蜂胶保护T2DM大鼠肾脏的作用机理 在实验第8周用激光多普勒血流仪测定T2DM模型大鼠肾脏血流动力学指标,实验结束后取T2DM模型大鼠肾脏组织,测定相关指标。 1)炎症反应：中国蜂胶和巴西蜂胶均能降低T2DM大鼠血清CRP含量,巴西蜂胶效果显著,这表明蜂胶能改善T2DM大鼠炎症现象；中国蜂胶和巴西蜂胶均能减轻T2DM大鼠肾脏炎症程度,其中中国蜂胶能有效降低糖尿病大鼠肾脏中IL-2、IL-6和TNF-α含量,巴西蜂胶能有效抑制糖尿病大鼠肾脏中TNF-α含量的增加及MCP-1 mRNA表达；2)肾脏血流动力学：中国蜂胶能明显改善T2DM大鼠肾脏血流动力学异常现象,升高肾脏血流量,并降低肾脏血管阻力值和过滤分数,巴西蜂胶则效果不明显；3)PKC表达：与正常组相比,T2DM大鼠肾脏PKC
mRNA表达明显增加。中国蜂胶和巴西蜂胶能明显抑制T2DM大鼠肾脏PKC mRNA表达；4)TGF-β1表达：免疫组化染色和图像分析结果显示,模型组大鼠肾脏TGF-β1表达明显高于正常组。蜂胶和阳性药能降低大鼠肾脏TGF-β1表达的总光密度、平均光密度和阳性指数,其中巴西蜂胶和阳性药效果显著,而中国蜂胶效果不显著,巴西蜂胶效果优于中国蜂胶而与与阳性药相当。 MS-275化学结构 综上所述,中国蜂胶和巴西蜂胶能有效改善T1DM和T2DM对大鼠造成的损伤。两种蜂胶均能抑制糖尿病大鼠体重下降,改善大鼠血液糖代谢、脂质代谢、蛋白代谢以及血液、肝、肾氧化应激。通过测定肝肾功能相关指标及组织切片观察结果表明,蜂胶能改善糖尿病大鼠肝肾功能。比较中国蜂胶和巴西蜂胶的效果发现,中国蜂胶对血糖的控制效果和肝脏的保护效果略优于巴西蜂胶,而巴西蜂胶改善氧化应激的效果要略优于中国蜂胶。同时,通过测定肾脏组织炎症反应、血流动力学、PKC和TGF-β1,初步探明了蜂胶改善糖尿病肾病的作用机理。
研究背景和目的： 肝纤维化是肝损伤后的修复反应,主要特征为肝星状细胞(hepatic stellate cells,HSCs)活化及细胞外基质(extracellular matrix,ECM)过度沉积。早期肝纤维化是可以逆转的,因此对肝纤维化早期始动机制的研究具有重要意义。活化蛋白-1(active protein-1,AP-1)是一种与组织纤维化密切相关的转录调控因子,它可以在转录水平调节胶原基因的表达：还可以调控转化生长因子-β1(transforming
growth factor-beta,TGF-β1).组织基质金属蛋白酶抑制剂-1(tissue inhibitor metal proteinase,TIMP-1)等促纤维化细胞因子的表达。可见AP-1是一种与ECM合成、降解密切相关的转录因子。然而目前对AP-1在肝脏纤维化中的表达研究尚少,对于AP-1在肝脏纤维化进程中介导细胞外基质表达的分子机制亦不十分清楚。 Selleck RO4929097 血小板衍生生长因子(platelet derived growth factor,PDGF)是已知最强的HSCs有丝分裂剂。PDGF通过与其受体(PDGF receptors,PDGFR)结合启动下游蛋白的级联磷酸化反应来发挥生物学效应。近年来对PDGF/PDGFR的信号转导途径有许多新的发现。有研究表明,在人肾小球系膜细胞,PDGF-BB可以通过MAPK/AP-1信号途径来诱导靶基因表达；在SD大鼠的血管平滑肌细胞,PDGF-BB可以诱导AP-1的DNA结合活性。但目前对PDGF-BB信号通路在肝纤维化体内实验中与MAPK/AP-1信号通路的关系尚无明确报道。 本研究采用CCl4诱导的大鼠肝纤维化模型,观察：1)中药肝复康对肝纤维化大鼠肝功能和肝组织形态学的影响；2)肝复康对AP-1在肝纤维化大鼠肝组织中表达的影响;3)PDGF-BB/PDGFRp和MAPK/AP-1信号通路在大鼠肝纤维化模型中的关系及肝复康对二者表达的影响。
方法： SD大鼠,随机分为正常对照组、12周模型组(12w)、20周模型组(20w)、肝复康高、中、低剂量治疗组和预防组。除正常对照组,其余组大鼠皮下注射以橄榄油稀释的10%的CCl4(0.5 mg·kg-1),每周2次,共12周；正常对照组注射同体积CCl4溶媒。肝复康预防组从CCl4注射第1周开始,给予肝复康(312.5 RAD001购买 mg·kg-1·d-1,po)；第12周末,将12w模型组和肝复康预防组处死。肝复康高、中、低剂量组从CCl4注射第9周开始,分别给予肝复康高、中、低剂量(3125、312.5和31.25mg·kg-1·d-1,po)；第20周末,将20w模型组和肝复康高、中、低剂量治疗组处死。采集大鼠血及肝组织。赖氏法测血清ALT和AST活性；溴甲酚绿比色法测白蛋白；考马斯亮蓝比色法测球蛋白。HE染色观察肝组织形态结构变化。双盲法采用Ishak评分系统对肝脏纤维化程度进行组织学评估。 免疫组织化学法观察c-Fos.c-Jun.PDGF-BB.PDGFRβ和α-SMA蛋白在肝组织的表达；逆转录-聚合酶链反应(reverse transcription polymerase chain reaction,RT-PCR)法测定c-fos.c-jun.PDGF-BB. PDGFRβ.TIMP-1和α1(Ⅰ)型前胶原基因的表达水平；电泳迁移率变动分析(Electrophoretic mobility shift assay,EMSA)测定AP-1的DNA结合活性；免疫蛋白印记(Western blot)检测p-ERK1/2.p-JNK1/2. p-p38MAPK.