01),MZF1-SiRNA组组DNA合成能力显著低于SiRNA组(SW480中P<0.01),MZF1-SiRNA组Ki67荧光强度显著低于SiRNA组(P<0.01)。我们对10例临床结直肠癌患者的肿瘤组织和正常组织中的MZF1和p55PIK的表达进行了检测和分析,结果显示,肿瘤组织中MZF1和p55PIK的表达显著高于正常组织(P
研究背景 胰岛素瘤是最常见的胰腺内分泌肿瘤,占功能性胰腺内分泌肿瘤的70-80%,但由于其年发病率仅为4/百万,病例资源的稀缺导致临床医师对其临床特点及生物学行为认识不够透彻,并且也大大限制了对其发病机制的基础研究,国内外尚无关于其发病危险因素的大样本量流行病学调查,其发病、演进及转移机制目前仍不明了。近年研究发现哺乳动物雷帕霉素靶蛋白mTOR参与多种肿瘤的发生及进展,并且PRAS40在其中发挥重要的调节作用,mTOR/PRAS40/P70S6K信号转导通路是否参与胰岛素瘤的发病,PRAS40表达水平是否对mTOR活性及胰岛素瘤增殖产生影响,目前仍不明了。 目的 (1)探索胰岛素瘤发病危险因素及高危人群；

(2)了解mTOR/P70S6K通路在胰岛素瘤组织中活化、表达情况； (3)观察mTOR及PI3K/mTOR双重抑制剂对mTOR通路活性及对胰岛素瘤细胞增殖、胰岛素分泌功能及凋亡的影响； (4)探讨PRAS40表达水平对mTOR氵舌性及胰岛素瘤细胞增殖的影响。 方法 (1)对北京协和医院基本外科2000年1月至2010年1月期间收治的196例胰岛素瘤患者病历资料进行回顾性分析,并以同期收治的233例非肿瘤患者作为对照,进行以医院为基础的病例-对照研究,采用单因素及多因素分析方法评价环境因素、生活方式、家族史等相关危险因素是否与胰岛素瘤发病存在关联及联系程度大小； (2)采用RT-PCR法观察mTOR及P70S6K 为什么 mRNA在胰岛素瘤及正常胰腺组织的表达情况,另外用免疫组织化学及Western blottting方法,观察p-mTOR及p-P70S6K在胰岛素瘤组织及正常胰腺组织中的表达差异； (3)分别使用mTOR抑制剂(雷帕霉素)及PI3K/mTOR双重抑制剂(NVP-BEZ235)干预胰岛素瘤INS-1细胞,RT-PCR及Western blotting观察抑制剂对该通路关键基因及蛋白表达影响,并采用MTT、流式细胞仪检测增殖及凋亡、葡萄糖刺激胰岛素分泌实验(GSIS)等方法评价两种抑制剂对胰岛素瘤细胞增殖、胰岛素分泌功能及凋亡等影响； (4)使用PRAS40-siRNA瞬时转染INS-1细胞,Taqman Real time PCR法了解PRAS40沉默效果,Western blotting观察其对nTOR及P70S6K磷酸化水平的影响,MTT比色法观察下调PRAS40表达对INS-1细胞增殖的影响。 结果 (1)农村人口(OR=4.950,P
多药耐药是癌细胞对多种结构和功能不相关的化疗药物都存在耐药性的一种现象。乳腺癌在临床治疗中经常产生多药耐药。米托葸醌(mitoxantrone,MXT)是一种常用的临床治疗乳腺癌的化疗药物,其主要机制为抑制拓扑异构酶Ⅱ,从而阻碍DNA合成与修复,导致乳腺癌细胞周期阻滞于S和G2/M期。已有大量文献报道PI3K/Akt信号通路与细胞生长和抗凋亡有关,抑制PI3K/Akt信号通路能诱导细胞死亡、增加肿瘤细胞对化疗药物的敏感性。LY294002和Wortmannin是两种常用的PI3K抑制剂,被广泛用于PI3K在细胞内的功能研究。现有文献表明利用LY294002或Wortmannin联合化疗药物能逆转磷酸化糖蛋白(P-glycoprotein,P-gP)和多药耐药相关蛋白(multidrug

时间 mTOR抑制剂 resistance associated proteins,MRPs)介导的多药耐药。 本论文主要研究磷脂酰肌醇(-3)激酶(PI3K)抑制剂对乳腺癌耐药蛋白(breastcancer resistance protein,BCRP)介导的乳腺癌耐药细胞株MCF-7/MXT对MXT的耐药的逆转作用。MCF-7/MXT细胞是高表达乳腺癌耐药蛋白的耐药细胞株,是利用MXT浓度梯度对敏感细胞株MCF-7进行筛选而获得。 本研究应用多项实验技术检测多种指标:MTT法检测PI3K抑制剂与MXT单独或共同作用时乳腺癌敏感株MCF-7或耐药株MCF-7/MXT的细胞活性;流式细胞术检测敏感株MCF-7或耐药株MCF-7/MXT细胞内MXT的积聚与外排、线粒体膜电位及细胞周期分布;Western

blot检测细胞凋亡相关信号通路。 本研究发现wortmannin不能增加耐药株MCF-7/MXT对MXT的敏感性,而LY294002却能显著地逆转MCF-7/MXT对MXT的抗性(P＜0.01)。Wortmannin对MCF-7/MXT细胞内MXT的积聚、外排,线粒体膜电位及细胞周期分布都没有影响。LY294002使MXT对MCF-7/MXT的半抑制率减少了35.4倍。在LY294002的共同作用下,MCF-7/MXT细胞二小时MXT的积聚增加了14倍,1小时的外排减少了4倍。MXT单药作用会引起MCF-7/MXT细胞显著的G2/M期和轻微的S期阻滞,LY294002单药作用会引起G0/G1期阻滞,而MXT和LY294002联合作用96小时,导致MCF-7/MXT细胞明显的S和G2/M期阻滞。MXT或LY294002单独处理MCF-7/MXT细胞24小时都不会引起细胞线粒体膜电位下降,而联合处理24小时却显著地降低了细胞线粒体膜电位。LY294002的作用导致了PI3K下游靶点Akt磷酸化即活性的下降。在LY294002与MXT联合作用下,caspase 8,9,3,7及PARP的活性都有不同程度的增加。LY294002与MXT单独或联合作用都导致了Bcl-2表达明显的下调。 由此可见,LY294002可能通过抑制PI3K活性和BCRP外排MXT的功能,激活细胞内与细胞外依赖性两条细胞凋亡信号通路,从而逆转MCF-7/MXT细胞对MXT的耐药。同为PI3K抑制剂,wortmannin却不能增加MCF-7/MXT对MXT的敏感性,其原因可能是wortmannin在溶液中的半衰期只有4至6小时,也可能与其分子结构不能抑制BCRP外排MXT有关,或与LY294002在细胞内还有其它功能有关,如抑制钙、钾离子通道、DNA依赖性蛋白激酶、钙蛋白激酶等等。LY294002与MXT联合作用具有良好的临床研究与应用价值。
1.