实时荧光定量PCR法检测外泌体中miR-196b-5p的表达水平。用外泌体处理小鼠结肠癌CT26 WT细胞,并用实时荧光定量PCR

实时荧光定量PCR法检测外泌体中miR-196b-5p的表达水平。用外泌体处理小鼠结肠癌CT26.WT细胞,并用实时荧光定量PCR法检测细胞中miR-196b-5p的表达水平;随后采用不同质量浓度的5-氟尿嘧啶(5-fluorouracil,5-Fu)(0、1.0、1.5和2.0 mg/Selleckchem AR-13324mL)处理外泌体处理后的CT26.WT细胞,MTT法检测5-Fu处理24和48 h后对细胞活力的影响,FCM法检测对细胞凋亡率的影响;蛋白质印迹法检测CT26.WT细胞中多药耐药蛋白(multidrug resistance,MDR)、多药耐药相关蛋白(multThiazovivin molecular weightidrug resistance-associated protein,MRP)、肺耐药相关蛋白(lung resistance-related protein,LRP)以及磷脂酰肌醇-3激酶(phosphoinositide-3 kinase,PI3K)-蛋白VX-809小鼠激酶B(protein kinase B,PKB,又称AKT)通路相关蛋白的表达水平。结果 成功获得miR-196b-5p高表达(或低表达)的BMSCs分泌的外泌体。随着5-Fu浓度的提高,各组CT26.WT细胞的活力均明显降低,凋亡率增加(P值均<0.01),其中以miR-196b-5p过表达组CT26.WT细胞的活力最低,细胞凋亡率最高。

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