研究确定了最佳反应体系(25μL中模板100 ng/μL,外引物F3/B3各0.2μmol/L,内引物FIP/BIP各1.2μmol/L, dNTPs 1.4 mmol/L, Mg2+6 mmol/L,甜菜碱0.8mol/L, Bst DNA polymerase 8 U/μL)和反应条件(最佳反应温度63℃,反应时间1 h)。特异性验SB-715992订单证结果显示,橡胶树褐根病病菌LAMP产物均呈阳性(绿色),而其他病原菌组织LAMP产物均为阴性(橙色)。灵敏度检测结果显示,该体系的DNA最低检测限为1 pg/μL,比常规PCR灵敏度高1 000倍。20株田间疑似褐根样本应用LAMP体系检测,其病原检出率为85%,而常规PCR检出率为70%或75%。本研究建立selleck产品的LAMP检测体系能有效用于橡胶褐根病疑似样本的快速检测,对及时科学的防控该病害具有重要意义。
目的探索和研究基于磁珠法适合高通量自动化提取血凝块DNA的方法。方法血凝块分割成小块,使用蛋白酶K在不同条件下进行消化,用DNA裂解液处理后比较血凝块的消化裂解率。使用磁珠法提取DNA,电泳分析DNA完VX-765临床试验整性。选择优化条件对48例样本各取两份进行自动化提取,分析提取效果。结果 4℃条件下使用蛋白酶K消化制备得到的条带完整,DNA产量较高。室温和37℃消化4小时所得DNA都出现一定降解,37℃下降解最严重。48例血凝块样本自动化提取两份,两份的单位质量DNA产量和总产量相关,表明提取方法稳定性好。结论 4℃条件下蛋白酶K消化处理血凝块可保证DNA的质量,结合自动化可简化人工操作,实现高通量提取。