结果(1)Western blotting实验发现GCH1沉默激活了p38信号;同时,RT-qPCR实验发现GCH1沉默之后,p38信号正向调节的下游基因的mRNA表达水平显著上调。(2)SB203580抑制了p38信号的激活,并且逆转了GCH1沉默所带来的促增殖效应。(2)RNAi实验发现沉默p38α或p38γ会抑制肝癌细胞的增殖;同时沉默p38α和p38γ会逆转GCH1RXDX-101订单沉默所带来的促增殖效应。(3)Western blotting实验发现GCH1沉默上调了ASK1的磷酸化水平;在使用selonsertib抑制ASK1信号后,p38信号也受到显著抑制。结论GCH1沉默通过激活ASK1/p38信号通路来促进肝癌细胞的增殖。第五部分O_2~(·-)的增加是GCH1沉默激活ASK1/p38信号通路的中间环节背景和目的上述Selleck Protease Inhibitor Library实验表明GCH1沉默通过激活ASK1/p38信号通路来促进肝癌细胞的增殖。本部分拟探讨GCH1沉默是如何激活ASK1/p38信号通路的。方法(1)我们使用Western blotting来检测BH4对ASK1/p38信号通路的影响。(2)我们使用DHE荧光探针检测BH4对细胞内O_2~(·-)水平的影响。(3)我们使用氧自由基清除剂NAC来进行回复PD98059DMSO溶解度实验,以明确O_2~(·-)水平的增加是否介导了GCH1沉默所致的ASK1/p38信号的激活。结果(1)Western blotting实验发现(1)Western blotting实验发现BH4以剂量依赖的方式抑制了ASK1/p38信号通路的激活。(2)GCH1沉默会通过抑制BH4的从头合成来上调细胞内O_2~(·-)水平。(3)回复实验显示O_2~(·-)水平的增加介导了GCH1沉默所致的ASK1/p38信号通路的激活。