ERK抑制剂PD98059或Akt激活剂胰岛素样生长因子-1(IGF-1)预处理能抑制AGEs诱导的心肌细胞自噬,而P38抑制剂SP600125或IGF-1预处理后能抑制AGEs诱导的心肌细胞凋亡。结论：本实验以乳鼠原代心肌细胞为对象,研究了AGEs对心肌细胞自噬与凋亡的影响。AGEs通过PI3K/AKT/mTOR和ERK/MAPK信号通路诱导心肌细胞自噬,通过PI3K/AKT/mTOR和P38/MAPK信号通路诱导心肌细胞凋亡。证明自噬在晚期糖基化产物诱导心肌细胞凋亡中具有保护作用。
急性肺损伤(acute lung injury, ALI)是由非心源性的各种肺内和肺外致病因素引起的急性进行性缺氧性呼吸衰竭,病情进一步发展将形成急性呼吸窘迫综合征(acute respiratory 或者 distress syndrome, ARDS),最终引发多器官功能障碍,是临床常见病、多发病。由于对疾病发生发展过程认识的不足,目前临床对于改善ARDS患者严重的顽固性低氧血症的措施十分有限,现在依然没有理想的治疗手段,ARDS病死率始终居高不下。因此研究疾病的发病机制,在治疗ALI/ARDS、改善疾病的预后中显得尤为重要。ARDS发病机制错综复杂,研究表明其机制可能与机体正常炎症反应的过度激活有关。参与这种过度炎症的包括多种炎症细胞以及炎症介质。当炎症细胞接触到外源性、内源性刺激时会引起自身激活,同时释放更多的炎性因子使更多的细胞发生激活,这一细胞激活的过程与膜蛋白的活化有密切的联系。膜蛋白活化的一种重要的修饰方式是异戊二烯化修饰。常见的真核细胞中异戊二烯化修饰主要有香叶烯基化(GGPP修饰)和法尼烯基化(FPP修饰)两种,GGPP与FPP均来源于甲羟戊酸途径。既往研究发现使用他汀类(statins)药物即羟甲基戊二酸单酰辅酶A还原酶抑制齐(HMG-CoA

reductase inhibitor)有缓解炎症的作用,但具体作用原理尚不明确,其中的一种可能性猜测是他汀类对下游GGPP和FPP的合成发生抑制,减少了膜蛋白异戊二烯化,从而对炎症的进展起到抑制作用。本研究小组前期研究已证实在ARDS病程中肺泡上皮细胞内GGPPS1表达水平发生改变,且GGPPS1表达水平的变化程度与肺部炎症水平有直接相关性。查阅文献,在SCI中尚未有报道表明此改变在炎症细胞中的变化及作用。在众多炎症细胞中,单核巨噬细胞在炎症早期阶段即发生激活,并能释放多种炎症因子,在炎症的进程中发挥重要的作用。因此本文主要针对ARDS病程中外周血单核巨噬细胞内GGPPS1表达水平的变化及作用进行探索研究。通过本文的研究我们发现：1.在ARDS病人或内毒素(LPS)诱导的小鼠急性肺损伤模型中外周血单核巨噬细胞内GGPPS1表达显著增高；2.体外实验中发现LPS通过TLR-4/p38/MAPK途径在鼠源巨噬细胞系(Raw264.7)和人源巨噬细胞系(THP-1)中引起GGPPS1表达增高。3.

0统计软件包对数据进行分析,以P0.05)。 2、Western-Blot方法检测转染后胃癌MKN-45细胞c-Met蛋白、p-PI3k蛋白和p-AKT蛋白的表达较未转染组明显下降(P0.05)。 结论： 1、三条c-Met-siRNA有效地沉默胃癌MKN-45细胞c-Met基因,减少c-MetmRNA及c-Met蛋白的表达。 2、沉默胃癌MKN-45细胞c-Met基因后,减少了下游PI3k/AKT信号通路磷酸化信号分子的数量,对非磷酸化分子的表达无明显的影响。
前言：肺癌是常见的恶性肿瘤之一。对于中晚期及术后复发的肺癌患者,化疗是其重要的的治疗手段。然而,肺癌对以铂类为基础的经典化疗方案容易产生耐药,导致化疗效果不佳。因此,研究肺癌化疗耐药机制具有重要意义。许多研究表明,成纤维细胞生长因子2(Fibroblast STI571核磁共振 growth

factor2, FGF-2)可通过抑制细胞凋亡,参与多种肿瘤耐药的发生,但具体机制不清。最新研究发现,成纤维细胞生长因子受体1(Fibroblast growth factor receptor1, FGFR1)在肺鳞癌中出现特异性基因扩增,FGFR1基因可能是肺鳞癌治疗的靶点。FGFR1的生物活性主要是通过与高亲和性配体FGF-2结合而发挥作用。因此,充分认识FGF-2及FGFR1基因在肺鳞癌中的作用及其机制具有重要的意义。此外,研究显示硫氧还蛋白(thioredoxins, TRX)参与多种肿瘤发生发展。然而TRX是否参与FGF-2介导的对肺鳞癌细胞凋亡的调控,目前尚无相关报道。 目的：(1)探讨FGF-2对肺鳞癌细胞SK-MES-1中TRX表达的影响。(2)探讨FGF-2对肺鳞癌细胞SK-MES-1中顺铂诱导凋亡的影响。(3)探讨TRX在FGF-2调控肺鳞癌细胞SK-MES-1凋亡中可能的作用。 方法：(1)应用Western blot检测FGF-2分别以不同浓度(0、5、10、25、50、75ng/m1)、不同时间(0、4、8、12、24h)作用后,SK-MES-1细胞中TRX的蛋白表达水平,确定FGF-2作用的最佳浓度和时间。(2)应用RT-PCR检测SK-MES-1细胞中TRX的mRNA表达水平。(3)MTT法测定SK-MES-1细胞中顺铂的半数抑制浓度IC50(inhibition concentration50%)(4)分析FGF-2对SK-MES-1细胞凋亡的影响,应用Western

blot检测TRX、PARP蛋白表达水平；应用免疫荧光化学检测TRX在细胞内的定位和相对定量；Ac-DEVD-pNA法检测caspase-3酶活性；流式细胞术检测细胞凋亡；RT-PCR检测TRX mRNA的表达水平。(5)应用脂质体法将TRX-siRNA转染入SK-MES-1细胞,荧光显微镜观察转染效率；Western SB590885溶解度 blot检测TRX-siRNA抑制效率；Annexin

Ⅴ-FITC/PI染色、流式细胞术检测细胞凋亡。 结果： http://www.selleckchem.cn/products/Temsirolimus.html (1)FGF-2以不同浓度作用于SK-MES-1细胞,10ng/ml FGF-2作用组中TRX表达明显上升,为对照组的(1.894±0.08)倍(P0.05)。FGF-2可能在转录后水平上调SK-MES-1细胞中TRX的表达。 (4)以0、3、10、30、75、150、300mg/L DDP作用于SK-MES-1细胞24h,SK-MES-1细胞存活率随DDP浓度增加而下降,作图估算作用于SK-MES-1细胞24h时DDP的IC50,约为30mg/L。 (5)FGF-2可明显抑制SK-MES-1细胞中caspase-3的活性及caspase-3底物PARP的活化,抑制率分别为(54.13±1.57)%和(34.46±0.53)%(P<0.05)；FGF-2可明显上调TRX蛋白的表达(1.87±0.09)倍(P<0.05)；应用TRX-siRNA抑制TRX表达后,SK-MES-1凋亡增加,并可抑制FGF-2的抗凋亡作用,TRX-siRNA组凋亡率为正常对照组的(1.55±0.02)倍(P<0.05),TRX-siRNA+饥饿组凋亡率为饥饿组的(1.42±0.03)倍(P0.05) 结论： (1)FGF-2可上调肺鳞癌细胞SK-MES-1的TRX表达。 (2)FGF-2能抑制顺铂诱导的肺鳞癌细胞SK-MES-1凋亡。 (3)FGF-2可能通过上调TRX表达以抑制肺鳞癌细胞SK-MES-1的凋亡。
目的分析初治NSCLC患者的EGFR基因及K-ras基因的突变状态,为临床TKIs的用药提供参考。 方法收集中南大学各附属医院共93例NSCLC初治患者的病理组织标本,提取各标本DNA并通过聚合酶链反应(Polymerase chain reaction, PCR)进行扩增,采用焦磷酸测序法检测EGFR基因第19、20和21号外显子及K-ras基因第2号外显子的第12、13密码子的突变状态,并分析其突变状态与各临床病理特征的关系。 结果93例患者中,EGFR基因突变率为24.7%(23/93),而第19、20和21号外显子在23例EGFR基因突变患者中的突变率分别为56.5%(13/23)、8.7%(2/23)和39.1%(9/23),其中1例患者第19号与第20号外显子同时突变；K-ras基因突变率为6.5%(6/93),而第12、13密码子在6例K-ras基因突变患者中的突变率分别为66.7%(4/6)和50.

TYR的蛋白及基因表达与未处理组相比均明显下调,差异有统计学意义,而与正常豚鼠相比差异无统计学意义。 五、研究结论 CaM在人自体移植皮片中的表达显著增高,刺激皮片黑素细胞合成黑色素增多,促进自体移植皮片过度色素沉着；维拉帕米作用于人黑素细胞后,能抑制黑素细胞增殖,抑制TYR的活性,减少黑素合成。维拉帕米与α-MSH共同作用黑素细胞后,细胞增殖下降,TYR活性下降,黑素细胞合成黑色素减少,说明维拉帕米在体外能拮抗α-MSH对黑素合成的促进作用。维拉帕米作用于自体移植皮片后能使皮片黑素细胞中酪氨酸酶的活性下降、皮片中黑色素含量降低,说明维拉帕米在体内亦能抑制黑素合成的作用,进一步说明了钙信号转导途径在自体移植皮片过度色素沉着中有重要调控作用。
糖尿病肾病(diabetic

WH-4-023研究购买 nephropathy, DN)是糖尿病患者最常见的微血管并发症之一也是导致糖尿病患者心血管事件增加率及其死亡率上升的主要原因。国外终末期肾衰竭患者中原发病为糖尿病的约占总数的30%-40%。随着我国糖尿病患者人数的日益增多,目前DN已跻身为我国导致慢性肾病能不全的重要原因之一。DN起病隐匿,且病程进展迅速,一旦患者确诊为DN时往往已经处于不可逆的肾脏损害并进入快速发展的阶段。DN临床治疗效果不理想、预后差成为当前临床医生面临的一个重大难题。众所周知,DN早期特征性的病理改变为肾小球肥大及细胞外基质增多,随着病情逐渐进展,进而出现肾小球硬化及间质纤维化,临床表现为慢性肾功能不全。早期DN是可以逆转的,因此,如何尽早明确糖尿病患者发展为DN的可能性,并采取有效的干预措施,延缓病变的发展是当前医学界研究热点。 selleck screening library 12-脂氧化酶(12-lipoxygensae,12-LO)是一种不饱和脂肪酸的氧化酶,在体内活化后以花生四烯酸(Arachidonic acid, AA)为基质生产12-氢氧化二十碳四烯酸(12-Hydroxyeicosatertraenioc acid,12(S)-HETE)的代谢产物。研究表明,12-LO及其代谢产物12(S)-HETE主要通过氧化应激及引起炎症反应参加多种疾病的发生、发展,如高血压、冠心病、糖尿病、动脉粥样硬化等。因此,12-LO及其代谢途径受到越来越多研究者的关注。早在1999年,Bleich D等人就发现：12-LO基因敲除的C57BL／6小鼠连续腹腔注射链脲佐菌素(streptozotocin, STZ) 5天,12-LO基因敲除的C57BL／6小鼠的血糖无明显升高。近年,Kim

YS和Kang等研究发现高糖刺激后的肾小球系膜细胞12-HETE的释放水平是明显增加,而Reddy MA等人研究发现12-LO能够通过P38MAPK信号传导途径增加DN时细胞外基质(extracellular

matrix, ECM)蛋白的表达,如：纤维连接蛋白(fibronectin, FN)、胶原蛋白(Collagen),因此,12-LO在糖尿病肾病的发生、发展中具有重要的作用。肾小球肥大和细胞外基质增多是早期DN特征性的病理改变,而肾小球肥大与细胞周期调节有关的细胞周期素激酶抑制剂(cyclin-dependent kinase inhibitor, CKI)的表达密切相关。因此,本研究主要是多角度探讨DN时12-LO及其代谢途径与CKI表达调节及与肾小球细胞肥大的关系；观察积聚的细胞外基质(Extracellular matrix, ECM)对12-LO和CKI表达的调节作用,并阐明其分子机制,明确12-LO对DN肾小球细胞肥大的发生和ECM积聚的关系,进一步明确12-LO在DN进展中的作用,为临床治疗DN提供新的治疗靶点。我们以体外培养的原代肾小球系膜细胞、微型泵注射12(S)-HETE大鼠模型及高脂饮食结合小剂量的链脲佐菌素(Streptozotocin,STZ)诱发的2型糖尿病模型大鼠作为研究对象,进行如下实验：①微型泵注射12(S)-HETE对正常大鼠肾小球内CKI及ECM的表达影响；②皮下注射12-LO抑制剂((cinnamyl-3,4-dihydroxy-cyanocinnamate,CDC)对2型糖尿病大鼠肾小球肥大及肾小球内CKI.ECM的表达影响；③12(S)-HETE刺激肾小球系膜细胞对CKI的表达影响及其信号传导；④高糖刺激肾小球系膜细胞对CKI的影响及给予CDC后CKI的表达变化；⑤模拟ECM微环境对肾小球系膜细胞CKI的表达影响和CDC对其表达的变化及其信号传导。 这个 主要研究结果如下： 1.泵注射12(S)-HETE增加正常大鼠肾小球内P21、P16及CollagenⅣ的表达p<0.01),CDC在不影响糖尿病大鼠的血糖的情况下,改善肾脏肥大及降低肾小球体积p<0.01),P21、P16及CollagenⅣ的表达也明显增加(p<0.01)；给予CDC治疗后P21、P16及CollagenⅣ的表达和12(S)-HETE水平均显著下降p<0.01),给予P38MAPK抑制剂后,P21、P16的表达明显降低(p<0.01),CDC降低高糖刺激后系膜细胞12(S)-HETE释放水平(p<0.01),CDC降低高糖刺激引起的P21、P16的表达(p<0.01),CDC降低模拟的ECM微环境中的系膜细胞12(S)-HETE释放水平(p<0.