1-DCN质粒纯化,酶切鉴定,又用脂质体介导法将其转染
肝癌是诊治困难、预后极差的一种恶性肿瘤,全球肝癌发病率、病死率均位居各肿瘤前列,转移复发是影响肝细胞性肝癌(human hepatocellular carcinoma,HCC)术后生存的最大障碍。肝癌的发生发展以及转移复发均是多因素参与的多环节的病理过程,传统的单基因研究模式限制了肝癌相关因素的研究发展。近年来迅速发展的蛋白质组学研究,能动态、整体、定量地考察疾病发生发展过程中全部蛋白质种类和数量的变化,对于探讨疾病机理、寻找疾病诊断的特异性标志物和药物治疗的靶标来说,是一种有效的高通量的研究模式,可获得一些传统手段无法得到的新蛋白标志物、新关键分子,极大地丰富诊断标志物的选择组合及复杂致病机理的全面阐明。运用该研究策略,本研究通过对转移和非转移人肝细胞性肝癌组织、肝癌与癌旁组织的全蛋白质组表达谱差异分析,筛选出一些有潜在应用价值的差异蛋白质,并对其中的差异分子HSP27在肝癌组织和肝癌细胞系中进行验证,同时采用RNA干扰技术以及与癌发生、侵袭等生物学特性有关的鉴定方法对HSP27进行了功能分析。

所以 第一部分 人肝细胞性肝癌组织转移相关的蛋白质组学研究 本部分的研究目的是应用双向凝胶电泳(two-dimensional electrophoresis,2-DE)结合基质辅助的激光解吸离子化—飞行时间质谱(matrix assisted laser desorption/ionization-time of flight mass spectrometry,MALDI-TOF-MS)等蛋白质组学技术,对临床和病理上均发现有转移的HCC组织和未发生转移的HCC组织的全蛋白质差异表达谱进行分析,筛查在转移过程中发挥重要作用的差异蛋白分子。

选择在临床和病理上提示有转移和未发生转移的肝细胞癌组织各6例,提取肝癌组织总蛋白,应用非线性pH3～10,长24cm的固定pH梯度的IPG胶条和12.5%的SDS-PAG进行双向凝胶电泳分离总蛋白,每一例样本均分别进行2次双向电泳以保证重复性,用Image Master软件对两组的全蛋白质组表达谱进行差异分析。结果在相同条件下,转移组(M组)平均检测到1102±56(n=12)个
目的:探讨p38和p130蛋白的增龄表达变化与SAMP10小鼠快速老化伴脑萎缩病理特征的相关性,以及“益气调血,扶本培元”针法延缓衰老,改善学习记忆障碍的可能机理。 点击此处 方法:采用westernblotting技术,以快速老化伴学习记忆障碍模型小鼠SAMP10为研究对象,以正常老化小鼠SAMR1为对照,观察R1与P10在2、4、6、8、10、12月龄阶段海马和皮层中p38、p130表达的增龄变化,以及“益气调血,扶本培元”针法对8月龄SAMP10海马和皮层p38,p130表达的影响。 结果:1.正常对照R1可见,p38和p130在海马和皮层的表达随增龄均呈平稳上升趋势。 selleck中国 2.在P10海马和皮层中,p38表达总体上随增龄呈显著波动上升趋势;p130表达总体上随增龄呈显著波动下降趋势。两种蛋白变化初始期为4～6月龄,并于随后月龄持续存在波动现象。这与P10渡过生长期(4～6月龄)后出现明显衰老表型在时间上比较吻合。此外,两种蛋白的变化在时间上具有同步性,且变化趋势相反。因此p130和p38的增龄变化可能存在某种联系,并可能与SAMP10快速老化伴脑萎缩的形成直接相关。

3.在相同脑区不同月龄间,p38、p130含量变化在R1表现为差异小,变化平稳;而P10表现为差异大,变化剧烈。2月龄时R1和P10在海马、皮层两种蛋白的含量上就存在显著差别,推测这是导致后期两品系生物学差异的原因之一。 4.8月龄P10与R1相比,p38在P10海马和皮层表达普遍增高;p130在海马有所增高,而皮层明显降低。“益气调血,扶本培元”针法可全部和部分改善两种蛋白在P10两个脑区的含量,使之接近R1对照的水平。非穴虽有类似的改善现象,但作用不明显。 结论:p38和p130蛋白可能直接参与了SAMP10快速老化伴脑萎缩的形成过程。“益气调血,扶本培元”针法可以这两种信号途径上的关键蛋白为作用靶点,有效调节两者在海马和皮层的异常表达,从而起到延缓衰老,改善认知障碍的作用。
脑血管疾病损伤的脑保护与促进康复,降低致残率,恢复受损的机体功能仍是神经科学的前沿问题。目前临床上已知作用途径的治疗药物未能使脑病致残率获得有效降低。而“九五”、“十五”数项国家攻关课题研究显示了中药方剂及方中有效组分对脑损伤保护具有一定作用。 目的: 客观评价中药丹酚酸A对脑缺血损伤的神经保护效应,初步探讨丹酚酸A保护神经元的作用机制、可能途径和相关靶点,为研制中药神经保护制剂提供科学依据。 方法: 采用在体和离体相结合的综合评价方法,复制/建立大脑中动脉阻塞模型和缺氧/复氧损伤的细胞模型;以神经功能评分、脑梗塞指数、脑含水量、脑组织形态学等为评价指标,在体考察了丹酚酸A对急性脑缺血损伤的保护作用;集成流式细胞术、酶联免疫(ELISA)、RT-PCR等细胞分子生物学先进技术,以细胞活力、乳酸脱氢酶(LDH)、细胞存活率(台盼蓝排斥法)、早期凋亡率(FCM)、电镜超微结构、神经特异性烯醇化酶(NSE)/神经生长因子(NGF)、致炎因子(IL-1 β)作为评价指标,先后评价了丹酚酸A对缺氧/复氧损伤神经元和星形胶质细胞的作用;在此基础上,制备了星形胶质细胞四种条件培养液,对不同条件下中药干预星形胶质细胞产生的保护效应进行了比较和验证;最后以IL-1 β——p38MAPK——Bax为线索,对中药丹酚酸A神经保护作用的可能途径和相关靶点进行了初步探讨。 结果: 1 丹酚酸A能够明显改善急性脑缺血大鼠的神经行为缺损症状,显著减小梗塞指数,减轻脑水肿,且低剂量组(2.