5mMβ-磷酸甘油的诱导培养液50ng/ml的FGF2进行培养。三组细胞在培养第3、6、9天分别进行矿化相关基因ALP, Runx2和ColIa1的表达量检测，并进行矿化结节定性、定量检测。（3）用ExoQuickTM试剂方法提取正常对照组、矿化诱导组和FGF2组Saos-2细胞的细胞外分泌物。然后，用电子显微镜检测分泌物形态，用western blot的方法检测基质小泡表面标志物CD63和CD9的表达情况。（4）用p-NPP检测基质小泡的ALP活性，然后将提取后的MVs在矿化缓冲溶液（SCL）中孵育12h, Torin 1化学结构 MVs可继续吸收钙离子形成羟基磷灰石。钙离子检测试剂盒检测三组MVs孵育完之后的钙离子浓度，以检测MVs的体外矿化能力。 结果：（1）茜素红染色结果显示矿化诱导组发生明显矿化，产生大量矿化结节，对照组只有少量矿化；矿化结节定量结果显示诱导组产生的矿化结节是正常对照组的5倍左右，说明我们成功构建了Saos-2的体外矿化模型。（2）FGF2明显抑制了Saos-2细胞矿化标志标志基因ALP,

Runx2和CoIa1的表达，并且减弱了细胞的矿化；证明FGF2对Saos-2细胞的成骨分化和矿化具有明显的抑制作用。（3）电镜观察发现采用ExoQuickTM试剂提取三组Saos-2细胞分泌物直径均在30-400nm之间，为膜包被小泡；Western Blot结果检测发现三组小泡均表达基质小泡标志蛋白CD63和CD9，成功提取了基质小泡。（4）ALP活性分析显示，FGF2组的ALP活性低于矿化诱导组；各组MVs孵育之后，钙离子浓度测定显示，FGF2组钙离子浓度明显低于矿化诱导组，FGF2明显抑制了基质小泡体外矿化能力。 结论：成纤维细胞生长因子-2长期作用于Saos-2细胞可明显抑制其矿化，并可通过抑制基质小泡的功能发挥其抑制作用。
冠状病毒隶属冠状病毒科,它主要导致机体上呼吸道和胃肠道的感染。猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)是冠状病毒的一种,能导致仔猪严重腹泻,给养猪业造成重大的经济损失。虽然疫苗接种已经广泛用于预防猪传染性胃肠炎病毒的感染,但是免疫效果并不理想,这种疾病的传播依然存在。然而,目前对于抗猪传染性胃肠炎病毒感染的药物研究还十分有限,因此开发能够预防和治疗猪传染性胃肠炎的药物迫在眉睫。

近年来,银纳米材料由于具有优良的抗微生物特性,已逐渐成为人们关注的热点。本研究以猪传染性胃肠炎作为冠状病毒模型,从细胞水平评价了3种不同的银纳米材料对猪传染性胃肠炎病毒感染宿主细胞及介导的细胞凋亡的抑制效果,并通过MMP、p38MAPK信号通路激活、Bcl-2家族蛋白的表达、半胱氨酸蛋白酶前体的降解等方面,进一步探讨可能的分子机制。研究结果如下： 应用环境扫描电子显微镜(ESEM)和透射电子显微镜(TEM)对包括银纳米颗粒(AgNPs)、两种银纳米线(Ag NWs60、Ag NWs400)3种有代表性的银纳米材料进行表征,发现银纳米颗粒分布均匀粒径小于20nm；两种银纳米线的直径分别在60nm和400nm。 寻找更多 采用免疫荧光法、实时定量PCR、流式细胞术以及免疫印迹法,研究了3种银纳米材料体外对猪传染性胃肠炎病毒感染宿主细胞抑制作用,MTT试验结果表明,在12.5μg/mL无毒浓度下,银纳米颗粒及两种银纳米线抑制猪传染性胃肠炎病毒抑制率可达到67.35%(AgNPs)、53.90%(Ag NWs60)和58.65%(Ag NWs400);免疫荧光和实时定量荧光PCR结果同样证实了三种银纳米材料能够显著地抑制猪传染性胃肠炎病毒对ST细胞的感染。猪传染性胃肠炎病毒感染细胞发生凋亡,其分子机制是通过下调抑凋亡蛋白Bcl-2、上调促凋亡蛋白Bax的表达,改变线粒体膜电位,激活p38MAPK信号通路以及增强转录因子p53表达。进一步研究结果表明,3种银纳米材料能够通过调控p38/线粒体-caspase-3信号通路进而减少细胞凋亡数量。

综上所述,银纳米材料可有效地抑制猪传染性胃肠炎病毒感染细胞,其作用机制是通过灭活病毒亦或阻断病毒侵入细胞；不同质量浓度PVP表面修饰的银纳米材料具有的抗病毒效果各不相同,这些均为开发新型抗冠状病毒药物提供新思路。
本文应用HE染色方法对再生障碍性贫血小鼠胃肠粘膜组织结构进行观察：结果显示：胃的柱状上皮细胞排列紊乱且细胞结构不完整；固有层腺体细胞不规整且分布松散。小肠粘膜柱状上皮细胞分布紊乱且细胞形态不规整；小肠隐窝处出现明显断裂且细胞分布减少；小肠粘膜绒毛脱落，表面纹状缘结构断裂、脱落，肠粘膜变薄；固有层腺体分布紊乱，出现有凋亡。大肠杯状细胞急剧减少；固有层内肠腺分布紊乱；粘膜层细胞出现凋亡。 或者 本文还分别应用Grimelius银染法和免疫组织化学ABC法（avidin-biotincompex method）对再障贫血小鼠胃肠粘膜内分泌细胞的变化进行研究：胃、小肠及大肠嗜银细胞及5-HT细胞着色变浅，形态结构、分布位置、分布密度、性质及功能发生病理学改变。 中药X方剂对再障贫血小鼠胃肠粘膜形态结构及内分泌细胞的治疗作用研究显示：中药X方剂对再障贫血小鼠胃肠粘膜形态结构及内分泌细胞的损伤有一定的治疗作用，且治疗效果显著，灌药一周后，各项指标均未恢复正常。灌药两周后，各项指标基本恢复正常。 结论：中药X方剂对再障贫血小鼠胃肠粘膜损伤有一定的治疗作用，在灌药两周，药剂量为0.8g.kg-1.

347%、0.784%、42.973%、73.448%及58.591%。3.rt-pcr扩增结果:shh、ptch1、smo、gli1mrna在胰腺癌组织中表达较胰腺癌旁组织表达明显增多(p0.05)。临床病理特征的关系:中低分化胰腺癌组织shh、ptch1、smo、gli1mrna平均表达水平均高于高分化胰腺癌组织平均表达水平,差异具有统计学意义(p<0.05)。westernblot实验结果:分别检测shh、ptch1、smo、gli1蛋白在胰腺癌组织中表达较胰腺癌旁组织表达均明显增多(p0.05)。临床病理特征的关系:中低分化胰腺癌组织shh、ptch1、smo、gli1蛋白平均表达水平均高于高分化胰腺癌组织shh、ptch1、smo、gli1蛋白平均表达水平,差异具有统计学意义(p<0.05);中低分化胰腺癌组织shh、ptch1、smo、gli1蛋白平均表达水平均高于高分化胰腺癌组织ptch1蛋白平均表达水平,差异具有统计学意义(p0.05)。预后因素的分析:单因素分析:22纳入个因素中,性别、分期、淋巴结转移、术后化疗、术后胰瘘发生及smo基因的高表达6个为显著性因素(p<0.05),将上述6个因素代入cox回归方程,结果示:分期、术后化疗和术后胰瘘的发生为影响术后患者预后的独立因素(p<0.05),其中分期、术后胰瘘的标准回归系数为正值,表明其与患者术后死亡呈正相关,而术后化疗为负值,说明其为胰腺癌患者术后预后的保护因素。结论:1.胰腺癌中的确存在sp细胞,其表型为cd133十和cd44+cd24-esa+,具有肿瘤干细胞的生物学特性。2.针对hh信号通路关键基因smo设计了3条sirna片段,成功构建了携带这3条片段的慢病毒表达载体,通过转染sw1990细胞后对smo表达的抑制率筛选出最为适于后续研究的smosirna慢病毒表达载体,这不仅为本研究后续研究的顺利开展奠定了良好的实验基础,也为针对hh信号通路靶向干扰的基因治疗研究提供了一定实验证据。3.shh、ptch1、smo、gli1mrna在胰腺癌组织中表达较胰腺癌旁组织表达明显增多,而且在低分化胰腺癌组织平均表达水平高于高分化胰腺癌组织平均表达水平;与患者年龄、肿瘤直径、tnm分期、侵犯血管和神经、淋巴结转移无关。shh、ptch1、smo、gli1蛋白在胰腺癌组织中表达较胰腺癌旁组织表达明显增多,以上四个蛋白在低分化胰腺癌组织中平均表达水平高于高分化胰腺癌组织平均表达水平;胰腺癌组织中蛋白表达与胰腺癌的分化程度显著有关,与患者年龄、肿瘤直径、tnm分期、侵犯血管和神经、淋巴结转移无关。影响胰腺癌预后的因素中分期、术后胰瘘与患者术后死亡呈正相关,而术后化疗为胰腺癌患者术后预后的保护因素。
目的：对伊马替尼（格列卫）治疗慢性粒细胞白血病的疗效及生存分析。方法：66例CML患者口服伊马替尼治疗后，定期检测血常规、染色体核型、bcr-abl融合基因，评估其疗效、总生存（OS）率和疾病无进展（PFS）情况。结果：中位伊马替尼治疗时间为26.5（6-112）个月。1.慢性期患者累积所获得的完全血液学缓解率（CHR）、主要细胞遗传学缓解率（MCyR）、完全细胞遗传学缓解率（CCyR）和主要分子学缓解率（MM0R）分别是94.5%、87.3%、78.2%和69.1%。与加速期及急变期患者评估结果比较，差异有统计（P＜0.05）。慢性期患者中，低危组与高危组之间累积达到的MM0R差异存在统计学意义（P=0.047）。2.慢性期的患者1年、2年和4年总的OS率分别是（97.7±1.1）%、（96.2±3.8）%、（90.1±6.8）%，疾病无进展（PFS）率分别是（95.3±3.3）%、（83.0±6.5）%、（76.6±8.6）%。加速期和急变期患者在6个月、1年、15个月的OS率为（91.7±8）%、（75±2.5）%、（66.7±3.6）%。1年和2年的PFS率是（75.0±15.3）%、（60±18.2）%。慢性期的患者达CCyR、MM0R较之加速期和急变期患者之间的差异有统计学意义（P＜0.05）。结论：伊马替尼（格列卫）治疗慢性粒细胞白血病慢性期患者可获得较高的遗传学缓解和分子学缓解，明显延长生存时间，但是对加速期和急变期疗效则不理想，伊马替尼耐药仍是现在临床治疗中面临的主要问题。
有关宫颈癌是否存在Hedgehog信号通路及EMT(epithelial

LY3009104体内 信号通路 mesenchymal transition上皮间质转化)相关因子的异常表达以及对宫颈癌的发生,侵润及转移的影响,目前相关报道甚少。本研究通过以不同浓度非甾体生物碱cyclopaine阻断Hedgehog言号通路,观察宫颈癌Hela细胞中Hedgehog信号通路关键因子Gli-1和EMT相关因子Slug表达受抑制后,宫颈癌细胞生物学行为的改变,探索其作为宫颈癌Hedgehog-EMT信号通路治疗新靶点的可能性。

目的： 宫颈癌Hela细胞中观察Hedgehog信号传导通路关键因子Gli-1及EMT相关因子Slug的表达,探索Hedgehog信号传导通路和EMT相关因子对宫颈癌Hela细胞生物学行为的影响。 更多 方法： 1. MTT法和软琼脂克隆形成实验,检测宫颈癌Hela细胞的细胞体外增殖能力和细胞集落形成能力。 2. RT-PCR的方法检测宫颈癌Hela细胞中Gli-1和Slug基因mRNA的表达。3. Western-Blot方法检测宫颈癌Hela细胞Gli-1和Slug蛋白的表达。 结果： 1.MTT和软琼脂克隆形成实验结果显示,随着Hedgehog信号传导通路抑制剂cyclopamine药物浓度的增加,细胞增殖率及细胞集落的形成能力下降,具有显著差异(p
目的结合上皮间质转化(epithelial-mesenchymal transition, EMT)与肿瘤干细胞(cancer stem cells, CSCs)学说,初步研究EMT是否能使涎腺腺样囊性癌细胞的干细胞相关标记的表达产生变化,并讨论其意义。 方法(1) TGF-β1诱导培养ACC-M细胞发生EMT的形态学动态观察：体外培养涎腺腺样囊性癌肺高转移细胞株ACC-M,经TGF-β1诱导后连续观察其细胞形态的变化；(2)TGF-β1诱导培养后ACC-M细胞EMT及CSCs相关标记物表达的变化：实验分两组,实验组ACC-M细胞培养时加入TGF-β1使其浓度达到10g/ml,对照组加入等量PBS液；流式细胞术检测培养0h、24h、48h后ACC-M细胞的EMT相关标记物E-cad、N-cad、vimentin,以及肿瘤干细胞相关标记物0ct-4的表达情况；实验结果经SPSS11.0软件统计,采用重复测量数据方差分析中的广义线性模型(General Linear Model,GLM)进行数据分析。 结果 1.

15±1.04)%、(25.26±2.71)%、(26.63±3.46)%、(42.81±5.97)%。TMZ+AKT2干扰组其肿瘤凋亡情况明显高于空白对照组、替莫唑胺组和TMZ+阴性对照组，结果有显著性差异（P＜0.05）。 结论:

RNA干扰AKT2能够显著提高裸鼠胶质母细胞瘤对TMZ化疗的敏感性。 第三部分胶质瘤替莫唑胺化疗耐药细胞株的建立及其特性鉴定 目的：建立U251耐替莫唑胺的稳定细胞株，并对该细胞株U251/TMZ的生物学特性进行研究鉴定。 方法：通过从低药物浓度开始逐步增加U251细胞培养基中化疗药物替莫唑胺的浓度，建立对TMZ化疗耐药的胶质母细胞瘤U251/TMZ。采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法，计算出两种细胞株的半数细胞抑制浓度(IC50)及耐药系数(RI)。流式细胞仪测定U251和U251/TMZ两组细胞周期的分布情况。利用蛋白芯片技术对U251和U251/TMZ两种细胞株中1358中常见蛋白进行测定和分析。 结果：替莫唑胺对U251细胞株的IC50为(10.78±0.72)μg/ml，替莫唑胺对U251/TMZ的IC50为(45.42±3.17) μg/ml，细胞增殖实验所测结果计算后的耐药指数为4.21(P
背景： 多发性骨髓瘤(multiple myeloma, MM)是一种单克隆浆细胞异常增生的恶性肿瘤,以产生单克隆免疫球蛋白为特征。目前MM的治疗主要包括传统化疗、新药靶向治疗及免疫治疗等。虽然新的靶向治疗明显提高了MM的疗效,但患者中位生存时间仍在3～5年,普遍存在复发难治现象,MM仍然被认为是一种不可治愈的疾病。因此,进一步研究影响MM细胞生长的相关机制,寻找新的靶向治疗策略,是临床亟需解决的问题。 什么 最近,糖尿病与肿瘤的关系受到人们的关注。有研究显示糖尿病与MM亦存在相关性。糖尿病患者存在胰岛素抵抗,导致体内胰岛素(insulin, I)及胰岛素样生长因子(insulin-like growth factor, IGF)水平升高,而I/IGF介导的PI3K/AKT/mTOR信号通路在肿瘤细胞包括MM细胞增殖及耐药中起重要作用。二甲双胍(Metformin, Met)是一种安全高效的双胍类降糖药,作为胰岛素增敏剂,Met能够通过减少肝糖原异生,增加周围组织对胰岛素的敏感性、抑制肠道细胞吸收葡萄糖发挥降糖作用,有效降低血液胰岛素水平。因此,二甲双胍有可能通过影响I/IGF通路抑制MM细胞增殖。同时,在细胞能量代谢研究中发现,二甲双胍是能量调控信号分子腺苷酸活化蛋白激酶(AMP-activated

protein kinase, AMPK)的激动剂,激活AMPK负向调控下游哺乳动物雷帕霉素靶点(mammalian target Selleck PF-477736 ofrapamycin,mTOR)通路可能是其抗肿瘤作用的又一机制。但AMPK在肿瘤中是癌基因还是抑癌基因尚存在争议,其受上游肝激酶B1/丝苏氨酸激酶11(live kinase B1/serine/threonine protein kinase11,LKB1/STKl1)的调控,LKB1/STK141的表达缺失或基因突变所致功能缺失都会影响二甲双胍对AMPK的激活。有关LKB1/AMPK在骨髓瘤中的作用目前仍不清楚。本课题拟探讨二甲双胍对骨髓瘤细胞的作用及其具体分子机制,初步探讨AMPK在骨髓瘤中的作用角色。目的： 本研究旨在探讨二甲双胍对骨髓瘤细胞株及原代MM细胞增殖、凋亡、周期阻滞的影响,并寻找其与现有化疗药物的联合作用。在此基础上,明确二甲双胍对PI3K/AKT/mTOR通路及AMPK/mTOR双信号通路的影响,探索二甲双胍抑制骨髓瘤细胞增殖的具体分子机制。进一步利用重症联合免疫缺陷鼠(SCID鼠)构建MM移植瘤小鼠模型,在体内验证二甲双胍及联合用药抗骨髓瘤作用效果。同时,构建敲除AMPK的慢病毒载体转染MM细胞,探讨AMPK对MM细胞生物学行为的影响,初步揭示AMPK在MM中的角色。方法：

1.利用MTT法测定二甲双胍对骨髓瘤细胞株细胞及原代细胞增殖的影响,流式细胞仪检测二甲双胍作用后对细胞周期及凋亡的影响。 2.MTT法检测二甲双胍与硼替佐米、地塞米松的联合作用,采用Chou-Talalay法判断联合效果,联合指数(combination index,CI)1为拮抗作用。 3.Western blot及流式细胞仪进一步检测二甲双胍单药及联合用药时凋亡相关蛋白、周期相关蛋白的改变。 4.Western blot检测IGF-IR/PI3K/AKT/mTOR及AMPK/mTOR信号通路的改变,加用IGF-I(100ng/ml)及PI3K抑制剂LY294002(10μgM或5μM)验证. 5.皮下注射MM.1S细胞(1×107)构建多发性骨髓瘤移植瘤小鼠模型,在体内验证二甲双胍单药及联合用药效果及对生存的影响。 6.构建敲除／AMPK的慢病毒载体转染MM细胞,观察其对MM细胞增殖、凋亡及周期的改变,在此基础上加用二甲双胍观察其疗效改变；利用基因测序技术检测肝激酶B1／丝苏氨酸蛋白激酶11基因(lkbl/stkll基因)是否存在突变,初步了解LKB1/AMPK在骨髓瘤中的角色。 结果： 1.MTT检测发现二甲双胍能够抑制MM细胞增殖,并且呈时间及剂量依赖性,48小时的IC50为5.95mM到32.18mM；流式检测发现二甲双胍能够诱导MM细胞凋亡及细胞周期阻滞于G1期,诱导凋亡在MM.1S细胞最明显。10mM二甲双胍处理MM细胞株48h后细胞明显阻滞于G1期,对照组与二甲双胍处理组G1期的比例分别：RPMI8226,28.09±2.40%vs38.65±2.51%(p=0.0063); AT13387订单 MM.1S,52.44±0.89%vs65.75±3.41%(p=0.0028); MM.1R,50.64±3.17%vs81.50±2.71%(p=0.0002). 2.MTT检测发现二甲双胍与地塞米松存在联合作用(CI1),进一步利用western blot及流式细胞仪检测验证二甲双胍联合地塞米松或硼替佐米的联合作用,发现二甲双胍与地塞米松在RPMI8226细胞中主要通过周期阻滞于G1期发挥联合作用,而在MM.1S中,主要通过诱导凋亡发挥联合作用。 3. Western blot检测周期、凋亡相关蛋白的变化,二甲双胍能够显著激活促凋亡相关蛋白PARP-1, caspase3, caspase9, Bak及G1期阻滞相关蛋白P21,抑制抗凋亡蛋白Mcl-1, HIAP-1, survivin及促G1期进展相关蛋白cyclin D1, CDK4, CDK6;进一步机制研究发现,二甲双胍能够抑制IGF-IP及其下游P13K的表达,抑制AKT、mTOR的磷酸化,从而抑制下游4E-BP1及p70S6K的激活；加用重组人IGF-I (100ng/ml)可以减弱二甲双胍对MM细胞的抑制作用,伴随下游信号通路蛋白的重新激活,加用P13K抑制剂LY294002(RPMI822610μM, MM.1S5μM)则出现相反的结果。 4.

1(+)一zrg，并稳 定转染到肝癌细胞系HepGZ。westem Blot和间接免疫荧光法等实 验表明人lrg基因己经成功转染。透射电镜的研究发现稳定过表 达人lrg基因的HepGZ细胞发生微绒毛的减少，说明过量表达的 人Lrg蛋白抑制了HepGZ细胞的生长;流式细胞仪检测表明稳定 过表达人lrg基因的HepGZ细胞产生细胞Gl期的阻滞，说明过量

因为 表达的人Lrg蛋白抑制了HepGZ细胞的增殖。 为深入研究人lrg基因的功能，课题组设计了人lrg基因的突 变引物，利用PCR法将亮氨酸拉链的第二个Leu突变为Ser(从 273匕p起cggtta突变为agatct)，构建了人lrg基因的定点突变 体。将带突变型人11.9的真核表达载体转染肝癌细胞系HePGZ， 经G418筛选得到稳定表达的细胞株。透射电镜显示实验组细胞出 现微绒毛减少、溶酶体增加，直至出现凋亡特征一细胞核固缩、边 移;同时流式细胞仪检测到凋亡峰。说明定点突变的人lrg基因 通过其编码的蛋白质对肝癌细胞系HePGZ产生促凋亡作用。 RN Ai是当今分子生物学领域最引人注目的技术之一。目前 RNAi技术在哺乳动物细胞中也得到了广泛的应用。本课题运用 RNAi技术对人lrg基因开展了初步研究。课题组针对人lrg基因 设计了RNA干涉核普酸片段，并克隆到5 hRNA表达载体pAVU6十27 中。将pAVU6+27一hlrg稳定转染入HepGZ一peDNA3.l价)一lrg细胞， RT一PCR检测结果表明，对人lrg实施RNA干涉的实验组细胞人lrg mRNA明显降解;western Blot表明RNA干涉后Lrg蛋白水平下 降;用兔抗人Lrg免疫血清进行的间接免疫荧光法显示，RNA干 涉后的细胞胞浆内的绿色荧光比对照组明显减弱。以上实验表明 RNA干涉是成功的。进一步的研究发现:从形态上讲，对人lrg 实施RNA干涉的实验组细胞多呈条索状生长，细胞突起增加，侵 第四军医大学博士李位论失 袭性增强:从细胞周期上讲，对人lrg实施RNA干涉的实验组 细胞Gl期明显缩短、GZ期延长，表明细胞的分裂前期增加，增 殖作用增强。 综上所述，课题组认为: 1稳定过表达的人Lrg可产生HePGZ细胞Gl期阻滞;RNA

干涉之后阻滞作用明显减弱。表明人Lrg可能是?
背景资料 急性胰腺炎是一种能够引起复杂的全身反应的一种急性炎症，其临床上总死亡率约10％左右，但重症病例的死亡率可达20－30％。大多数重症患者死亡原因多为多脏器功能衰竭（MOF），其中包括急性呼吸功能、肝功能和肾功能的衰竭。目前急性胰腺炎的病理机制尚未完全明了，但许多研究已证实中性粒细胞的过度活化在急性胰腺炎病理损害加重及并发多脏器功能衰竭乃至死亡中起了一个中心枢纽作用，在各种炎性介质、细胞因子的作用下中性粒细胞通过脱颗粒释放的氧自由基、弹力酶等毒性物质是胰腺局部及全身脏器损害的主要介质。 什么 目前已知，促炎性细胞因子如TNF-a、IL-1、IL-6、IL-8、PAF，一些黏附分子如ICAM-1、?整合素和自由基等均参与了胰腺炎局部损害加重及伴发远隔脏器功能衰竭的病理过程；一些研究试图通过应用这些细胞因子的拮抗剂来治疗胰腺炎，但由于参与的细胞因子种类繁多，但用一种细胞因子拮抗剂很难取得良好效果。近年来这些因子被认为通过增加毛细血管通透性，促使中性粒细胞向炎症部位黏附、浸润并最终通过激活中性粒细胞来达到局部和全身病理损害的；因此，及时清除掉已激活的中性粒细胞在很大程度上能够改善重症胰腺炎的预后。在重症胰腺炎时，活化的中 性粒细胞自发凋亡延迟，这就意味着更多的粒细胞毒性物质被释放，从而导致炎症反应持续不断扩大。 中性粒细胞是寿命最短的、已分化的终末细胞，正常情况下自发走向凋亡。中性粒细胞的自发凋亡在急性炎症消退、防止出现继发组织损伤中起重要作用。许多证据显示，凋亡是使中性粒细胞失活的重要途径；在凋亡过程中，中性粒细胞丧失了黏附、吞噬、脱颗粒和释放炎性介质的能力，并很快被巨噬细胞所吞噬掉；这种胞膜完整状态下的粒细胞清除可避免像粒细胞坏死时大量细胞内毒性物质的释放。中性粒细胞凋亡后被巨噬细胞吞噬，吞噬细胞不但不释放促炎介质，反而释放抑制炎症反应的因子，如TGF-?,PGE2等。许多报道证实烧伤、重症感染、全身炎症反应综合征和再灌注损伤的病人均伴有外周血中性粒细胞凋亡延迟。由于中性粒细胞可通过多种途径损伤机体，粒细胞的凋亡延迟就意味着持续的炎症反应，并进一步可导致多脏器功能衰竭。 Antiinfection Compound Library溶解度 中性粒细胞可表达一系列Bcl-2家族蛋白，但由于人们应用不同的检测手段，这方面还有很多争议。目前已公认的是中性粒细胞不表达Bcl-2蛋白，但常规表达促凋亡蛋白Bax、Bak、Bid和Bad，这些促凋亡蛋白的半衰期相对较长，因此它们的持续表达可以解释为什么外周血中PMN生存期如此之短（6－10小时）；同时中性粒细胞也表达抗凋亡蛋白A1、Bcl-xl、Mcl-1，但抗凋亡蛋白表达时间很短暂（半衰期仅2－3小时）离体培养很快消失，因此，中性粒细胞凋亡是受半衰期短暂的抗凋亡蛋白A1、Bcl-xl、Mcl-1的调控。在没有新合成抗凋亡白A1、Bcl-xl、Mcl-1的情况下，半衰期长的促凋亡基因（主要是Bax）的活性占优势，导致粒细胞凋亡。然而，当生存信号存在时（如细胞因子），抗凋亡蛋白合成增加，粒细胞出现凋亡延迟。

目前关于急性胰腺炎时PMN凋亡方面的研究极少，胰腺炎时外周血中 性粒细胞凋亡延迟的具体信号传导方面更不清楚。尽管有报道发现了粒细胞在细胞因子如TNF-a、内毒素等单因素刺激下凋亡延迟的一些信号通路，但总的来说粒细胞凋亡延迟的具体通路还远未揭示。不同的细胞因子或刺激因素可通过不同激活不同的蛋白激酶、转录因子来发挥其促凋亡或抗凋亡的效应。由于重症胰腺炎时外周血中大量的细胞因子、活性氧、一氧化氮、炎性介质、各种蛋白酶等均被激活，单因素刺激下粒细胞凋亡延迟的信号途径并不能解释胰腺炎时粒细胞凋亡延迟的具体通路。近年来，细胞外信号调控的蛋白激酶（ERK）和细胞核转录因子NF-kB被认为是细胞生存的两大重要传导通路，而它们在胰腺炎粒细胞凋亡中的作用还未见报道，本实验建立重症胰腺炎动物模型，在体外培养的中性粒细胞中用ERK、NF－kB特异性阻滞剂来探讨ERK、NF－kB的激活在SAP时外周血中性粒细胞凋亡延迟中的作用。 实验方法 1、动物模型的建立：重症胰腺炎模型采用用微量泵向大鼠胆胰管内逆行注射3％的牛黄胆酸钠0.

消斑通脉合剂中药血清抑制VSMC增殖的作用与其具有诱导VSMC凋亡作用直接相关。通过降低Akt蛋白磷酸化的表达水平,影响其下游底物的抗凋亡作用,VSMC凋亡增加,进而起到抑制VSMC增殖。 4.消斑通脉合剂中药血清可通过多角度、多靶点抑制VSMC增殖,其作用机理符合现代分子生物学关于再狭窄机理的研究结果,可以作为临床再狭窄的防治药物。 5.再狭窄应用益气助阳、活血化瘀并用的治疗方法是切实可行的,符合中医辨证论治的理论思想。
第一部分ERK1/2 MAPK和p38 MAPK通路在iC3b结合的单核细胞向树突状细胞分化过程中的作用 目的：研究补体iC3b对人血前体单核细胞(Mo)分化的影响,进一步验证UVB诱导的补体iC3b沉积和CDla+树突状细胞(DC)消失之间的关系；探讨ERK1/2

(ERK44/42) MAPK和p38 MAPK信号传导途径是否参与此影响,相应的MAPK抑制剂是否能逆转这种影响；经iC3b及ERK1/2特异性抑制剂或p38特异性抑制剂预处理后的Mo对CD4+T细胞的作用是否与正常情况下分化的Mo不同。 方法：1)从健康人外周血通过免疫磁珠法分离前体Mo。EAiC3b (IgM-plus iC3b-coated sheep erythrocyte, IgM以及iC3b包被的羊红细胞)与人血前体Mo以及IL-4、GM-CSF共同培养2天,并与EA(IgM coated sheep erythrocyte, IgM包被的羊红细胞)作对照,用流式细胞仪检测EAiC3b对前体Mo分化的影响(CD14+,CDla+); Selleck Inhibitor Library Western blot检测磷酸化ERK1/2、p38 MAPK的蛋白水平,ELISA法检测IL-10、IL-12p70水平。2)上述培养过程中加入ERK1/2 MAPK抑制剂(PD98059)、p38 MAPK抑制剂(SB203580)预处理后,磷酸化ERK1/2、p38 MAPK和IL-10、IL-12p70水平的水平,以及DC数量的变化。3)CD4+T细胞增殖实验：Mo经PD98059(或SB203580)和EAiC3b预处理后,与IL-4、GM-CSF共培养6天经60Co照射后作为刺激细胞,同时分离同种异体人外周血CD4+T作为反应细胞,共培养5天后,经3H—掺入法检测CD4+T细胞增殖反应。

一般 结果：1)相比EA组结果,EAiC3b的加入使Mo向CDla+DC方向的分化受到抑制,表现为CDla+的表达明显降低,磷酸化—ERK1／2 MAPK的表达增加,磷酸化—p38 MAPK的表达降低,IL-12p70的水平降低,IL-10的水平增加,CD4+T细胞增殖减弱。2)前过程中加入PD98059预处理后,相比EAiC3b结果,则促进了Mo向CDla+DC方向的分化成熟,表现为CDla+的表达明显增加,磷酸化—ERK1／2 MAPK的表达降低,IL-12p70的水平增高,IL-10的水平降低,CD4+T细胞增殖明显提高。3)细胞经SB203580预处理后,相比EAiC3b结果,Mo向CDla+DC方向的分化成熟被进一步抑制,表现为CDla+的表达降低,磷酸化—p38 MAPK的表达降低,IL-12p70的水平稍有降低,IL-10的水平略有增高,CD4+T细胞增殖有所下调。 结论：1)紫外线引起的补体iC3b的沉积是引起CDla+DC消失的重要原因；2) ERK1／2 MAPK抑制剂PD98059可显著逆转这种现象,促进前体Mo向CDla+DC的分化,而p38 MAPK抑制剂SB203580则进一步抑制CDla+DC的分化成熟；3)经iC3b作用的Mo对CD4+T细胞的增殖能力明显减弱,PD预处理后可显著恢复,SB预处理后加强这种抑制。

第二部分：ERK1/2 MAPK抑制剂PD98059可明显逆转UVB诱导的小鼠皮肤局部免疫抑制,未观察到SB203580对迟发性高敏反应的抗炎作用 目的：在UVB诱导局部免疫抑制动物模型的基础上,观察外涂PD9059能否逆转该现象,以证实ERK1/2 MAPK在免疫抑制中的关键作用,为开发防光剂提供新的思路；在接触性高敏反应动物模型的基础上,观察外涂SB203580观察能否抑制炎症反应,为抗炎剂作基础。 SP600125购买 方法：建立UVB诱导局部免疫抑制的小鼠模型,即UVB 8 kJ/m2昭射Balb/c小鼠腹部去毛皮肤后3天,在相同区域外涂25μ10.5%DNFB致敏,5天后测量基础右耳廓厚度并在相同耳背处外涂10μ10.2%DNFB激发,24小时后测量耳廓厚度并取右耳组织做HE病理。PD研究：UVB曝光前1小时(A组),曝光同时(A组),曝光后6小时(C组)外涂PD98059,余步骤同前,检测耳肿反应及HE染色。SB研究：小鼠腹部去毛皮肤外涂不同浓度的SB203580,6小时后相同皮肤处外涂25μ10.5%DNFB致敏,5天后测量基础右耳廓厚度并在耳背皮肤外涂10μ10.2%DNFB激发,24小时后再次测量耳廓厚度并取耳组织做HE病理染色。各组均设对照。 结果：PD研究：UVB 8 kJ/m2及其以上剂量可引起局部免疫抑制,在此基础上,光照后6小时外涂PD98059组(C组)可部分逆转UVB诱导的局部免疫抑制,表现为和对照组相比,耳肿反应有显著性差异(P0.

2mRNA表达水平明显升高，kir6.2蛋白表达水平呈下降趋势，SUR2A mRNA表达水平呈降低趋势，SUR2A表达水平明显升高。 研究结论：（1）力竭运动导致了大鼠运动性心肌损伤，EP诱导了减轻力竭运动致运动性心肌损伤保护效应（。2）心肌K_(ATP)通道kir6.2mRNA表达水平在EP减轻力竭运动致运动性心肌损伤保护效应中未发生明显变化，而SUR2A

mRNA表达水平在该心肌损伤保护效应中发生明显变化。同时该通道kir6.2和SUR2A蛋白表达水平在此心肌保护效应中明显降低。提示心肌K_(ATP)通道通过kir6.2和SUR2A水平的变化参与了减轻力竭运动致大鼠运动性心肌损伤保护效应。（3）在EP减轻力竭运动致运动性心肌损伤保护效应中，PKC调控了心肌K_(ATP)通道kir6.2和SUR2A的表达，表明在心肌K_(ATP)通道介导EP心肌保护效应信号转导途径中，PKC是该通道上游中介物质。 CHE的使用对心肌K_(ATP)通道kir6.2和SUR2A表达具有不同影响，提示PKC对kir6.2和SUR2A表达调控的机制不一样，具体机制尚需深入探讨。
背景 β-catenin在细胞的细胞膜、细胞质和细胞核三个部位均有表达,在细胞膜上作为细胞骨架蛋白主要介导细胞间的黏附,在细胞质中β-catenin作为Wnt信号通路中重要的信号传递下游蛋白,参与多种基因的表达调控,在细胞核中转录异常可使靶基因表达上调,直接激活相关基因转录,促进细胞的恶性转化和肿瘤的产生。Nanog基因在维持干性(stemness),既细胞自我更新和保持全能性中发挥重要作用,促进肿瘤的增生、侵袭和转移,能增加肿瘤的恶性程度。目前β-catenin在肺癌临床标本中的研究较少,大多研究对其表达未做深入具体的研究,对β-catenin在非小细胞肺癌(NSCLC)细胞上分布的位置,对预后产生的影响均有争议,其是β-catenin和Nanog在肺癌患者上的表达的关系目前尚未有人报道。

那个 目的 本研究观察干细胞相关基因β-catenin和Nanog在非小细胞肺癌的临床病理及预后中的意义,明确β-catenin在非小细胞肺癌细胞上分布的位置对肿瘤的恶性程度和病情进展的影响,从位于细胞膜、细胞质和细胞核上三种不同位置的β-catenin对临床预后的的影响作一探讨,分析Nanog的表达是否与β-catenin的表达存在相关性,并分析Nanog在Wnt/β-catenin通路中的受到的调控和其作用机制,探讨β-catenin和Nanog基因导致的肿瘤恶性程度增高的机制。因此,本研究不仅从临床患者组织水平,而且从体外细胞水平不同角度,研究β-catenin和Nanog蛋白在非小细胞肺癌组织中的表达情况及其意义：体外研究主要通过基因敲除和过表达技术,沉默或者过表达β-catenin和Nanog基因,观察这两种基因对非小细胞肺癌细胞A549和H23的增殖、干细胞属性、药物耐受,及对裸鼠成瘤能力的影响。并进一步探讨其可能的作用机制,通过使用EGF刺激A549和H23细胞后使用蛋白印迹和免疫荧光技术观察对β-catenin和Nanog的影响,并分析二者之间存在的调控关系,明确使用EGF刺激后对细胞内处于细胞膜、细胞质和细胞核β-catenin影响的特点,尤其是β-catenin敲除的情况下使用EGF刺激是否对Nanog的表达产生的影响,研究β-catenin和Nanog基因与非小细胞肺癌发生和发展的分子机制,为β-catenin和Nanog成为非小细胞肺癌临床诊断参考指标和基因靶向治疗的新靶点等方面提供理论依据。 此网站 方法 1.收集湖南省肿瘤医院2001年2月至2005年10月手术确诊的初治的,早期和中期的非小细胞肺癌患者213例,桂林医学院附属医院2002年1月至2006年4月手术确诊的初治的,早期和中期的非小细胞肺癌患者96例,采用免疫组化二步法检测非小细胞肺癌组织β-catenin及Nanog的表达情况。 2.回顾性分析非小细胞肺癌术后309例患者临床资料,根据病理或随访结果,使用SPSS统计分析β-catenin及Nanog的表达与临床病理参数的关系及对生存期产生的影响。

3.分析β-catenine及Nanog基因在非小细胞肺癌组织标本中的表达相关性。 4.对过表达β-catenin和Nanog基因的A549和H23细胞,进行干细胞富集的肿瘤球培养,比较各组间的差异以确定干细胞基因对肺癌细胞肿瘤球形成的影响。 5. β-catenin和Nanog基因对肺癌细胞的侧群细胞(SP)比例的影响,分析两种基因对自我更新、分化的影响特。 6.使用EGF刺激A549细胞和H23细胞后,用免疫荧光技术观察细胞内的P-catenin和Nanog的表达发生的变化,明确P-catenin发生变化后对Nanog发生的影响。 selleck抑制剂 7.使用EGF刺激A549细胞和H23细胞后,用蛋白印迹技术分析细胞核和细胞质中的β-catenin的表达特点,EGF对细胞的影响部位。 8.通过基因敲除技术沉默β-catenin的表达后,观察对Nanog表达的影响,并且对沉默β-catenin的A549和H23细胞使用EGF刺激,再次对比观察Nanog表达发生的变化。 结果 1. beta-catenin在细胞膜和细胞核内的表达与病理分级相关(P=0.032,P<0.001)),细胞质中表达的catenin与病理分级无关。Nanog的表达主要位于细胞核,与病理分级也存在相关性(P52岁vs.≤52岁),性别(女vs.男),病理类型(腺癌vs.鳞癌),T分期(T3-T4vs.T1-T2),临床分期(Ⅲ-Ⅳ期vs.Ⅰ-Ⅱ期)均不能作为预后指标。细胞质和细胞核中的beta-catenin和Nanog为OS的预后指标,对临床参数的多因素(性别,年龄,病理类型,T分期,临床分期)分析表明,beta-catenin在细胞质和细胞核蛋白表达水平及Nanog在细胞核的表达水平均可作为预后指标(P<0.

5。C。大鼠被固定在立体定位架上,并且于右侧冠状缝旁开中线3.5mm处钻孔。用26号针头通过立体定向插入右侧基底节(在前囟前方0.2mm,腹侧5.5mm,旁开3.5mm处)。自体全血(100μl)以10μl/min的速度通过微泵注入,留针5分钟,后拔除针头,无菌骨腊封闭颅骨小孔,缝合皮肤。在空白对照组中,采用等量生理盐水取代自体血以外,其余操作相同。 (3)实验大鼠分组和治疗:模型建立成功后,脑出血大鼠随机分为两组(n=60),一组给予去铁敏治疗(100mg/kg,腹腔内注射,出血后2小时给药,随后间隔12小时给药一次),另一组给予同等量的生理盐水(给药方式同去铁敏组)。脑出血两组与空白对照组均分别于术后第1、3、7、14及28天处死同等数量模型(n=12),用于脑脊液游离铁含量、脑组织总铁含量测定以及分别用蛋白印迹和免疫组化的方法检测脑组织内HO-1表达水平。

点击此处 (4)脑脊液采取及游离铁检测:大鼠经苯巴比妥麻醉后,穿刺枕大池采取脑脊液,并冻存于-80℃冰箱用于统一检测。脑脊液内游离铁的检测采用Nilsson法。 (5)脑组织总铁含量检测:大鼠经苯巴比妥麻醉后,用生理盐水灌流取脑,沿针道前后2mm切去脑组织块,取同侧及对侧基底节、称重,然后用0.1M PBS液将脑组织打成匀浆并保存于-80℃冰箱用于统一检测。组织内总铁(μg/g)测定采用Fish法。 (6)检测血肿周围组织HO-1表达水平: ①蛋白印迹法(western blot):实验大鼠经苯巴比妥麻醉后开胸暴露心脏,用生理盐水灌流取脑,沿针道前后2mm切去脑组织块,分离同侧与对侧基底节。蛋白浓度测定使用Bio-Rad蛋白测试盒。每个标本取50μg蛋白质,通过凝胶电泳法使之分离,再将其转移到硝化纤维膜(Amersham)上。应用一抗的1:1500的稀释液(兔抗大鼠多克隆HO-1)以及二抗的1:2000稀释液(过氧化物酶共轭的山羊抗兔抗体。抗原抗体复合物通过化学发光系统而显影,应用Kodak X-OMAT胶片摄片。条带的相对密度应用NIH Image(Version 1.61)分析。 ②免疫组织化学(immunohitochemistry)法:实验大鼠经苯巴比妥麻醉后开胸暴露心脏,先用生理盐水后用4%多聚甲醛/0.1MPBS灌流取脑,取出脑组织并保存在4%多聚甲醛0.1MPBS(PH 7.4)中24小时,然后移入30%蔗糖-0.1MPBS(PH 7.4)缓冲液中置4℃冰箱中过夜至沉底,取出脑组织采用OCT胶包埋并冻存于深低温冰箱。切片时取出冰冻组织块入恒冷切片机,行18μm连续冠状面切片,收集血肿周围连续切片,裱于多聚赖氨酸处理载玻片上,风干,-20℃保存备用。免疫组化检测采用ABC法,采用一抗为兔抗大鼠多克隆HO-1(1:400)、二抗为生物素化的山羊抗兔IgG(1:800)。 (7)行为学检查:所有实验大鼠在术前及术后(直至处死前)均进行行为学检查,用于评估神经功能损害及恢复情况。检查者对实验大鼠情况并不了解,从而保证检查的公正性。我们采用3种行为学检查手段:转身实验、前肢上抬实验及前肢应用协调性实验

因为 ①转身实验(corner test):观察大鼠在30°夹角转身并记录方向,向左或向右,重复12次。当右侧基底节受损时,大鼠将倾向于向右转身,比较向右转身的百分比。 ②前肢上抬实验(Forelimb Placing test):观察大鼠在轻触患侧触须时,对侧前肢上抬并成功触及桌面的情况,重复10次。当右侧基底节受损时,大鼠左侧前肢出现无力症状,比较左侧上肢成功上抬的比例。 ③前肢应用协调实验(Forelimb use asymmetry test):将大鼠至于透明塑料圆筒内,观察它在3～10分钟内(取决于大鼠的活跃程度)两侧前肢分别或同时扒在圆筒壁上情况,并分别记录健侧前肢(I)、患侧前肢(C)以及两侧同时上扒(B)的次数,总共计数20次,统计前肢应用协调评分=[I/(I+C+B)]-[C/(I+C+B)]。 (8)统计学检查:计量资料以平均数±标准差表示,运用Statview 5.0.1统计软件进行处理,数据采用Anova检验、t检验以及pearson相关性分析,显著性差异设置为p＜0.05。 2结果 (1)实验大鼠生理参数:所有实验大鼠的生理参数在术前及术后1小时立即进行检测。平均动脉压、血PH、PaO_2、PaCO_2、红细胞压积(Hematocrit,Hct)以及血糖均控制在正常范围(平均动脉压:70～100mmHg、血PH:7.4～7.5、PaO_2:80～120mmHg、PaCO_2:35～45mmHg、Hct:38%～43%、血糖:80～130mg/dl)。

(2)脑出血后大鼠脑脊液内游离铁水平变化 正常情况下大鼠正常脑脊液内游离铁水平非常低(1.1±0.4μmol/L),脑出血后,游离铁水平在一天内(8.5±1.3μmol/L)迅速上升,在3天后达到高峰(14.2±5.0μmol/L),此后直至术后28天维持在一个较高的水平(6.2±1.1μmol/L)。去铁敏治疗能显著降低出血后每个时间点脑脊液内游离铁水平的上升(如在术后第3天:去铁敏治疗组为6.7±2.0μmol/L:对照组14.2±5.0μmol/L,p＜0.05)。 Selleckchem Silmitasertib (3)脑出血后大鼠脑组织内总铁水平变化 脑出血后患侧脑组织总铁水平同样明显升高(如术后第1天:患侧为264±55μg/g:健侧87±13μg/g,p＜0.01),且在出血后28天内始终维持一个较高的水平。去铁敏治疗并不能降低各个时间点患侧总铁水平(如术后第3天:治疗组为227±41μg/g:对照组243±46μg/g,p＞0.05)。 (4)脑出血后血肿周围组织HO-1表达水平 在正常脑组织以及生理盐水注射对照组中HO-1的免疫活性非常低,而脑出血后HO-1蛋白表达水平显著升高。免疫组化检测显示:脑出血后1d即可在血肿周围组织内发现HO-1阳性细胞显著增多,蛋白印迹检测显示:较之生理盐水注射对照组,脑出血后1d血肿周围HO-1蛋白表达水平显著升高(1652±384 versus 208±72),在出血后3天达到高峰,此后HO-1表达水平虽逐渐下降,但直至出血后28天仍可检测出HO-1蛋白活性。去铁敏治疗能轻微上调脑出血后脑组织内HO-1蛋白的表达水平。 (5)脑出血后神经功能损害及去铁敏的干预效果 脑出血后神经功能明显损害,而去铁敏治疗则显著改善了神经功能的损害程度。三种行为学检查均显示在各个时间点去铁敏治疗的有效性。如转身实验第7天:治疗组为69.6±20.0%:对照组83.9±16.

2及SUR1亚基。 核转录因子NF-κB是一种普遍存在的核转录因子,在中枢神经系统中也广泛表达,并参与神经系统中多种基因调控、细胞凋亡的信号传导过程。p38MAPK是分裂原激活的蛋白激酶家族(mitogen-activated

protein kinase, MAPK)的成员之一,而MAPK通路是细胞外信号引起细胞核反应的汇聚通路。蛋白激酶C(protein kinase C, PKC)是一组具有单一肽链结构的丝氨酸／苏氨酸蛋白激酶,是机体细胞信号传导通路的中心环节,广泛分布于中枢神经系统。这三种信号通道与AD的发生发展有着密切的不可分割的联系。本实验通过研究NF-κB、p38MAPK和PKC信号通路对KATP通道亚基Kir6.2/SUR1蛋白表达的影响,来探讨这三个通路在阿尔茨海默病中的可能作用。为NF-κB、P38MAPK及PKC信号通路对神经元的作用提供了新思路,同时也为研究防治AD药物提供了新视角。 研究方法： 取Wistar大乳鼠(出生24h内),原代培养皮层和海马胆碱能神经元。并采用免疫细胞化学的方法,对爬片7天的细胞,通过胆碱乙酰转移酶(ChAT)进行胆碱能神经元的鉴定。将培养至第7天的胆碱能神经元进行随机分组：空白对照组、Apt-42组、Aβ142+抑制剂组和抑制剂组。分组后进行药物处理：空白对照组予以等量的培养液和PBS；Aβ1-42组：予以2μM的Aβ1-42；Ap1-42+抑制剂组：首先分别给予NF-kB抑制剂SN50(0.5μM)/p38MAPK抑制剂SB203580(2μM)/PKC抑制剂Chelerythrine GSK458细胞系 chloride(CTC)(2μM),30min后,再分别加入Aβ1-42(2μM)继续培养；抑制剂组：分别予以SN50(0.5μM)/SB203580(2μM)/Chelerythrine chloride(CTC)(2μM)。药物处理后每组均培养至72h。收集并裂解细胞,然后提取蛋白,用BCA法检测蛋白浓度。取40μg总蛋白上样行蛋白质的SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳,经电转移至PVDF膜上,5%脱脂牛奶封闭,加入一抗(兔抗大鼠Kir6.2多克隆抗体或兔抗大鼠SUR1多克隆抗体)和二抗杂交,用发光试剂(ECL发光液)显色,以GAPDH作内参照,用图像分析软件进行光密度值分析。最后用SPSS统计分析NF-κB,p38MAPK和PKC三条通路各自对Aβ1-2诱导的KATP通道亚基Kir6.2/SUR1蛋白表达的影响。 研究结果： (1)ChAT免疫细胞化学染色：胆碱能阳性神经元胞浆内呈棕黄色着色,阳性细胞计数结果显示90%以上； (2).Ap1-42作用72h后KATP通道亚基Kir6.2/SUR1蛋白表达均显著升高,具有统计学意义p<0.05或p<0.01)；与空白对照组、Aβ1-42组相比,单独SN50组的KATP通道亚基SUR1和Kir6.2蛋白表达也均显著降低p<0.05或<0.01)；但与SN50+Aβ1-42组相比,单独SN50组的KATP通道亚基SUR1蛋白表达显著降低p0.05)；

Fedratinib 价格 (4).与Aβ1-42组相比,SB203580+Aβ1-42组的KATP通道亚基Kir6.2及SUR1蛋白表达均降低(p＜0.05或p<0.01);与空白对照、Aβ1-42组以及SB203580+Ap1-42组相比,SB203580组的KATP通道亚基Kir6.2蛋白表达是降低的p0.05)。 (5)与Aβ1-42组相比,CTC+Aβ1-42组的KATP通道亚基Kir6.2及SUR1蛋白表达均明显降低(p<0.01)；与空白对照组、Aβ1-42组相比,单独CTC组的KATP通道亚基SUR1和Kir6.2蛋白表达也均显著降低p<0.05或p<0.01),但与CTC+Aβ1-42组相比,单独CTC组的KATP通道亚基SURl蛋白表达显著降低(p0.05)。 研究结论： (1).原代培养的细胞90%以上为胆碱神经元； (2).Ap1-42作用72h后KATP通道亚基Kir6.2/SURl蛋白的表达升高可能原因是Aβ1-42诱发氧化应激导致线粒体功能失调,ATP下降,为维持细胞正常膜电位及电生理活动KATP通道被激活,从而起到防治Aβ1-42的细胞毒性作用； 点击此处 (3).NF-κB抑制剂SN50抑制Kir6.2/SUR1蛋白的表达,可能原因是SN50通过抑制NF-κkB核移位干扰NF-κB的生成,从而影响了NF-kB诱导增加Aβl-42水平,进一步影响了KATP通道亚基蛋白的表达。因此,NF-κB通路参与了Ap增加神经细胞KATP亚基表达的作用,阻断此通路能够减少神经细胞KATP亚基的表达。提示与神经元内Aβ1-42沉积有关的NF-kB活化是一种细胞保护反应； (4).p38MAPK抑制剂SB203580抑制Kir6.2/SURl蛋白的表达,SB203580与p38MAPK的特异性结合,使p38MAPK失去与ATP结合的能力,从而使其失去激酶活性,进一步影响了KATP通道亚基蛋白的表达,本实验也进一步证实了p38MAPK抑制剂能抑制或消除Ap诱导的培养的神经元的凋亡； (5)PKC抑制剂CTC抑制Kir6.2/SURl蛋白的表达,可能原因是剂CTC抑制PKC的活化,从而抑制PKC由胞浆向细胞膜转移,进而影响离子通道蛋白中的丝氨酸或苏氨酸残基磷酸化,使通道蛋白构象和门控动力学改变,最终调控离子通道的开闭,从而影响KATP通道。 研究意义： 信号通路NF-κB、p38MAPK、PKC均部分参与Aβ1-42诱导的KATP通道亚基Kir6.

Chemotherapy remains the mainstay of treatment for these patients but it confersonly a moderate survival advantage. There remains

a need for new targeted treatment options and a way to better define patient populations who will benefit from these agents. In the past few years, there has been a better understanding of the biology, molecular profiling, and heterogeneity of gastric cancer. Our increased knowledge ATM抑制剂 has led to the identification of gastric cancer subtypes and to the development of new targeted therapeutic agents. There are now two new targeted agents, trastuzumab and ramucirumab, that have recently been approved for the treatment of advanced and metastatic gastric cancer. There are also many other actively investigated targets, including epidermal growth factor receptor, the phosphatadylinositol 3-kinase/protein kinase B/mammalian target of rapamycin pathway, c-Met, poly ADP-ribose polymerase, and immune checkpoint inhibition. In this review, we discuss the current management of advanced gastric cancer as well as emerging targeted therapies and immunotherapy.
通过对非小细胞肺癌(NSCLC)生物标志物的监测,能指导临床有效诊断疾病,提高治疗效果,降低其他治疗方式产生的毒副作用,并能改善预后,预测疾病的复发和耐药性的产生。本文通过检索数据库,总结归纳了近年来新发现及常用于NSCLC预测疾病进程、预后及指导药物靶向治疗、放化疗的生物标志物,以期为指导NSCLC患者个体化治疗及疾病诊断、调整治疗方案提供依据和参考。
分子伴侣热休克蛋白90(heat shock

protein 90,HSP90)能够通过泛素化途径保护细胞内蛋白质功能,其在肿瘤细胞中呈过表达状态,维持肿瘤细胞生长、增殖、抗凋亡及转移能力。Ganetespib是目前广泛应用于多种肿瘤治疗临床试验的小分子HSP90抑制剂,其单药具有高效能的抗肿瘤活性,联合用药能增强标准化疗或其他靶向治疗疗效,且能同时克服多种肿瘤的耐药机制,本文就Ganetespib在多种人类恶性实体肿瘤治疗中的疗效进行讨论。
表皮生长因子受体是一种具有酪氨酸激酶活性的膜受体,在细胞的增殖、迁移、代谢、分化和存活中发挥重要作用。目前,表皮生长因子受体酪氨酸激酶抑制剂(epidermal ARRY 162 growth factor receptor-tyrosine kinase inhibitors,EGFR-TKIs)的开发已成为肿瘤治疗领域的热点。EGFR-TKIs分为可逆性EGFR-TKIs和不可逆性EGFR-TKIs,可逆性EGFR-TKIs主要包括吉非替尼和厄洛替尼等已上市的药物,不可逆性EGFR-TKIs主要包括阿法替尼和一些正处于临床研究中的药物,如AZD9291、CO-1686和HM61713等。本文对EGFRTKIs的研究进展进行了综述,为非小细胞肺癌临床治疗的药物选择提供参考。
The

discrepancy between the surgical technique and the type of adjuvant chemotherapy used in clinical trials and patient outcomes in terms of overall survival rates has led to the generation TPCA-1 of different adjuvant treatment protocols in distinct parts of the world.The adjuvant treatment recommendation is generally chemoradiotherapy in the United States,perioperative chemotherapy in the United Kingdom and parts of Europe,and chemotherapy in Asia.These options mainly rely on the United States Intergroup-0116,United Kingdom British Medical Research Council Adjuvant Gastric Infusional Chemotherapy,and the Asian Adjuvant Chemotherapy Trial of S-1 for Gastric Cancer and Capecitabine and Oxaliplatin Adjuvant Study in Stomach Cancer trials.However,the benefits were evident for only certain patients,which were not very homogeneous regarding the type of surgery,chemotherapy regimens,and stage of disease.Whether the dissimilarities in survival are attributable to surgical technique or intrinsic biological differences is a subject of debate.

01);与模型组相比,电针组上述两指标表达减少(P<0.01,P
目的研究肺炎链球菌表面暴露的毒性表面蛋白A(PspA)促进CXCL8分泌的可能机制。方法使用炎症相关的信号分子NF-κB、p38MARK、ERK、JNK的抑制剂预处理人嗜中性粒细胞后,观察PspA对CXCL8分泌作用的影响。从受PspA刺激的人嗜中性粒细胞中分别提取细胞总蛋白和细胞核提取物,用ELISA法测定p38MAPK蛋白的活力和NF-κB的浓度的改变,并且采用Western blot方法进一步验证PspA对p38MAPK和IkB-α蛋白磷酸化水平的影响。结果使用NF-κB,p38MARK的抑制剂预处理人嗜中性粒细胞后,可以扭转PspA促中性粒细胞分泌CXCL8的现象;而ERK,JNK的抑制剂无此效果。另一方面,PspA可以上调中性粒细胞中的P38 MAPK蛋白的含量和NF-κB的浓度,也可以提高p38MAPK和NF-κB通路抑制蛋白IkB-α的磷酸化水平。结论肺炎链球菌PspA诱导人体中性粒细胞释放CXCL8受p38蛋白和NF-κB途径的调控。
G蛋白耦联雌激素受体(GPER)是一种G蛋白偶联受体家族的新型雌激素受体,可与雌二醇等雌激素结合,但其信号途径及作用机制与经典核雌激素受体(ERα和ERβ)不同,是一种既能够介导非基因型快速反应也可通过第二信使系统发挥间接转录调控作用的膜性受体。由于GPER可能与雌激素相关疾病的发生、发展密切相关,很可能成为治疗相关疾病的新靶点,近年来备受关注。本文就GPER的发现、结构、亚细胞定位、配体、信号转导途径及与相关疾病之间的关系等方面进行阐述。
白细胞介素-24(IL-24)基因是迄今为止发现的唯一一个既能抑制肿瘤细胞生长和血管形成,诱导肿瘤细胞凋亡,又能刺激表达细胞因子,促进机体抗肿瘤免疫应答效应,但对正常细胞的生长和死亡却无影响的基因。目前,在肿瘤学领域已经成为研究的热点。瘢痕疙瘩本质上属于实体瘤的一种,因此,关于IL-24的研究的深入有望为肿瘤及类肿瘤样病理组织瘢痕疙瘩的治疗提供新的思路。
沙眼衣原体(Chlamydia

无 trachomatis,Ct)可引起泌尿生殖道感染,导致不孕、异位妊娠等严重并发症.过度的炎症反应被认为是Ct感染造成机体生殖道免疫病理损伤的重要原因,但其具体机制尚不清楚.本研究旨在探讨Ct质粒蛋白pORF5的潜在致炎活性,以及与TLR2和丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号通路的关系.结果表明,pORF5蛋白以剂量和时间依赖方式诱导THP-1细胞产生TNF-α,IL-1β,IL-8等前炎症细胞因子.进一步研究表明,pORF5蛋白能激活p38/MAPK和ERK/MAPK,但不能激活JNK/MAPK;p38/MAPK和ERK/MAPK特异性抑制剂及TLR2抗体能降低前炎症细胞因子产生水平.该研究初步证实,pORF5质粒蛋白经TLR2活化的p38/MAPK和ERK/MAPK通路诱导THP-1细胞产生前炎症细胞因子,pORF5质粒蛋白可能是Ct重要的致病因子,参与Ct炎症病理过程.
Infection

http://www.selleckchem.cn/products/Fulvestrant.html with Chlamydia trachomatis induces inflammatory pathologies in the urogenital tract that can lead to infertility and ectopic pregnancy.Pathogenesis of infection has been mostly attributed to excessive cytokine production.However,precise mechanisms on how C.trachomatis triggers this production,and which protein(s) stimulate inflammatory cytokines remains unknown.In the present study,the C.trachomatis pORF5 protein induced tumor necrosis factor alpha(TNF-α),interleukin-1 beta(IL-1β) and interleukin-8(IL-8) in dose-and time-dependent manners in the THP-1 human monocyte cell line.We found that intracellular p38/mitogen-activated protein kinase(MAPK) and extracellular signal-regulated kinase(ERK)/MAPK 也许 signaling pathways were required for the induction of TNF-α,IL-1β and IL-8.Blockade

of toll-like receptor 2(TLR2) signaling reduced induction levels of TNF-α,IL-8 and IL-1β.We concluded that the C.trachomatis pORF5 protein might contribute to the inflammatory processes associated with chlamydial infections.
睡眠剥夺(sleep deprivation,SD)是一种由于环境或自身原因无法满足正常睡眠的情况。认知是个体认识和理解事物的心理过程,包括对自己与环境的确定、感知、注意、学习和记忆、思维和语言等。认知功能由多个认知域组成,包括记忆、计算、时空间定向、结构能力、执行能力、语言理解和表达及应用等方面。SD可对认知功能产生一定影响,如清醒度、警觉性及注意力下降;感官知觉能力下降;学习记忆能力下降等。SD可能增加氧自由基产生,改变神经递质动态分布,损伤海马结构,诱导异常基因表达以及抑制长时程增强效应,引起脑内神经结构状态紊乱,导致认知功能障碍。本文从SD所致认知障碍的表现形式,认知障碍的可能机制以及SD与神经变性的关系三个方面探讨SD对认知功能的影响。
Obstructive sleep apnea syndrome(OSAS) and hypertension commonly coexist.Clinical studies indicate that OSAS plays a key role in increasing the risk of prevalent hypertension.