0统计软件包对数据进行分析,以P0.05)。 2、Western-Blot方法检测转染后胃癌MKN-45细胞c-Met蛋白、p-PI3k蛋白和p-AKT蛋白的表达较未转染组明显下降(P0.05)。 结论： 1、三条c-Met-siRNA有效地沉默胃癌MKN-45细胞c-Met基因,减少c-MetmRNA及c-Met蛋白的表达。 2、沉默胃癌MKN-45细胞c-Met基因后,减少了下游PI3k/AKT信号通路磷酸化信号分子的数量,对非磷酸化分子的表达无明显的影响。
前言：肺癌是常见的恶性肿瘤之一。对于中晚期及术后复发的肺癌患者,化疗是其重要的的治疗手段。然而,肺癌对以铂类为基础的经典化疗方案容易产生耐药,导致化疗效果不佳。因此,研究肺癌化疗耐药机制具有重要意义。许多研究表明,成纤维细胞生长因子2(Fibroblast STI571核磁共振 growth
factor2, FGF-2)可通过抑制细胞凋亡,参与多种肿瘤耐药的发生,但具体机制不清。最新研究发现,成纤维细胞生长因子受体1(Fibroblast growth factor receptor1, FGFR1)在肺鳞癌中出现特异性基因扩增,FGFR1基因可能是肺鳞癌治疗的靶点。FGFR1的生物活性主要是通过与高亲和性配体FGF-2结合而发挥作用。因此,充分认识FGF-2及FGFR1基因在肺鳞癌中的作用及其机制具有重要的意义。此外,研究显示硫氧还蛋白(thioredoxins, TRX)参与多种肿瘤发生发展。然而TRX是否参与FGF-2介导的对肺鳞癌细胞凋亡的调控,目前尚无相关报道。 目的：(1)探讨FGF-2对肺鳞癌细胞SK-MES-1中TRX表达的影响。(2)探讨FGF-2对肺鳞癌细胞SK-MES-1中顺铂诱导凋亡的影响。(3)探讨TRX在FGF-2调控肺鳞癌细胞SK-MES-1凋亡中可能的作用。 方法：(1)应用Western blot检测FGF-2分别以不同浓度(0、5、10、25、50、75ng/m1)、不同时间(0、4、8、12、24h)作用后,SK-MES-1细胞中TRX的蛋白表达水平,确定FGF-2作用的最佳浓度和时间。(2)应用RT-PCR检测SK-MES-1细胞中TRX的mRNA表达水平。(3)MTT法测定SK-MES-1细胞中顺铂的半数抑制浓度IC50(inhibition concentration50%)(4)分析FGF-2对SK-MES-1细胞凋亡的影响,应用Western
blot检测TRX、PARP蛋白表达水平；应用免疫荧光化学检测TRX在细胞内的定位和相对定量；Ac-DEVD-pNA法检测caspase-3酶活性；流式细胞术检测细胞凋亡；RT-PCR检测TRX mRNA的表达水平。(5)应用脂质体法将TRX-siRNA转染入SK-MES-1细胞,荧光显微镜观察转染效率；Western SB590885溶解度 blot检测TRX-siRNA抑制效率；Annexin
Ⅴ-FITC/PI染色、流式细胞术检测细胞凋亡。 结果： http://www.selleckchem.cn/products/Temsirolimus.html (1)FGF-2以不同浓度作用于SK-MES-1细胞,10ng/ml FGF-2作用组中TRX表达明显上升,为对照组的(1.894±0.08)倍(P0.05)。FGF-2可能在转录后水平上调SK-MES-1细胞中TRX的表达。 (4)以0、3、10、30、75、150、300mg/L DDP作用于SK-MES-1细胞24h,SK-MES-1细胞存活率随DDP浓度增加而下降,作图估算作用于SK-MES-1细胞24h时DDP的IC50,约为30mg/L。 (5)FGF-2可明显抑制SK-MES-1细胞中caspase-3的活性及caspase-3底物PARP的活化,抑制率分别为(54.13±1.57)%和(34.46±0.53)%(P<0.05)；FGF-2可明显上调TRX蛋白的表达(1.87±0.09)倍(P<0.05)；应用TRX-siRNA抑制TRX表达后,SK-MES-1凋亡增加,并可抑制FGF-2的抗凋亡作用,TRX-siRNA组凋亡率为正常对照组的(1.55±0.02)倍(P<0.05),TRX-siRNA+饥饿组凋亡率为饥饿组的(1.42±0.03)倍(P0.05) 结论： (1)FGF-2可上调肺鳞癌细胞SK-MES-1的TRX表达。 (2)FGF-2能抑制顺铂诱导的肺鳞癌细胞SK-MES-1凋亡。 (3)FGF-2可能通过上调TRX表达以抑制肺鳞癌细胞SK-MES-1的凋亡。
目的分析初治NSCLC患者的EGFR基因及K-ras基因的突变状态,为临床TKIs的用药提供参考。 方法收集中南大学各附属医院共93例NSCLC初治患者的病理组织标本,提取各标本DNA并通过聚合酶链反应(Polymerase chain reaction, PCR)进行扩增,采用焦磷酸测序法检测EGFR基因第19、20和21号外显子及K-ras基因第2号外显子的第12、13密码子的突变状态,并分析其突变状态与各临床病理特征的关系。 结果93例患者中,EGFR基因突变率为24.7%(23/93),而第19、20和21号外显子在23例EGFR基因突变患者中的突变率分别为56.5%(13/23)、8.7%(2/23)和39.1%(9/23),其中1例患者第19号与第20号外显子同时突变；K-ras基因突变率为6.5%(6/93),而第12、13密码子在6例K-ras基因突变患者中的突变率分别为66.7%(4/6)和50.