第二部分miR-29a靶向调控NLRP3抑制高糖下足细胞焦亡促进自噬并抑制凋亡的机制研究[目的]1.高糖下肾小球足细胞的焦亡、自噬及凋亡三者间的关系;2.在足细胞中验证所筛选的miRNA-29a-NLRP3靶向关系;3.观察miRNA-29a对高糖下足细胞焦亡、自噬及凋亡水平的调控。[方法]1.细胞培养传代、分www.selleck.cn/products/mk-4827-niraparib-tosylate.html化、同步化、转染及分组采用成熟的小鼠肾小球足细胞株(购自ATCC公司),细胞于含20U/ml γ-干扰素、5%胎牛血清1640培养基中,在33℃细胞培养箱中培养传代。然后将细胞转入不含γ-干扰素的5%胎牛血清1640培养基,37℃培养使足细胞分化10-14天后使用。种植于平皿的细胞在不已经含胎牛血清的DMEM培养液中培养24小时,使其同步化,根据不同的实验目的进行分组与设计。①足细胞中焦亡、自噬、凋亡调控关系正常对照组(5.5mM),高糖凋亡组(30 mM),高糖凋亡加NSA(焦亡抑制剂)组,高糖凋亡加3MA(自噬抑制剂)组,高糖凋亡加ZVAD-FMK(凋亡抑制剂)组。无细胞转染及分组,用脂质体2000转染miRNA-29a-mimics以及 negative control mimics。②用于靶点验证时,分为 miRNA-29a mimics、miRNA-29a negative control两组。③miRNA-29a过表达对调控足细胞的焦亡、自噬、凋亡及增殖能力,分为正常对照组、高糖组、miRNA-29a-mimics组。