方法体外培养人Burkitt淋巴瘤Raji细胞,用不同浓度的塞来昔布进行干预。应用MTT比色法检测Raji细胞生长情况;流式细胞术分析塞来昔布对Raji细胞周期的影响并检测细胞凋亡及Survivin蛋白在细胞中的表达情况;应用RT-PCR法检测Raji细胞中Survivin mRNA的表达水平。结果塞来昔布对Raji细胞生长具有抑制作用,且在12.5～150μ临床试验mol/L范围内呈时间、剂量依赖性;流式细胞术检测出典型的凋亡峰,凋亡率(9.20±0.19)%～(44.63±1.34)%;塞来昔布使Raji细胞G0/G1期细胞数增多,S和G2/M期细胞数减少,凋亡率和细胞周期分布呈量效依赖关系;塞来昔布下调Raji细胞中Survivin蛋白和Survivin mRNA的表达。结论塞来昔布抑制Ra也ji细胞增殖、诱导其凋亡可能与阻滞细胞周期和下调Survivin表达有关,这可能是其抗肿瘤的非COX-2依赖性途径之机制。”
“目的阐明细菌内毒素细菌脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)是否影响紧密连接蛋白claudin-11的表达及其分子机制。方法表达claudin-11基因的原代培养人皮肤成纤维细胞,加入纯化的点击此处LPS或核转录因子κB(NF-κB)特异性抑制剂MG132或p38丝裂原活化蛋白激酶(p38MAPK)抑制剂SB203580后,利用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和蛋白免疫印迹方法检测claudin-11基因mRNA和蛋白质表达水平变化,利用细胞免疫荧光染色法检测NF-κB核转移。结果LPS细胞膜受体TLR4在人皮肤成纤维细胞表达;2μg/ml LPS能提高claudin-11基因mRNA和蛋白质的表达水平。