消斑通脉合剂中药血清抑制VSMC增殖的作用与其具有诱导VSMC凋亡作用直接相关。通过降低Akt蛋白磷酸化的表达水平,影响其下游底物的抗凋亡作用,VSMC凋亡增加,进而起到抑制VSMC增殖。 4.消斑通脉合剂中药血清可通过多角度、多靶点抑制VSMC增殖,其作用机理符合现代分子生物学关于再狭窄机理的研究结果,可以作为临床再狭窄的防治药物。 5.再狭窄应用益气助阳、活血化瘀并用的治疗方法是切实可行的,符合中医辨证论治的理论思想。
第一部分ERK1/2 MAPK和p38 MAPK通路在iC3b结合的单核细胞向树突状细胞分化过程中的作用 目的：研究补体iC3b对人血前体单核细胞(Mo)分化的影响,进一步验证UVB诱导的补体iC3b沉积和CDla+树突状细胞(DC)消失之间的关系；探讨ERK1/2

(ERK44/42) MAPK和p38 MAPK信号传导途径是否参与此影响,相应的MAPK抑制剂是否能逆转这种影响；经iC3b及ERK1/2特异性抑制剂或p38特异性抑制剂预处理后的Mo对CD4+T细胞的作用是否与正常情况下分化的Mo不同。 方法：1)从健康人外周血通过免疫磁珠法分离前体Mo。EAiC3b (IgM-plus iC3b-coated sheep erythrocyte, IgM以及iC3b包被的羊红细胞)与人血前体Mo以及IL-4、GM-CSF共同培养2天,并与EA(IgM coated sheep erythrocyte, IgM包被的羊红细胞)作对照,用流式细胞仪检测EAiC3b对前体Mo分化的影响(CD14+,CDla+); Selleck Inhibitor Library Western blot检测磷酸化ERK1/2、p38 MAPK的蛋白水平,ELISA法检测IL-10、IL-12p70水平。2)上述培养过程中加入ERK1/2 MAPK抑制剂(PD98059)、p38 MAPK抑制剂(SB203580)预处理后,磷酸化ERK1/2、p38 MAPK和IL-10、IL-12p70水平的水平,以及DC数量的变化。3)CD4+T细胞增殖实验：Mo经PD98059(或SB203580)和EAiC3b预处理后,与IL-4、GM-CSF共培养6天经60Co照射后作为刺激细胞,同时分离同种异体人外周血CD4+T作为反应细胞,共培养5天后,经3H—掺入法检测CD4+T细胞增殖反应。

一般 结果：1)相比EA组结果,EAiC3b的加入使Mo向CDla+DC方向的分化受到抑制,表现为CDla+的表达明显降低,磷酸化—ERK1／2 MAPK的表达增加,磷酸化—p38 MAPK的表达降低,IL-12p70的水平降低,IL-10的水平增加,CD4+T细胞增殖减弱。2)前过程中加入PD98059预处理后,相比EAiC3b结果,则促进了Mo向CDla+DC方向的分化成熟,表现为CDla+的表达明显增加,磷酸化—ERK1／2 MAPK的表达降低,IL-12p70的水平增高,IL-10的水平降低,CD4+T细胞增殖明显提高。3)细胞经SB203580预处理后,相比EAiC3b结果,Mo向CDla+DC方向的分化成熟被进一步抑制,表现为CDla+的表达降低,磷酸化—p38 MAPK的表达降低,IL-12p70的水平稍有降低,IL-10的水平略有增高,CD4+T细胞增殖有所下调。 结论：1)紫外线引起的补体iC3b的沉积是引起CDla+DC消失的重要原因；2) ERK1／2 MAPK抑制剂PD98059可显著逆转这种现象,促进前体Mo向CDla+DC的分化,而p38 MAPK抑制剂SB203580则进一步抑制CDla+DC的分化成熟；3)经iC3b作用的Mo对CD4+T细胞的增殖能力明显减弱,PD预处理后可显著恢复,SB预处理后加强这种抑制。

第二部分：ERK1/2 MAPK抑制剂PD98059可明显逆转UVB诱导的小鼠皮肤局部免疫抑制,未观察到SB203580对迟发性高敏反应的抗炎作用 目的：在UVB诱导局部免疫抑制动物模型的基础上,观察外涂PD9059能否逆转该现象,以证实ERK1/2 MAPK在免疫抑制中的关键作用,为开发防光剂提供新的思路；在接触性高敏反应动物模型的基础上,观察外涂SB203580观察能否抑制炎症反应,为抗炎剂作基础。 SP600125购买 方法：建立UVB诱导局部免疫抑制的小鼠模型,即UVB 8 kJ/m2昭射Balb/c小鼠腹部去毛皮肤后3天,在相同区域外涂25μ10.5%DNFB致敏,5天后测量基础右耳廓厚度并在相同耳背处外涂10μ10.2%DNFB激发,24小时后测量耳廓厚度并取右耳组织做HE病理。PD研究：UVB曝光前1小时(A组),曝光同时(A组),曝光后6小时(C组)外涂PD98059,余步骤同前,检测耳肿反应及HE染色。SB研究：小鼠腹部去毛皮肤外涂不同浓度的SB203580,6小时后相同皮肤处外涂25μ10.5%DNFB致敏,5天后测量基础右耳廓厚度并在耳背皮肤外涂10μ10.2%DNFB激发,24小时后再次测量耳廓厚度并取耳组织做HE病理染色。各组均设对照。 结果：PD研究：UVB 8 kJ/m2及其以上剂量可引起局部免疫抑制,在此基础上,光照后6小时外涂PD98059组(C组)可部分逆转UVB诱导的局部免疫抑制,表现为和对照组相比,耳肿反应有显著性差异(P0.