通过分析不同参数下使用水热法制备出的掺锶种植体表面的表征,推导掺锶纳米表面形成的机理。 2.通过体外细胞实验,研究掺锶种植体和非掺锶种植体对前成骨细胞、骨髓间充质干细胞增殖、分化以及体外成骨的影响。 也许 3.通过体内植入实验,研究掺锶和非掺锶种植体周围早期骨组织形态学改变及对骨髓间充质干细胞行为的影响。 研究方法： 1.根据不同的Sr(OH)2水热液浓度、水热温度、时间制备出一系列掺锶二氧化钛种植体表面。使用扫描电镜、透射电镜、X射线衍射、X射线光电子能谱分析、接触角等方法分析掺锶二氧化钛种植体表面的表征。 2.在掺锶种植体和非掺锶种植体表面培养前成骨细胞(MC3T3-E1)及骨髓间充质干细胞(BMSC),一定时间点下检测增殖能力、粘附能力、碱性磷酸酶(ALP)活性、骨钙素(OC)释放、关键成骨基因表达、钙盐沉积量来评价体外细胞在不同表面的增殖和分化能力。 3.掺锶种植体和非掺锶种植体植入SD大鼠股骨干骺端,6天后取出,扫描电镜下观察种植体表面形貌,种植体周骨组织进行HE染色及Stro-1免疫组化标记,分析早期骨愈合能力及不同种植体对骨髓间充质干细胞招募的影响。 结果： 1.水热液浓度、水热温度、时间可显著影响种植体表面形貌和表面物质成分、晶型。 2.掺锶种植体可释放锶离子长达一周以上,与非掺锶种植体相比可显著的促进细胞分化,上调成骨相关基因的表达,增加体外钙盐沉积(P
丝裂原激活蛋白激酶(MAPKs)也称为细胞外信号调节蛋白激酶(ERKs)是一种细胞质/细胞核内丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶,可以将细胞的胞外信号转导至胞内引起细胞反应的一类重要信号系统。在哺乳动物中,ERKs广泛参与细胞生长、分化、生殖、凋亡、应激等多种生理过程。在雄性生殖方面,ERKs参与调节精子发生、精子活力、超活化和顶体反应。为了探究ERKs在中华绒螯蟹生殖相关功能的调节作用,我们从成功中华绒螯蟹的精巢中获得了ES-ERK基因cDNA全长序列。ES-ERK基因的ORF为1098bp,编码365个氨基酸,相对分子量大小约为42KD。生物信息学分析发现ES-ERK蛋白具有ERK
ATM激酶抑制剂溶解度 MAPK蛋白激酶结构域,在结构域内存在ES-ERK蛋白特有的双磷酸化位点T-E-Y基序。系统进化树分析发现,ES-ERK蛋白首先与拟穴青蟹等非脊椎动物聚类,再与脊椎动物依次聚类,符合生物学进化的规律。实时荧光定量PCR和western blotting检测分析发现ES-ERK在中华绒螯蟹不同组织和不同发育阶段的精巢中均有表达。与其他组织相比,ES-ERK在精巢中的表达量相对较高。在不同发育阶段的精巢中,ES-ERK的表达量在精细胞期逐渐增加,在成熟精子期达到峰值。Western
blotting检测ES-ERK总蛋白有类似的表达情况,而磷酸化的ERK BI 6727分子重量 (p-ERK)则在精细胞期的表达量高于精子期。这表明,ES-ERK可能与精子成熟相关。利用免疫荧光检测发现,p-ERK和ERK均分布在中华绒螯蟹输精管内成熟精子的细胞核及头帽处。此外,我们用台盼蓝和苏木精曙红染色以确定中华绒螯蟹顶体反应过程(AR)精子的结构变化。整个顶体反应分为四个阶段：1)头帽凸起阶段；2)顶体囊外翻阶段；3)顶体管前伸阶段；4)完成顶体反应阶段。体外诱导发生AR后,我们发现ES-ERK在整个过程中均有分布,且ES-ERK由精子的细胞核移位到顶体管尖端。这个结果表明了ERK MAPK可能参与了中华绒螯蟹精子顶体反应的调节作用。
研究目的:观察在泡球蚴肝脏组织中Smad2和P38MAPK的表达,并分析二者在肝纤维化进程中的作用及其相互关系。研究方法:将20例经手术治疗的肝泡状棘球蚴病肝组织匹配后分为两类:邻近病变的组织(即病灶旁)与正常肝组织。利用IHC的方式检测Smad2及P38MAPK的表达情况。苏木素-伊红和马松染色,光镜下观察病理改变与肝纤维化程度。结果:1,泡球蚴肝脏病灶旁组织比正常肝组织纤维化程度高。2,Smad2和P38MAPK在病灶旁组织均比正常肝组织的表达明显较高。3,Smad2和P38MAPK无论在正常肝组织,病灶肝组织,还是整个肝组织中,其表达水平均与纤维化程度正相关;随着纤维化程度的加重,Smad2和P38MAPK的表达水平也都相应增加。4,病灶旁组织中Smad2和P38MAPK的表达成正相关。结论:1,泡球蚴肝脏病灶旁组织比正常肝组织纤维化程度明显严重。2,Smad2和P38MAPK均介入泡球蚴引起肝纤维化的机制中。3,在病灶旁组织中,P38MAPK参与调控对Smad2的正向调节。
MAPK
(Mitogen-activated protein kinases)信号通路是真核生物信号传递网络中的一条重要的途径。P38 MAPK信号通路是MAPK四条信号通路之一,由一系列丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶组成,具有响应炎症因子等外界刺激的重要作用。在哺乳动物的研究中已经证实,p38 MAPK信号通路在调控细胞周期、细胞分化、细胞凋亡、囊胚发育、炎症反应和肿瘤细胞的生长迁移等生理过程中发挥了重要作用。本文以中华绒螯蟹(Eriocheir sinensis)精巢和副性腺转录组数据中获得的p38基因部分片段为基础,采用RACE技术对5’端和3’端序列分别进行克隆,通过序列拼接首次获得了中华绒螯蟹p38基因(E.